陈竺等22位院士联名建议——构筑预防医学体系 加强我国医学科研

4月 2 2日 ,陈竺等 2 2位中国科学院院士联名向国务院提交了《以非典型肺炎 (SARS)防治为切入点 ,构筑预防医学体系 ,全面加强我国医学科学研究》的报告。该报告对当前非典型肺炎防治的研究、构筑我国预防医学体系、建设强大的国家医学科学创新体系等提出了意见和建议。现将该报告全文刊登如下     

用微阵列研究鼻咽癌与正常鼻咽组织基因表达谱

用α－＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ逆转录分别标记成人正常鼻咽和鼻咽癌组织总ＲＮＡ５μｇ，将合成的ｃＤＮＡ探针与具有５１８４个点阵的高密度ｃＤＮＡ微阵列杂交，用分析两者表达谱差异结构发现，鼻咽癌组织中，密度值在２００以上有１８７个ＥＳＴ，咎咽组织中３０７个ＥＳＴ，而３８个ＥＳＴ在鼻咽组织高表达但在鼻咽癌组织低表达。     

pEGX-4T-2/NAP1融合蛋白的原核表达及鉴定

以鼻咽组织cDNA为模板,PCR扩增NAP1基因编码区,PCR产物克隆入pUCm-T载体,筛选阳性克隆. 构建NAP1基因编码区的原核表达载体pEGX-4T-2/ NAP1,转化大肠杆菌BL21. 经IPTG诱导表达后,在不同时段收集菌体,提取细菌的全部蛋白. 经12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,发现细菌全蛋白中在35 KD～36 KD处多出一条明显条带. 用兔抗人NAP1多克隆抗体,利用Western Blotting对该融合蛋白的表达进行了鉴定,NAP1基因的融合蛋白表达成功,为制备NAP1单克隆抗体和获得有生物活性的NAP1蛋白,进一步研究NAP1蛋白的功能奠定了基础.     

应用酵母双杂交系统筛选与NAP1相互作用的蛋白质

用NAP1作为"诱饵"蛋白,通过酵母双杂交系统筛选人淋巴细胞cDNA文库,鉴定阳性克隆;再利用酵母双杂交和免疫共沉淀验证相互作用. 结果表明,通过酵母双杂交系统筛选人淋巴细胞cDNA文库,阳性克隆的鉴定,发现了与NAP1的相互作用蛋白质―蛋白酶体α亚基3(PSMA3). 免疫共沉淀(Co-IP)结果证实外源表达的NAP1蛋白和PSMA3蛋白在293T细胞中有特异性的相互作用. NAP1作为FDC分泌的一种多肽,与PSMA3有特异性的相互作用,这种相互作用如何实现对蛋白酶体降解靶蛋白的活性调节,其作用机理有待深入研究.     

一个与人鼻咽癌相关新基因的克隆

利用高密度ｃＤＮＡ微阵列表达检测技术，筛选出在成人正常鼻咽组织高表达而在成人咎咽低分化鳞状细胞癌组织中低表达的ＥＳＴＮ２７７４１，用ＲＴ－ＰＣＲ技术证实之，进而由该ＥＳＴ克隆出长度为１０９６ｂｐ的新基因，利用生物信息学分析发现，该序列有含有完整的阅读横架，编码２５６个氨基酸，在５＇端起始密友子上游有终止密友子ＴＡＡ，３＇端有加尾信号ＡＡＴＡＡＡ和ｐｏｌｙ Ａ尾，该新序列在非宙余的核酸序列数据 比     

用cDNA表达阵谱比较鼻咽癌与正常鼻咽组织的基因表达谱差异

Atlas~（TM）cDNA Expression array Ⅰ是Clontech公司1997年4月推出的第1张商品化大规模核酸阵谱,包括588个严格选择的处于严密转录调控、在不同生物过程中起关键作用的人类基因cDNA序列,分6个功能区（A,B,C,D,E,F）点阵于1张尼龙膜上。我们用其做了人胚鼻咽、成人鼻咽和鼻咽癌组织的基因表达谱,比较其差异。材料包括胚胎鼻咽2例,成人慢性鼻咽炎活检组织11例及鼻咽癌活检组织17例。提取总RNA,纯化Poly A RNA,合成放射性标记cDNA探针,与阵谱杂交及放射自显影。结果见图1与表1。