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从牛泡沫病毒BFV3026感染的胎牛肺细胞中提取Hirt DNA,PCR扩增BFV3026 gag基因。序列分析确证后,将其克隆于原核表达载体pET32A,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,使Gag蛋白得以高效表达。SDS-PAGE及Western blot证实:表达蛋白占菌体总蛋白的40%,本工作的完成为Gag蛋白功能的研究奠定基础。 相似文献
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牛免疫缺陷病毒BIV的基质蛋白MA是由gag基因编码病毒结构蛋白之一,参与病毒运输包装等多种过程.通过蛋白质组学方法,寻找与MA有相互作用的宿主蛋白.通过原核表达MA-CBP融合蛋白,将其结合在几丁质上,并与细胞裂解物混合,纯化特异结合的细胞蛋白.利用双向电泳以及MALDI-TOF质谱分析,筛选到8个与MA具有相互作用的候选蛋白,功能涉及运输、氧化还原、热激反应等.进而克隆所鉴定蛋白之一的PRDX4,利用体外结合实验进一步证实其与BIV MA蛋白存在相互作用.初步建立利用蛋白质组学技术研究病毒与宿主相互作用实验方法,所得结果为了解慢病毒结构蛋白在病毒生活周期中功能提供了线索,有助于探索过氧化物酶家族蛋白在病毒感染过程中的作用及其分子机制. 相似文献
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HIV-1gp41不同片段表达对E. coli细胞毒性作用分析 总被引:1,自引:0,他引:1
HIV-gp41基因在E. coli中难以表达, 为研究影响其表达的原因, 选择gp41不同区域构建表达质粒, 通过在E. coli BL21(DE3)中进行表达测定其对细菌的毒性作用. 结果表明, IPTG诱导后除质粒pET-HN2表达菌以外其余质粒表达菌大量死亡, 目的基因转录的mRNA量也迅速下降, [3H]尿嘧啶释放实验显示释放增加, 说明GP41蛋白的毒性作用主要表现为对表达菌细胞膜的破坏而成为其在E. coli中难以表达的主要原因. 相似文献
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以感染性克隆SHIV-KB9 cDNA为主要骨架,将其env基因区域的gp120和部分gp41(从N末端的50到650个氨基酸)的1.7kb片段,用来源于4个不同中国HIV-1 B’/C毒株env的相应区域进行替换,构建了50个全基因SHIV cDNA克隆,大规模体外活性筛选实验,获得了能够在人的PBMC中进行生产性复制的SHIV-XJ02170 cDNA克隆. 相似文献
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引起人非典型性肺炎的冠状病毒基因组与其它冠状病毒基因组的初步比较 总被引:4,自引:0,他引:4
一种在世界范围内突然爆发的致命流行病——急性呼吸窘迫综合症(SARS)击倒了数干人,一种全新的冠状病毒被认为是其病原.5个SARS相关冠状病毒的全基因组序列已经完成.我们进行了SARS相关冠状病毒和其它冠状病毒的基因组进化分析和序列比较,结果显示:1.SARS相关冠状病毒不直接来自于任何已知的冠状病毒;2.E蛋白的基因可能是在近期从其它病毒横向转移到SARS病毒中来的;3.Sl和S2基因发生了较大范围的缺失或插入突变.这些基因横向转移和突变改变了SARS相关病毒的表面结构和抗原性,极有可能是导致其获得侵染人类细胞的主要原因. 相似文献
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干扰素调节因子7(IRF-7)是调节Ⅰ型干扰素依赖型先天免疫反应的关键因子,在真核细胞防御反应中发挥重要作用。本文在大肠杆菌中表达了重组IRF-7,利用亲和层析的方法进行了纯化,并制备了鼠抗IRF-7的多克隆抗体。所得到的抗血清能够在稀释27 000倍后成功用于免疫印迹检测。该抗血清不但能识别来源于大肠杆菌的抗原,还能检测真核细胞内转染后表达的IRF-7。使用该抗体证实,转染293T细胞后表达的IRF-7主要分布在细胞质内。所制备的抗血清可用于IRF-7的表达和功能研究。 相似文献
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牛泡沫病毒LTR的反式激活因子靶序列研究 总被引:2,自引:0,他引:2
牛泡沫病毒(BFV)是反转录病毒科泡沫病毒属成员之一.其基因组除编码gag,pol,env三个结构基因外,在env和3'LTR之间有2个ORF(ORF-1和ORF-2),编码自身的反式激活因子Tas等调节蛋白.本研究利用我们实验室分离鉴定的BFV3026中国毒株[12]为材料,克隆Orf-1基因,构建pBFVORF-1表达质粒,通过带有luc基因的LTR系列缺失质粒与pBFVORF-1共转染,瞬时表达分析结果将BFVLTR上Tas应答元件(TRE)定位于-983/-668(TREI),-470/-140(TREI)和RU5区.其中TREI、TREII为正调控区域,RU5为负调控区域,并进一步证明RU5在异源启动子(BIVLTR)上具有抑制其下游基因表达的功能.这些结果表明BFVTas作用机理与慢病毒(Tat),致瘤病毒(Tax)等均不相同 相似文献
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