反义Ki-67和Bc1-2真核细胞双表达载体的构建及鉴定

目的 构建反义Ki-67和Bc1-2双表达栽体用于肿瘤基因治疗的研究.方法 从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增Ki-67和Bc1-2 cDNA,T-A克隆到pMD18-T Simple栽体.Ki-67经BamH I和Cla I双酶切,Bc1-2经EcoR I和Xho I双酶切后,分别反向插入pVITR02的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2),构建单表达质粒pVITR02-AsKi-67扣pVITR02-AsBc1-2,再将Bc1-2EcoR I和Xho I双酶切,反向插入pVITR02-AsKi-67的mcs2,构建pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2双表达质粒.结果限制性内切酶和测序表明单表达质粒pVITR02-AsKi-67和pVITR02-AsBc1-2以及双表达质粒pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2构建成功.结论 本研究成功构建了pVITR02-AsKi-67和pVITR02-AsBc1-2单表达质粒,及pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2双表达质粒.