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对来自假单胞菌(Pseudomonassp.)DM11菌株的二氯甲烷脱卤素酶(简称DM11脱卤素酶)的动力学性质和抑制剂进行了研究。用1/V对1/[s]作图法,测出DM11脱卤素酶以CH2Cl2、CH2Br2、CH2I2、ClCH2Br和ClCH2I等5种化合物为底物时的Km值分别是67、20、55、7和9μmol/L,比活力分别是77.8、123.3、78.8、56.1和60.3mkat/kg蛋白。测定了14种抑制剂对DM11脱卤素酶的50%抑制浓度(I50)。甲基谷胱甘肽(GSCH3)是DM11脱卤素酶的竞争性抑制剂,四硝基甲烷(TNM)是非竞争性抑制剂,当甲基谷胱甘肽和四硝基甲烷与DM11脱卤素酶一起保温时,甲基谷胱甘肽对酶有保护作用。 相似文献
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阿特拉津氯水解酶基因的定点诱变和酶活力检测 总被引:3,自引:0,他引:3
阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶.采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟,然后将其插入表达载体pET21b( ),并在大肠杆菌中表达.表达的蛋白特性研究表明:AtzA或AtzA—NK融合蛋白系水溶性蛋白,很容易通过Ni—NTA Magnetic Agarose Beads分离纯化.采用阿特拉津脱氯反应产生HCl而引起pH指示剂颜色改变的测定方法能方便地对其酶活力进行定量.酶活力结果表明,突变酶的比活力与假单胞菌ADP菌株的AtzA相比没有明显改变,暗示突变位点(第278位缬氨酸突变成甲硫氨酸)不是酶的活性中心或底物结合部位。 相似文献
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在大肠杆菌中表达了Pseudomonas putida ND6菌株中与萘降解有关的水杨醛脱氢酶同工酶 NahV, 并对其酶学性质进行了研究. 结果表明, NahV与ND6菌株中经典的水杨醛脱氢酶NahF的氨基酸序列同源性较低, 是一种新的水杨醛脱氢酶. 对NahV和NahF的酶动力学研究结果表明, NahF具有更高的催化效率, 而NahV对水杨醛和NAD+的亲和力更强. ND6菌株的NahV和NahF都有较宽的底物范围, 可以催化水杨醛、5-氯水杨醛、甲醛、间硝基苯甲醛、邻硝基苯甲醛、邻甲氧基苯甲醛、戊二醛、辛醛和乙二醛的脱氢反应, 但对不同底物的催化效率不同. Fe2+, Cu2+和Zn2+对NahV有激活作用, 而NahF只能被Fe2+激活. NahF具有更好的热稳定性, 在50℃保温30 min仍有72.8%的酶活力, 而NahV则丧失了88.8%的酶活力. DNA斑点杂交结果表明, 类nahF基因在本研究检测的两种来源的萘降解细菌中都存在, 而类nahV基因只存在于一种来源的萘降解细菌中. 相似文献
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研究了聚ADP核糖基聚合酶(PARP)抑制剂苯甲酰胺(BA)在DNA损伤所造成的肺癌细胞(PG)凋亡过程中的作用,分别用MNNG(N-甲基-N-亚硝基氮亚硝基胍)和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。 相似文献
5.
经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,嗜甲基菌DM11菌株二氯甲烷脱卤素酶的亚基分子量为31000。通过沉降平衡超离心分析和凝胶过滤色谱分析证明,上述脱素酶的天然酶的分子量分别是65800和63500。这些结果表明,DM11菌株的二氯甲烷脱卤素酶是二聚体蛋白。 相似文献
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从7个萘降解菌株和5个苯酚降解菌株中经PcR扩增得到12个儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)基因,大小均为924 bp.根据DNA序列的类似性,可将这12个C23O基因聚类为3组,此结果与分离菌株的样本来源基本一致.这12个基因均编码307个氨基酸残基的儿茶酚2,3-双加氧酶,序列中都含有9个严格保守的氨基酸残基(Gly30、His153、Leu172、His199、His214、His246、Tyr255、Pro259、Glu265),均属于外切双加氧酶的I.2.A亚家族.通过盒式PCR,用各种萘和苯酚降解菌的C23O基因中心区替换恶臭假单胞菌ND6菌株pND6-1质粒中nahH基因的中心区,得到5个杂种C23O基因,这些基因在pET-E.coli BL21(DE3)系统中表达以后,均能检测到C23O活性,其中中心区来自假单胞菌ND24菌株C23O基因的杂种酶C23O-ND24,其比活力高于对照恶臭假单胞菌ND6菌株的野生型C23O. 相似文献
7.
通过简便的两步阴离子交换色谱,从遗传工程菌株大肠杆菌JM105中纯化出哺乳动物的谷胱甘肽S-转移酶5-5(GST5-5),GST5-5以二卤甲烷为底物时的动力学常数,热稳定性和最适pH被测定,并与细菌二氯甲烷脱卤素酶的上述性质进行了比较。 相似文献
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用PCR方法从节杆菌AD1菌株中扩增出完整的阿特拉津氯水解酶基atzA,该基因与载体pGEM-T连接成重组质粒以后,转化大肠杆菌DH5a,表达出了有活力的阿特拉津氯水解酶。 相似文献
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微囊化基因工程菌作为口服制剂治疗尿毒症是近年来的研究新思路. Klebsiella aerogenes脲酶基因(UreDABCEFG)通过质粒pKAU17转入大肠杆菌E.coli DH5α, 经驯化后能以尿素或氨为惟一氮源生长, 因此可将其视为尿素吸附剂. 以聚乙烯醇为载体制备微囊化脲酶基因工程菌, 其机械强度远远高于APA微囊, 从而解决了APA微囊易破碎的缺点. 制备聚乙烯醇微囊化工程菌的适宜条件是聚乙烯醇(平均聚合度为2450)浓度为6%(质量体积比), 用硼酸交联其pH值为6.5, 反应时间24 h, 包菌量为8%(质量体积比), 气流量为3 L/min, 射流量为1 mL/10 min, 粒径主要分布于20~40目. 体外模拟试验表明, 含100 mg湿菌体的聚乙烯醇微囊4 h内清除尿素约18.4 mg. 相似文献
10.
将阿特拉津降解速度快但降解不完全的混合菌群与阿特拉津降解完全但降解速度慢的Pseudomonas sp.ADP菌株混合,经过长期驯化培养,筛选到一个能完全降解阿特拉津而且降解速度快的细菌聚生体(bacterial consortium).聚生体含有两个菌株,其中一个菌株来自混合菌群,命名为AD25,另一个是ADP的突变株,命名为Pseudomonas sp.ADP-V.通过16S rRNA基因测序,AD25被鉴定为节杆菌(Arthrobacter sp.).PCR分析和降解实验表明,AD25含有trzN-atzBC基因,能将阿特拉津降解成氰尿酸;ADP-V含有atzDEF基因,是ADP菌株丢失atzABC基因以后的衍生菌,能使氰尿酸进一步降解.由AD25和ADP-V组成的细菌聚生体能快速和完全降解阿特拉津.ADP-V的atzD基因表达和酶动力学实验表明,由于它编码的氰尿酸水解酶(AtzD)的339位蛋氨酸(Met)突变为苏氨酸(Thr),导致酶活力降低从而引起在生长培养基中出现少量氰尿酸积累. 相似文献