小鼠乳清酸蛋白启动区指导人促红细胞生成素在转基因小鼠乳腺的表达

以小鼠乳清酸蛋白基因 (mWAP)调控区与人促红细胞生成素基因 (hEPO)构建融合基因 ,经动物个体暂态表达方法确证hEPO可在乳腺特异表达后 ,用显微注射方法将融合基因导入小鼠受精卵 ,再将受精卵移植到假孕小鼠 ,获得 86只G0 代小鼠 ,经PCR Southernblot及Southernblot证实 ,有 5 8只整合阳性小鼠 ,整合率为 6 7% ,ELISAkit,dotELISA等方法检测小鼠39只 ,有 1 6只表达阳性 ,乳汁中人hEPO的表达量高于 1 5 μg/mL .     

小鼠乳清酸蛋白启动区指导人促红细胞生成素在转基因小鼠乳腺的表达

以小鼠乳清酸蛋白基因（ｍＷＡＰ）调控区与人促红细胞生成素基因（ｈＥＰＯ）构建晤基因，经动物个体暂态表达方法确证ｈＥＰＯ可在乳特异表达后，用显微注射方法将融合基因导入小鼠受精卵，再将受精移植到假孕小鼠，获得８６只Ｇ０代小鼠，经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，有５８只整合阳性小鼠，整合率为６７％，ＥＬＩＳＡｋｉｔ，ｄｏｔＥＬＩＳＡ等方法检测小鼠３９只，有１６只表达阳性，     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长cDNA克隆pB_aS_1C184经Bgl Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,回收其中的酪蛋白基因编码片段,与经BamH Ⅰ、SmaⅠ双酶切的植物表达载体pBI121.2分两步连接:第一步载体的BamHⅠ末端与酪蛋白基因的BglⅠ粘性末端连接;第二步用T_4DNA多聚酶补平酪蛋白基因的EcoR Ⅰ末端,再与载体SmaⅠ进行平末端连接而环化,转化JM109菌株,从得到的33个转化子中,通过~(32)P标记的酪蛋白cDNA基因为探针,点杂交筛选到一个阳性克隆。经酶切鉴定,确认酪蛋白cDNA基因编码区已正确插入到pBI121.2中。     

牛αs1酪蛋白／HBsAg基因在山羊乳腺中暂态表达

采用显微外科的方法将牛αｓ１－酪蛋白基因和人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因组成的融合基因（λ２０７）与介导蛋白一起导入产前、产后山羊乳腺，或经人工诱导泌乳处理的成年线山羊乳腺，产生乳腺转基因山羊。ＰＣＲ基因扩增检测２只乳腺转基因后的小母羊，在基因导入后的６ｄ和２９ｄ分别在乳腺等吕存在的外源基因。经酶联免疫ＥＬＩＳＡ检测，１２只不同生理状态下乳腺转基因母山羊在其泌乳的第１￣１９天的乳汁中存在表达     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长ｃＤＮＡ克隆ｐＢａＳ１ｃ１８４Ｘ ＧＬⅢ和ＣＯｒＩ双酶切，回收基中的酪蛋白基因编码片段，与经ＢａｍＨＩ，ＳｍａＩ双酶切的植物表达载体ｐＢＩ１２．１２分两步连接；第一步载体的ＢａｍＨＩ末端与酪蛋白基因的ＢｇｌⅡ粘性末端连接；第二步用Ｔ４ＤＮＡ多聚酶补平酪蛋白基因的ＥｃｏＴＲⅠ末端，再与载体ＳｍａⅠ进行平末端连接而环化。     

由胎儿成纤维细胞而来的克隆山羊(Capra hircus)

哺乳动物的克隆是国内外科学研究的热问题。用体外培养的胎儿成纤维细胞作供体细胞不仅可以研究发育生物学中发育与分化的理论问题，而且与早期胚胎细胞作供体细胞相比，大大增加了供体细胞的数量。