Plcd1转基因小鼠的制备

通过制备Plcd1转基因小鼠研究Plcd1基因功能.首先逆转录PCR获得约2.2kb的Plcd1基因全长,T载体克隆后测序验证;以pMD19-T-Plcd1为模板,通过设计引物及PCR扩增引入酶切位点,与pEF6/V5-His同时进行酶切、连接,构建pEF6/V5-His-Plcd1表达载体;经真核表达验证后,酶切获得目标片段,显微注射681枚受精卵,在82只仔鼠中获得转基因阳性首建鼠15只,其中13只稳定遗传并建系.PLCD1-HIS融合蛋白在睾丸组织中表达,在皮肤组织中无表达.Plcd1转基因小鼠为Plcd1功能研究奠定了基础.     

5种不同遗传背景绿色荧光蛋白(GFP)基因导入系小鼠的培育

通过反复回交——筛选目的基因的手段,将C57BL/6-Tg(UBC-GFP)30Scha/J转基因小鼠的绿色荧光蛋白基因(GFP)分别向BABL/C、CBA/J、DBA/2J、AKR/J、FVB/J等品系小鼠导入,得到了5种不同遗传背景且带有GFP基因的导入系小鼠.冰冻组织切片等方法显示GFP导入系小鼠的皮肤、肝、肾、心、肺等均有不同程度的绿色荧光蛋白表达,不同遗传背景对GFP的组织表达谱、血液生理指标及繁殖性能未见影响.本实验采用基因导入法培育了5种新的带有GFP导入系小鼠,这些不同遗传背景的基因导入系小鼠为移植生物学研究提供了材料.     

Kit基因错义突变导致KitW-2Bao小鼠生殖腺的异常发育

Kit^W-2Bao是本实验室培育的B6背景、呈单基因显性遗传的突变系小鼠, 杂合子腹部、肢端及尾端白化, 纯合子全身白化、黑眼、不育. 突变纯合子小鼠生殖腺变小、结构异常、缺乏生殖细胞, 杂合子雄鼠部分精曲小管内无生精细胞. 通过连锁分析将突变基因定位于第5号染色距着丝粒42.8 cM处, 确定Kit为候选基因. RT-PCR扩增Kit全长的mRNA, 经测序发现其ORF的第1228位碱基由G转换成T, 这一变化导致第410位的氨基酸由V变成F, 预测会引起局部二级结构发生显著变化; 随后将杂合子突变小鼠互交, 在基因型鉴定的基础上, 通过碱性磷酸酶染色等方法追踪生殖细胞异常发育过程, 发现在胚胎11.5 d, 突变纯合子小鼠的原始生殖细胞未出现在尿生殖嵴区, 突变杂合子小鼠的原始生殖细胞显著减少; 在胚胎15.5 d, 纯合子小鼠睾丸内精曲小管结构分化不清, 无精原细胞, 卵巢内无原始卵泡; 杂合子小鼠精原细胞及原始卵泡数量显著减少. W^-2Bao为KIT胞外区第4个Ig结构域内唯一的等位突变, 是研究其功能及生殖系统发育机制的新材料.     

三例眼部突变小鼠的培育及特征分析

摘要: 目的 筛选培育眼部突变表型小鼠,为人类相关疾病的研究提供材料。方法 采用 N-乙基-N-亚硝基脲 ( N-ethyl-N-nitrosourea,ENU) 诱变处理 G0 代小鼠,繁育获得 G1 代,筛选眼部突变表型个体,进行遗传力试验、临床 诊断及病理学观察。结果 本实验繁殖 G1 代小鼠 2782 只,经筛查获得眼部突变表型小鼠 65 只,可稳定遗传小鼠 3 例,分别表现为: 角膜混浊、小眼球和虹膜异常等特征。角膜混浊者其角膜症状严重程度差异较大,角膜病变部位 明显增厚,部分伴有新生血管; 小眼球者睑裂较小,甚至上下眼睑粘连,外观眼球不可见,病理学检查可见内有发育 异常的小眼球; 虹膜异常者可见瞳孔偏大,明显偏离中心位置,偏向位置不定,对光无反射,病理学观察可见虹膜晶 状体粘连、虹膜缺损,严重者伴有视网膜异常等。结论 本实验成功培育了 3 例眼部突变表型小鼠,为人类相关疾 病的研究提供良好的材料。     

蜂胶的生物学活性及在现代医学上的应用

蜂胶是西方蜜蜂采集植物树脂并混入唾液腺经过咀嚼加工而成的一种物质，不同地区蜂胶的化学成分相差很大，但是具有相似的生物学活性，如抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗炎症、免疫调节、抗肿瘤等，另外蜂胶还可以降血压，预防动脉粥样硬化以及糖尿病等，蜂胶在现代医学上具有广阔的应用前景．