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1.
牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定   总被引:7,自引:1,他引:6  
用RT_PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn_Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly_Asp_Asp_Asp_Asp_Lys_β_naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx_hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp_Asp_Asp_Asp_Lys_肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.  相似文献
2.
鸦胆子油乳对子宫内膜异位症大鼠VEGF的影响   总被引:5,自引:4,他引:1  
为鸦胆子油乳对子宫内膜异位症模型大鼠血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达的影响及其机理,以雌性Wistar大鼠为研究对象,用自体移植法制作子宫内膜异位症模型,用鸦胆子油乳腹腔给药治疗,疗程结束后观察异位囊肿消失情况,并用免疫组化及蛋白印迹法检测子宫组织中VEGF表达及含量变化情况。结果显示:鸦胆子油乳能使子宫内膜异位囊肿明显减小甚至消失,能抑制子宫内膜组织中VEGF表达。由此得出结论:鸦胆子油乳对子宫内膜异位症大鼠异位囊肿有治疗作用,可能是通过抑制血管生成起作用。  相似文献
3.
麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定   总被引:5,自引:2,他引:3  
麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western blot鉴定戎 芳1,2,王胜华1,赵小光1,郭 亮1,魏 琴1,唐 琳1,徐 莺1,陈 放1, (1.四川大学生命科学学院,成都610064;2.安徽大学生命科学学院,合肥230039)麻疯树(JatrophacurcasL.)系大戟科麻疯树属植物,耐干旱贫瘠,抗病虫能力强[1,2],主要生长在热带和亚热带地区,在我国西南地区有丰富的资源.麻疯树种子对整体动物,如小白鼠[3]、羊[4]及人,特别是幼儿[5]表现出一定的毒性,且具有致死作用.麻疯树种子含毒成分主要是种子毒蛋白(curcin),该蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具抗癌活性[6],是一种具开…  相似文献
4.
人纤溶酶原K1—3区基因在大肠杆菌中的表达   总被引:5,自引:0,他引:5  
将人纤溶酶原Krigle 1-3(K1-3)基因插入融合表达载体pET-17b,获得重组质粒pET-K13,转化E.coli BI21(DE3),在IPTG诱导下,人纤溶酶原K1-3基因在E.coli BI21(DE3,pET-K13)中获得高效融合表达,表达量占菌体总蛋白的24%,表达产物以包函体存在,Western blot证明重组 蛋白对人纤溶酶原抗血清有特异免疫原性。  相似文献
5.
人血管生成抑制素基因在大肠杆菌中的融合表达   总被引:4,自引:1,他引:3  
将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体pET-17b的BamHⅠ位点,构建重组质粒pETA2,转化E.coliBL21(DE3).在IPTG诱导下,血管生成抑制素基因在重组转化株E.coliBL21(DE3,pETA2)中获得高效表达.表达产物以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.2%.利用羊抗人纤溶酶原抗血清作为第一抗体,免疫印迹分析证明表达产物具有特异的免疫原性  相似文献
6.
人亲环素A单克隆抗体的制备及鉴定   总被引:3,自引:0,他引:3  
制备人亲环素A特异性单克隆抗体并鉴定其特性。方法:利用基因重组技术大量表达人亲环素A蛋白,纯化后作为抗原免疫的BABL/c小鼠,经细胞融合和筛选,制备特异单克隆抗体。结果和结论;共建立三株稳定分泌抗人CyPA的杂交瘤细胞株,其所产生的单克隆抗体均为IgM型,轻链为k。  相似文献
7.
对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP41的研究   总被引:2,自引:1,他引:1  
VP41蛋白质是对虾白斑综合症病毒的一种结构蛋白,该蛋白质由病毒基因组上的wsv242开放阅读框(ORF)所编码,分子量为41 ku.根据vp41基因的序列,通过PCR扩增获得了该全长基因,将其克隆在载体pET-His上,以E.coli BL21为宿主菌,成功表达并纯化了含His标记的目的蛋白VP41,并制备了特异性鼠抗血清.当纯化的病毒粒子经去污剂处理后,VP41蛋白质被发现完全存在于病毒WSSV囊膜部分,Western blot杂交实验也证实该结果,表明VP41蛋白质是该病毒的一个囊膜蛋白质.通过Far-Western方法还发现VP41具有蛋白聚合作用.  相似文献
8.
泛素-蛋白水解酶复合体通路在小鼠精子变态中的作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
应用重力沉降法分离睾丸各层细胞,通过蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫迹观察各种生精细胞中泛素结合蛋白的表达规律,并通过免疫组织化学方法对其进行组织和细胞水平的定位,表明,在圆形精子和长形精子细胞中泛素结合蛋白增加,在成熟精子中量较低,在精原和精母细胞中量微弱。总蛋白电泳的结果表明,在精子变态过程中蛋白 变化以长形精子细胞转变为成熟精子阶段最为剧烈,其间许多蛋白消失同时半随一些新蛋白的出现,此阶段消  相似文献
9.
水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的克隆、表达及检测   总被引:2,自引:0,他引:2  
以水稻(粳稻)cDNA为模板,设计一对特异性引物,获得编码水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的全序列,ORF区编码含535个氨基酸的蛋白,具有磷酸盐转运蛋白保守的蛋白激酶C作用位点、N端糖基化位点与酪蛋白激酶Ⅱ作用位点Southern blot分析显示此基因在水稻基因组中具有多个拷贝,与水稻基因组序列分析结果一致Westernblot预测目的基因表达的蛋白大小约为57.7ku.该基因的真核表达研究正在进行中.  相似文献
10.
鸡白细胞介素2基因的克隆、原核表达及功能研究   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
以RT-PCR法从鸡脾脏细胞中扩增出鸡白细胞介素2编码基因,通过双酶切、连接步骤克隆进原核表达载体pQE30及pGEX-4T-3,构建了鸡白细胞介素2基因的重组原核表达质粒pQE30-chIL-2及pGEX-chIL-2.重组质粒转化大肠杆菌JM109后经诱导表达,分别得到两种表达产物.以SDS-PAGE和Westernblot检测确认表达产物为带6组氨酸标签及GST蛋白的融合鸡白细胞介素2,分子量分别为16 kDa及39.5 kDa.表达蛋白与抗鸡白细胞介素2单抗均有良好的免疫结合性,进一步证实为鸡白细胞介素2.表达产物经过纯化复性后,具有明显促进鸡脾淋巴细胞增殖的作用.  相似文献
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