载脂蛋白E-基因敲除鼠VLDL和IDL在动脉硬化中的作用

探讨载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）－基因敲除鼠极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）和中间密度脂蛋白（ＩＤＬ）组分（ａｐｏＥｋｏ－ＶＬＤＬ／ＩＤＬ）致动脉硬化作用．采用超离法从ａｐｏＥ－基因敲除鼠血浆中分离ＶＬＤＬ和ＩＤＬ组分，与鼠腹腔巨噬细胞共育，观察ａｐｏＥｋｏ－ＶＬＤＬ／ＩＤＬ与巨噬细胞的相互作用．ＡｐｏＥｋｏ－ＶＬＤＬ／ＩＤＬ导致细胞胆固醇酯含量显著增加．其诱导的细胞［３Ｈ］胆固醇油酸脂量高达１５．１ｎｍｏｌ／ｍｇ细胞蛋白，是天然低密度脂蛋白的８．４倍．形态学观察显示，经ａｐｏＥｋｏ－ＶＬＤＬ／ＩＤＬ处理的巨噬细胞与苏丹黑Ｂ呈阳性染色．细胞结合实验表明，１２５Ｉ－ａｐｏＥｋｏ－ＶＬＤＬ／ＩＤＬ与巨噬细胞的总结合可被非标记配基取代８０％以上，特异结合呈一饱和图形．同时细胞缔合和细胞内降解实验也显示相似结果．非修饰的ａｐｏＥｋｏ－ＶＬＤＬ／ＩＤＬ可通过一特异而不依赖于ａｐｏＥ的途径导致巨噬细胞胆固醇酯的显著蓄积  

Progress of gene targeting in mouse

Gene targeting is a powerful approach of studying the gene function in vivo. Specific genetic modifications, including simple gene disruption, point mutations, large chromosomal deletions and rearrangements, targeted incorporation of foreign genes, could be introduced into the mouse genome by gene targeting. Recent studies make it possible to do the gene targeting with temporal and spatial control.  

利用基因打靶技术研制人类疾病小鼠模型

宏伟的人类基因组计划的顺利实施使人类真正进入了功能基因组学研究的新时代 ,与日俱增的大量遗传信息正对生物医学的研究方式和医疗模式产生巨大的影响。发展和应用针对全基因组或全系统的高通量、大规模的整体实验手段 ,利用结构基因组学提供的信息和材料研究基因的功能将成为这个时代生物医学研究的主要特征。基因功能是在由细胞组成的多层次的复杂生命体中实现的 ,因此 ,功能基因组学的研究将会在极大程度上依赖于对模式生物的研究。小鼠作为被研究的脊椎动物 ,尤其具备作为哺乳动物的模式生物具有独特的优势 :首先小鼠是具有较短世代周…  

大肠杆菌 aroL 基因敲除及其对莽草酸合成的影响

以E.coli DH5α基因组为模板克隆莽草酸激酶Ⅱ基因(aroL),构建质粒pMD-aroL,经HpaⅠ、BsaBⅠ酶切后插入卡那霉素抗性基因(kan)得pMD-aroL::kan,利用pKD46的λ重组系统,用该质粒上的kan及两端的aroL同源序列替换E.coli Top10F′基因组上的aroL基因,再运用质粒pCP20编码的FLP重组酶消除kan基因.Southern blot证实基因敲除是成功的,测序结果表明kan已经从基因组上消除,摇瓶发酵显示构建的基因工程菌的莽草酸产量是原始菌株的1.57倍.  

核盘菌交配型基因mat 1-1敲除载体的构建及转化

利用根癌农杆菌介导真菌遗传转化方法对核盘菌的交配型基因mat 1-1进行基因同源重组的敲除对比实验, 获得了缺失mat 1-1基因的转化
菌株. 先利用PCR方法获得mat 1-1基因的左右两侧片段, 将测序正确的两个侧翼片段分别重组到农杆菌转化载体PBI-G3C中, 并将新霉素抗性标记引入农杆菌转化载体PBI-G3C中, 构建成农杆菌介导转化核盘菌的打靶载体ΔPBI-G3CN-mat 1-1, 再将ΔPBI-G3CN-mat 1-1质粒转化至根癌农杆菌EHA105中. 利用核盘菌菌丝进行转化, 将得到的转化菌株, 利用PCR方法进行验证, 证实有敲除菌株存在. 通过对敲除菌株进行生理表型的测定发现, 缺失mat11基因的敲除菌株其生长速度与野生核盘菌菌株相比无明显差异, 但敲除菌
株不能产生菌核与子囊盘.  

受体缺乏改变小鼠脑内组胺含量及昼夜节律

在乙谜麻醉下,分别于明时(8:00 a.m.)及暗时(8:00 p.m.)断头处死野生型及组胺H1R基因敲除型小鼠,迅速取出脑组织并分离出皮层、纹状体、海马、下丘脑、丘脑、中脑及脑干等脑区.这些脑组织被制成匀浆并用HPLC荧光检测法测量其组胺含量.结果显示暗时处死时,H1R基因敲除型小鼠海马、丘脑、中脑及脑干中的组胺含量明显低于野生型小鼠.明时处死时,野生型小鼠各脑区组胺含量均较暗时处死显著降低,但这一变化在H1R基因敲除型小鼠中并未观察到.这些表明作为组胺的功能靶,H1R不仅介导组胺的功能,而且调节大脑中组胺含量与释放的昼夜节律.  

组胺H1受体缺乏改变小鼠脑内组胺含量及昼夜节律

在乙谜麻醉下,分别于明时(8:00 a.m.)及暗时(8:00 p.m.)断头处死野生型及组胺H1R基因敲除型小鼠,迅速取出脑组织并分离出皮层、纹状体、海马、下丘脑、丘脑、中脑及脑干等脑区.这些脑组织被制成匀浆并用HPLC荧光检测法测量其组胺含量.结果显示暗时处死时,H1R基因敲除型小鼠海马、丘脑、中脑及脑干中的组胺含量明显低于野生型小鼠.明时处死时,野生型小鼠各脑区组胺含量均较暗时处死显著降低,但这一变化在H1R基因敲除型小鼠中并未观察到.这些表明作为组胺的功能靶,H1R不仅介导组胺的功能,而且调节大脑中组胺含量与释放的昼夜节律.  

脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁育

目的摸清脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁殖规律，建立可靠的检测方法。方法采用杂交、回交、互交的方法进行培育；采用从LPL(-/-)基因敲除小鼠的个体组织(鼠尾)中提取基因组DNA进行PCR分析，对其LPL(-/-)基因型作出鉴定。结果繁育出脂蛋白酯酶基因敲除小鼠新品系，并建立了可靠的繁殖方法和检测方法。结论建立了脂蛋白酯酶基因敲除小鼠动物模型。  

Smad3基因剔除小鼠的基因型鉴定与繁殖性能研究

以前的研究显示Smad3基因剔除 (Smad3ex8 ex8)导致小鼠发生渐进性的白细胞增多症、牙周炎、胃炎、肠炎以及粘膜表面附近脓肿形成的慢性感染。对有症状的Smad3ex8 ex8小鼠淋巴结的组织学及免疫表型分析显示T细胞有增强的增殖能力及活化的表型。进一步的研究表明Smad3ex8 ex8小鼠胸腺细胞及外周T细胞彻底失去了对TGF β的应答。此外 ,Smad3ex8 ex8突变纯合子小鼠还表现出典型的骨关节炎、骨质疏松和创伤愈合速度加快表型。因此 ,Smad3ex8 ex8突变纯合子小鼠有可能作为研究粘膜免疫缺陷和骨性关节炎等疾病发生的分子机制的模型动物 ,为了…