梗死后大鼠缺血心肌基因差异表达谱构建

为寻找梗死后大鼠缺血心肌差异表达基因, 采用结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支的方法, 建立急性心肌梗死(AMI)模型, 饲养7 d后处死大鼠, 提取正常和缺血心肌总RNA, 应用长标签基因表达系列分析(long serial analysis of gene expression, LongSAGE)构建AMI后大鼠缺血心肌基因差异表达谱, 荧光定量PCR鉴定部分差异基因的表达. 结果显示, 在建立的AMI后缺血心肌和正常心肌组织LongSAGE标签库中, 共获得标签15966个, 正常心肌获得9646个, 梗死后缺血心肌获得9563个. 通过NCBI网站BLAST同源性分析后, 发现新核苷酸序列标签7665个. 与正常组比较, 142个基因在AMI大鼠心肌组织中的表达有显著性差异(P < 0.05), 这些差异基因主要与氧化磷酸化、三磷酸腺苷(ATP)合成、糖异生等能量代谢通路相关. 荧光定量PCR的鉴定结果与LongSAGE差异表达结果基本一致. 结果表明, AMI可引起多基因表达异常, 能量代谢作用通路相关基因的异常表达是造成AMI后心肌损伤的重要分子机制.     

葛根素对脂肪细胞糖脂代谢作用研究

探讨葛根素对脂肪细胞糖、脂代谢的影响.建立3T3-L1脂肪细胞IR模型,葡萄糖氧化酶法测定葛根素处理48 h后培养液中葡萄糖残存量、铜试剂显色法测定游离脂肪酸浓度.与模型组比较,葛根素高、低剂量组葡萄糖消耗量显著增加(P<0.05),游离脂肪酸水平呈现降低趋势.葛根素明显增加脂肪细胞的葡萄糖消耗,对TNF-α诱导的脂肪分解无明显作用.     

HLA-G抑制NK和T细胞介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用

为了探索HLA-G分子在异种器官移植中的应用前景, 用RT-PCR方法从人胎盘组织中克隆了HLA-G cDNA, 构建了哺乳动物表达载体; 通过稳定转染, 获得了高效表达HLA-G蛋白的猪血管内皮细胞(PECs)克隆. 经细胞毒实验发现, HLA-G不仅可以抑制活化人NK-92细胞对PECs的杀伤, 其抑制水平达到或低于NK-92杀伤人脐静脉内皮细胞水平; 而且可以抑制异种抗原特异T淋巴细胞的细胞毒作用, 抑制率为59.1% ～ 88.9%. 因此认为HLA-G作为异种移植诱导免疫耐受的新策略, 不仅在延迟性排斥阶段起到抑制NK细胞作用, 而且在细胞性排斥阶段同样可以抑制T淋巴细胞作用.     

冠心病差异基因表达谱的构建及目标基因的功能分析

选择经冠脉造影证实的冠心病患者16例和健康对照者8例, 抽提RNA, 筛选冠心病相关差异基因, 构建冠心病差异基因表达谱, 并使用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对目标基因进行鉴定. 另按原标准筛选冠心病患者30例和健康对照者40例, 验证目标基因IL-8的临床相关性. 在此基础上, 以12例健康自愿者为对象, 研究IL-8对血小板聚集率、血小板活化和血小板聚集形态学的影响. 结果表明, 冠心病相关的差异基因共有107个, 其中分子功能和生物学途径涉及炎症免疫反应的有14个(13.1%); 通路显著性分析发现, 冠心病相关有意义通路共15个, 其中有4个涉及炎症免疫反应. 目标基因鉴定结果与基因芯片检测结果一致. 冠心病患者血清IL-8水平(83.21 ± 34.33 pg/mL)显著高于健康对照者(63.34 ± 36.36 pg/mL) (P < 0.05). 血小板聚集率、血小板活化和血小板聚集形态学结果显示, IL-8具有诱导血小板活化的作用. 本文从核酸水平揭示了冠心病与炎症免疫反应的相关性, 目标基因IL-8可能通过影响血小板的活化程度而参与了冠心病的发病过程.     

益气养阴活血配伍对缺血心肌差异基因表达的影响

本研究在既往建立的大鼠缺血心肌基因差异表达谱基础上, 探讨了益气养阴、活血及其配伍中药对缺血心肌差异基因表达影响及可能的作用机制. 采用冠状动脉左前降支结扎法制备大鼠AMI模型, 造模后将大鼠随机分为5组: 模型组、美插洛尔组、益气养阴组、活血组和益气养阴活血组, 并设正常组和假手术组, 假手术组只穿线不结扎, 术后24 h给予正常组和假手术组等体积生理盐水, 给予其他各组相应药物灌胃. 第8天截取心肌缺血区组织, 光学显微镜观察病理形态, 分别应用荧光定量PCR及化学比色法检测目标基因mRNA表达水平和翻译蛋白酶活性. 结果显示, 模型组HE染色可见心肌组织缺血区心肌肿胀、炎细胞浸润和细胞溶解, 各用药组病理改变较模型组均明显较轻, 益气养阴组、活血组能量代谢相关基因细胞色素C氧化酶5a (Cox5a)和ATP合酶5e (ATP5e)基因表达量和酶活性均出现了下调趋势, 而益气养阴活血配伍组Cox5a, ATP5e对应的蛋白酶活性显著下降(P < 0.05). 这表明能量代谢作用通路相关基因的异常表达是引起AMI心肌损伤的重要分子机制之一, 益气养阴活血配伍中药影响COX5a, ATP5e等能量相关功能基因的表达是其抗心肌缺血的可能机制, 较单纯益气养阴、活血效果理想.     

HLA-G抑制NK和T细胞介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用

为了探讨HLA-G分子在异种器官移植中的应用前景，用RT-PCR方法从人胎盘组织中克隆了HLA-G cDNA， 构建了哺乳动物表达载体；通过稳定转染，获得了高效表达HLA-G蛋白的猪血管内皮细胞（PECs）克隆，经细胞毒实验发现，HLA-G不仅可以抑制活化人NK-92细胞对PECs的杀伤，其抑制水平达到或低于NK-92杀伤人脐静脉内皮细胞水平，而且可以抑制异种抗原特异T淋巴细胞的细胞毒作用，抑制率为59.1％-88.9％。因此认为HLA-G作为异种移植诱导免疫耐受的新策略，不仅在延迟性排斥阶段起到抑制NK细胞作用，而且在细胞性排斥阶段同样可以抑制T淋巴细胞作用。     

活血化瘀中药与抗血小板治疗

抗血小板药物的临床应用是心脑血管疾病治疗领域的里程碑,但是随着应用时间的延长及"双重"甚至"三重"抗血小板药物的联用,其不良反应如抗血小板药物抵抗或出血风险的发生率大增,因此寻找新的安全有效的抗血小板药物或改善抗血小板药物抵抗的方法,成为目前心脑血管疾病防治领域的国际性关注点.活血化瘀中药具有明确的抗血小板及抗动脉粥样硬化的临床疗效,从传统活血化瘀中药中筛选出高效、低副作用的抗血小板药物近年来引起国内外学者的极大关注.本文对近年来国内外活血化瘀中药抗血小板治疗作用的研究进展作一评述.     

辛伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块稳定性及斑块内血管新生的影响

利用动脉粥样硬化斑块模型观察辛伐他汀对兔动脉粥样硬化模型斑块稳定性及斑块内血管新生的影响. 将30只新西兰兔随机分为正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组, 每组10只. 正常对照组普通饲料喂养, 其余两组高脂饲料喂养, 2周后行球囊导管血管损伤术, 建立动脉粥样硬化模型, 继续高脂喂养, 辛伐他汀组同时给予辛伐他汀2.5 mg•kg^-1•d^-1, 连续给药6周后, 各组采血测血脂; 酶联免疫法测定血清高敏C反应蛋白(hsCRP)和基质金属蛋白酶-3, -9(MMP-3,-9); 取腹主动脉HE染色光镜观察斑块组织大体病理形态学指标, 利用图像软件定量测量斑块面积(PA)、血管横截面积(CVA)及校正斑块面积(PA/CVA); 免疫组化方法检测斑块组织血管内皮生长因子(VEGF)、第8因子相关抗原(FⅧRAg), MMP-3及白细胞分化抗原40配体(CD40L)的蛋白表达. 结果表明, 与模型对照组相比, 辛伐他汀组腹主动脉VEGF, FⅧRAg, MMP-3, CD40L及血清hsCRP, MMP-3, MMP-9表达显著减少(P<0.01, P<0.05); 同时辛伐他汀组校正斑块面积与模型对照组比较有显著性降低(P<0.01); 辛伐他汀组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇较模型对照组均有显著降低(P<0.01), 推测辛伐他汀有一定稳定动脉粥样硬化斑块作用, 抑制斑块内血管新生是其又一可能机制.