胆固醇氧化酶的三相分离及其血清总胆固醇的测定

对一株胞外胆固醇氧化酶高产菌COX4-8进行了三相分离,结果表明:最优分离条件为:硫酸铵-异丙醇沉淀,硫酸铵饱和度为70%,异丙醇与发酵上清液的体积比为0.8∶1时,pH值为9,在20℃下静置30min,12 000r/min离心10min,纯化倍数4.5倍,回收率高达95%.酶动力学方法检测胆固醇氧化酶测定血清总胆固醇含量,其线性回归方程为y=0.006 4x+0.002 7,R2=0.965 4,线性范围0~7.16mmol/L.结果表明了该酶具有作为临床诊断试剂的潜力,并为临床上利用酶动力学方法测定血清总胆固醇含量奠定了实验基础.     

腹腔神经丛阻滞对GK大鼠胰岛素受体底物的影响

观察NCPB对GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠血糖及胰岛素受体底物的影响.构建25只非胰岛素依赖糖尿病(NIDDM)的雄性GK大鼠,随机抽取5只GK大鼠,以NCPB前表示,先进行口服葡萄糖耐受试验(OGTT),然后处死采取肝组织.其余20只GK大鼠随机分为对照组和NCPB组,每组10只.NCPB组给予双侧质量分数0.5%利多卡因进行NCPB,1 mL/侧,每天1次,而对照组以质量分数0.9%生理盐水替换.分别在14 d和28 d后取对照组和NCPB组各5只GK大鼠进行OGTT实验,通过Western Blot检测对照组和NCPB组肝组织中的胰岛素受体底物-1(IRS-1)、IRS-2表达以及IRS-1磷酸化情况.结果表明:NCPB组在14 d和28 d NCPB处理后,在0、60和120 min时的血糖均显著低于NCPB前(P0.05或P0.01)和对照组(P0.01),而血清胰岛素水平与NCPB前和对照组相差不显著;在14、28 d NCPB后NCPB组肝组织IRS-1和IRS-2蛋白表达水平与NCPB前相比均显著增加(P0.01),在相应时间点并显著高于对照组(P0.01);而对照组的肝组织IRS-1丝氨酸307残基的磷酸化水平在14、28 d NCPB后与NCPB前均有所上调(P0.05),NCPB组在相应时间点丝氨酸307残基的磷酸化程度均较NCPB前显著下降(P0.01),且均显著低于对照组(P0.01).NCPB可降低GK大鼠的空腹血糖,减轻GK大鼠糖耐量受损的程度,其机制可能与NCPB提高胰岛素受体底物的蛋白表达和抑制其丝氨酸磷酸化有关.