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采用DEAE-纤维素和羟基磷灰石层析联合使用的纯化程序,从烟草节杆菌02181株提取纯化了肌酸酶.比活性由0.92 U/mg上升至124.44 U/mg,酶被提纯了135.26倍,在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈单一区带,最终收率达52.95%.特性研究显示此酶的相对分子量为84500,等电点为4.80,在磷酸盐缓冲体系中,最适pH为6.50,pH7.00环境下耐受性最好,最适温度为35℃,米氏常数(Km)为46.50 mmol/L,最大反应速度(Vmax)为8.20 μmol/min.Cu2 、SDS可使酶完全失活,Hg2 、Cd2 、Zn2 和Fe3 明显抑制酶活性,Mg2 、Mn2 、Brij 35、Triton X-100和邻菲饶啉对酶活性有一定的抑制作用,EDTA对酶活性无明显影响,而Ca2 和NaN3对酶有一定的激活作用.络合剂邻菲饶啉和EDTA对酶活性的抑制试验表明此酶属于金属酶类. 相似文献
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肌酐测定工具酶产生菌-烟草节杆菌02181的筛选及其产酶条件 总被引:1,自引:1,他引:1
肌酐酶、肌酸酶和肌氨酸氧化酶是肌酐测定酶学方法的主要工具酶,我们从兰州市郊土壤中筛选到一株能同时高产这3种酶的菌株02181,经中国科学院微生物研究所鉴定为烟草节杆菌,正式定名为烟草节杆菌02181(Arthrobacter nicotianae 02181).该菌适宜的培养温度为28℃;增加氧溶量有利于细菌细胞生长和产酶;肌酐的存在对产酶至关重要,推测为酶基因开放的诱导剂;蛋白胨是该菌生长和产酶的良好氮、碳源;在有肌酐和蛋白胨存在时,添加葡萄糖能促进细菌细胞生长,但产酶量降低;镁盐、钾盐和磷酸盐为细菌生长和产酶所必需.优化产酶条件后,肌酐酶、肌酸酶和肌氨酸氧化酶的最高产酶量分别达145.00U/g湿菌、75.77U/g湿菌和21.30U/g湿菌.该菌不仅具有用于发酵生产的潜力,也为我们进行肌酐测定3种主要工具酶的基因克隆奠定了基础。 相似文献
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葡萄糖氧化酶与血糖试剂盒的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
葡萄糖氧化酶是测定血糖的关键工具酶。本文研究了用点青霉As.3.3871菌株发酵生产葡萄糖氧化酶的工艺和配制酶试剂盒的方法,研制的产品经检测符合国家卫生部临床检验中心的技术标准,临床验证表明与国内同类产品品质相同,填补了西北地区的空白,有良好的应用前景。 相似文献
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