SX1近交系小鼠遗传纯度的初步研究

目的初步鉴定山西省肿瘤研究所第22代SX1近交系小鼠遗传纯度。方法应用生化基因位点遗传质量检测法和皮肤移植测试法对山西省肿瘤研究所自行培育的第22代昆明近交系小鼠进行了遗传纯度的初步鉴定。结果所检测的6只近交系小鼠的13个生化位点均未发现杂合基因型,所检基因位点全部纯合;所检测的10只近交系小鼠异体间未发现急性排斥现象。结论初步判定山西省肿瘤研究所自行培育的第22代昆明近交系小鼠在遗传质量上符合国标有关实验动物遗传质量检测的要求。     

HO-1超表达载体的构建及其对膀胱癌T24细胞的影响

血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达与肿瘤的生长、凋亡和增殖有密切关系。课题组前期的数字基因表达谱结果显示,巴西苏木素处理膀胱癌T24细胞后,HO-1表达显著提高,提示其可能在这一过程中发挥重要作用。为进一步研究HO-1对T24细胞的影响及其是否为巴西苏木素作用于T24细胞的靶标基因,利用Real-Time quantitative PCR(qPCR)验证巴西苏木素处理T24细胞后HO-1基因表达量的变化,克隆HO-1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-HO-1,将该载体转染T24细胞,MTT法检测HO-1超表达后T24细胞的活性变化。结果显示,HO-1在巴西苏木素处理T24细胞12h后显著上调2.2倍;HO-1成功转入T24细胞中后,mRNA表达显著提高93.3%,细胞活性略有升高。上述结果表明HO-1的高表达对T24细胞有保护作用,HO-1不是巴西苏木素作用于T24细胞的靶标分子,其在巴西苏木素处理T24细胞时表达升高可能是由于药物作用后,细胞为了逃避凋亡而产生应激反应所引起的。     

先天性尿道下裂小鼠模型的制备及注意问题

目的通过人工干预怀孕母鼠体内雄激素受体,造成雄性幼鼠先天性尿道下裂模型,探索造模所需的最佳给药时间及剂量。方法昆明种小鼠,从受孕后第15d开始灌胃给予氟丁酰胺(Flutamide),连续给药5d,剂量分别为66.7mg、133.3mg、200.0mg、266.7mg及333.3mg/kg,停药后待其自然分娩,于仔鼠出生后第21d观察雄性幼鼠外生殖器突起的形态变化。结果133.3mg/kg及以下剂量组雄性幼鼠外生殖器无明显异常;200.0mg剂量组雄性小鼠外生殖器突起顶部发生明显裂口,畸形率达86.6%;266.7gm/kg剂量组雄性小鼠外生殖器与雌性小鼠非常相似,阴囊部生毛,睾丸不外突,呈隐睾状。畸形率达到83.3%;333.3mg/kg剂量组雄性小鼠外生殖器突起向后完全裂开,在肛门侧形成一个类似阴道的结构。结论昆明种小鼠从受孕后第15d开始灌胃给予266.7mg/kg~333.3mg/kg氟丁酰胺,连续给药5d,可造成80%以上的雄性幼鼠先天性尿道下裂模型。     

应用层流柜开展标准化动物实验工作

“实验动物管理条例”实施以来,我国实验动物工作取得了很大的进展,使用标准化动物的理念已经被越来越多的人接受。随着清洁级、SPF级实验动物的普及应用,各地建立了相应标准的动物实验设施。但是,由于投资大、运行费用昂贵等原因,仍有许多单位尚没有建立起相应达标的动物实验室,使许多研究工作受到影响。1995年以来,我们在普通实验室的基础上,采用层流柜、洁净工作台等局部净化设施,配合严格的实验管理,开展了清洁级、SPF级大小鼠及裸鼠等多项实验研究,取得了一定的经验,总结如下。     

SX1近交系小鼠主要脏器及血液生化指标的测定

目的测定SX1近交系小鼠的主要生化及血液指标,为建立该品系小鼠的生物学特性资料提供实验数据。方法从F29、F30代仔鼠中选择1、2、3、4月龄的小鼠,分别测定这些小鼠的体重、体长、尾长;心、肝、脾、肺等12种脏器的重量;总蛋白、白蛋白、血糖、肌苷等16项血液生化指标及白细胞、红细胞、血红蛋白等15项血液常规指标。结果SX1小鼠在1、23、、4月龄时的体重、体长、尾长,心、肝、脾等脏器随小鼠生长而增加,但胸腺随小鼠生长而缩小;各脏器重量均雄性大于雌性,肾上腺为雌性大于雄性;其中14项血液生化指标随小鼠的生长基本无明显变化,而总胆红素和碱性磷酸酶指标随小鼠生长而降低,多数指标无性别差异,但碱性磷酸酶指标雌性大于雄性;其中13项血液常规指标随小鼠的生长基本无明显变化,只有白细胞与平均血小板压积随小鼠生长而降低,且白细胞指标雄性大于雌性。结论各项指标基本符合近交系小鼠的特征,补充了SX1近交系小鼠的资料。     

GADD45β过表达抑制膀胱癌细胞T24的增殖

GADD45β(growth arrest and DNA damage,GADD)在肿瘤的发生、发展以及凋亡过程中起着重要作用。首先利用Real-time quantitative(qPCR)检测到32μg/mL巴西苏木素处理人类移行膀胱癌T24细胞6h后,GADD45β的mRNA水平显著上调2.7倍。为了研究GADD45β在巴西苏木素致死T24细胞中的作用,从T24细胞的cDNA中扩增获得GADD45β基因全长读码框,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1上,构成重组载体pcDNA3.1-GADD45β。将该真核表达载体转染T24细胞,发现GADD45β在mRNA水平的表达显著上调,表明真核表达载体成功转入T24细胞;观察GADD45β过表达后对肿瘤细胞的影响,发现细胞变圆,贴壁性变差,活性显著降低85%。本研究表明GADD45β在T24细胞中的过表达能有效地抑制细胞生长,对细胞有较强的致死作用。