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1.
乳糖诱导pET载体表达重组蛋白的研究   总被引:33,自引:4,他引:29  
以重组人B淋巴细胞刺激因子(hBLyS)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3)(pET30(a)/hBLyS)作为研究对象,借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物的表达规律进行了优化研究。分析比较了诱导的起始阶段、所需的乳糖浓度和诱导持续时间等参数对重组产物表达的影响。实验结果表明,对T7lac启动子控制的重组目的产物,乳糖可以作为诱导剂;在对诱导条件进行优化控制的前提下,乳糖诱导目的产物的绝对表达量虽然不及IPTG,但相对成本却比IPTG低得多。研究结果为乳糖作为诱导剂应用于重组基因工程药物工业化生产提供了一定的参考。  相似文献
2.
Tricine-SDS-PAGE电泳分析小分子多肽   总被引:27,自引:1,他引:26  
研究旨在解决常规SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对一些小分子多肽进行电泳分析过程中极易扩散丢失,常无着色带显示等问题。实验采用不同类型胶来电泳分析低分子量多肽,比较Tricine-SDS-PAGE电泳分析小分子多肽时的聚丙烯酰胺浓度和交联度,为小分子多肽的分析与鉴定提供快速准确的条件。  相似文献
3.
一种家蝇幼虫热稳定抗菌肽的分离纯化   总被引:16,自引:0,他引:16  
本文对家蝇三龄幼虫进行了超声处理,以诱导其产生抗菌物质。通过高温处理、酸性处理后,抗菌物质粗提中大量的热不稳定蛋白和酸性蛋白发生沉淀而被去除。将经过上述处理的粗提液经过一步Sephadex G-75凝胶过滤析、两步CM-Sepharose阳离子交换层析后,得到一个单一的具有抗阳性球菌的峰。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示为一条带,相对分子质量大约为7000,将其命名为H1.H1为一种热稳定的碱性抗菌多肽。  相似文献
4.
野生大豆DNA导入小麦及RAPD分子验证   总被引:11,自引:0,他引:11  
利用花粉管通道法将野生大豆总DNA导入小麦,以期获得变异系小麦.对小麦球蛋白的SDS—PAGE,印迹表明,冬小麦T2l6#产生了新的蛋白亚基,其分子量为78kD,而有的变异品系一些蛋白亚基消失了;凯氏定氮法和氨基酸分析表明小麦后代T216#的总蛋白含量增加,其氨基酸组成,尤其是赖氨酸含量明显提高.RAPD分析结果表明,新品系基因组出现多态性,并具有供体特异性DNA带,这些变异现象表明该小麦品系为转基因后代.本实验为选育高蛋白、优质的新小麦品种提供了途径.  相似文献
5.
大豆分离蛋白酶解过程的研究与产物分析   总被引:10,自引:0,他引:10  
将大豆蛋白(SPI)经过Asl.398中性蛋白酶水解,可以获得良好溶解性的多肽,氢基酸及ISSPH等极有利用价值的大豆水解产物.本文探讨大豆分高蛋白经酶水解后产物(SPH)的水解度及粘度变化.通过SDS-PAGE,半微量-凯氏定氮法,G-25凝胶过滤,双缩脲法和茚三酮法分析SPH的可溶上清液和不溶渣滓中成分变化情况,并探讨了水解大豆蛋白在食品上的应用.因为其在营养上有更多的优点,可以作为功能型食品的原料开发出具有生理活性作用的食品.  相似文献
6.
银杏叶片蛋白质含量动态变化的电泳分析   总被引:9,自引:0,他引:9  
利用单向电泳和双向电泳技术,以及考马斯亮蓝染色法研究了银杏雌、雄株叶片中的营养贮藏蛋白质组分和不同季节叶片的可溶性蛋白质含量。结果表明:银杏叶片中可溶性蛋白质含量在生长旺季较高,10月下旬开始下降,至11月中旬降至最低,表明叶片脱落时养分发生了转移。电泳图谱的分析发现,随叶片可溶性蛋白质含量的变化,银杏叶片中的几种蛋白质发生变化。单向电泳结果表明,55kD蛋白在银杏雌株中表现为11月初消失,在雄株中表现为11月中旬消失,32kD蛋白在雌雄株中都表现为11月后消失;而双向电泳的研究除证实55kD蛋白、32kD蛋白发生类似变化,还发现18kD蛋白也发生变化,即11月中旬在雌株中发生明显减少现象,在雄株中明显减少则出现在11月初。  相似文献
7.
耐盐水稻品种9343经盐胁迫后,根系内诱导出一条活性很强的POD3同工酶谱带,而对盐敏感的1187、中作321、中作93盐胁迫后活性很强的POD1谱带消失。蛋白质的变化呈现出与POD变化相类似的趋势,耐盐品种9343盐胁迫后某些蛋白质谱带含量增加,出现分子量与调渗蛋白相类似的26KD蛋白质,但对盐敏感的三个品种则蛋白质含量下降,没有检测到26KD蛋白,辐射后经NaCl胁迫,耐盐的9343中同工酶和  相似文献
8.
真菌细胞破壁方法的研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
用4种处理对真菌细胞进行破壁,使其释放出细胞内物质.处理后的菌液用血细胞计数板计数,得到每毫升菌液中的孢子数和菌体碎片数,观察比较机械破碎的效果.以可溶性蛋白为参照,通过蛋白质的SDS-PAGE分析,比较4种处理方法使细胞破壁后释放蛋白质效果的差异.结果表明,方法2的破碎效果和细胞可溶性蛋白质释放效果都较好,是一种首选真菌细胞破壁的方法。  相似文献
9.
小麦谷蛋白亚基的快速提取分离及SDS-PAGE分析   总被引:5,自引:0,他引:5  
用70%乙醇和50%异丙醇除去醇溶蛋白,以二硫苏糖醇(DTT)为还原剂,在50%异丙醇,0.08mol/L Tris-HCl(pH为8.0)缓冲液中提取总麦谷蛋白亚基,加入丙酮至浓度为40%时,高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)沉淀析出;继续加入丙酮至80%时,析出低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS).在3.3%浓缩胶和10%分离胶的不连续体系中进行SDSPAGE电泳,结果表明,该方法可以有效地除去醇溶蛋白对麦谷蛋白亚基电泳分析的背景干扰,HMW-GS和IMW-GS的提取、分离一步完成,操作简便,时间短,对大量小麦样品的HMW-GS和LMW-GS可以快速分离、提纯和鉴定.  相似文献
10.
草鱼生长激素基因的克隆及原核表达研究   总被引:5,自引:2,他引:3  
应用RT-PCR技术从草鱼脑垂体总RNA中克隆草鱼生长激素cDNA(cGH),全长669bp,含开放阅读框633bp,编码210个氨基酸,分子量为23.6kDa,等电点为6.28;与已报道的草鱼GH有12个碱基、3个氨基酸残基的差异,同源性为98%.将草鱼cDNA定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组草鱼GH基因质粒pGEX-GcGH,经IPTG诱导,pGEX-GcGH在大肠杆菌中可表达49.6kDa的融合蛋白.  相似文献
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