新疆天山北部地区加工番茄上ToMV和CMV的动态分析

为研究加工番茄上ToMV和CMV消长动态,采用RT-PCR方法对新疆天山北部6个地区采集的加工番茄样品进行了分子检测。结果表明:不同地区的138份加工番茄样品中,石河子、奎屯、乌苏的样品在存在CMV和ToMV,并以CMV为主,ToMV次之;从石河子蔬菜研究所,按不同品种不同时间采集的加工番茄660份样品中,CMV的检出率为21.5%,ToMV的检出率为12.1%,2种病毒的复合检出率为8.9%,病毒的检出率明显低于往年;CMV和ToMV分别在6月25和7月11日左右开始发生,CMV比ToMV早发生10-15 d。2种病毒的发生高峰期都在8月中下旬,复合侵染发病期在7月下旬;品种间2种病毒的消长动态没有明显的差异。     

杨树抗杨四瘿螨相关基因的表达分析

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术，在构建杨四瘿螨诱导差异表达的抑制消减cDNA文库的基础上，通过RTPCR技术对候选基因进行了验证，其中有6条差异表达候选基因在4个时间点表达量有明显的增强。运用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术克隆获得了一段全长2 053 bp的cDNA克隆，命名为PtWRKY，编码588个氨基酸。     

抑癌基因WWOX在结直肠癌中的表达

检测WWOX mRNA及其编码蛋白在结直肠癌中的表达，分析其临床病理学意义。用半定量RT—PCR方法定量和免疫组化染色（EliVision plus法）分析45例结直肠癌、45例结直肠腺瘤及20例正常组织中WWOX mRNA及其编码的蛋白质表达量，并比较两者在不同组织中的表达差异。半定量RT-PCR和免疫组化结果显示。45例结直肠癌组织中WWOX mRNA表达水平低于结直肠腺瘤组及正常结直肠组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结果表明，WWOX的低表达与结直肠癌的发展、生物学行为和预后有相关性。     

从福尔马林固定的癌组织中提取RNA的方法

目的:寻求从福尔马林固定的癌组织中提取RNA的合理方法.方法:运用Trizol法从福尔马林固定的胃癌组织中提取RNA,用分光光度计测定RNA的产量和纯度;通过RT-PCR对不同长度的管家基因-actin进行扩增.结果:100 bp和300 bp的-actin均能顺利扩增出特异性条带,500 bp的-actin未能扩增.结论:用Trizol法从福尔马林固定的癌组织中提取RNA是可行的;进行RT-PCR时应尽量设计小片段引物(100~300 bp)以获得更好的扩增效果.     

芜菁花叶病毒四川分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析

从四川省3个蔬菜基地感病的甘蓝、花菜、萝卜、叶芥菜分离到芜菁花叶病毒6个分离物.利用 RT-PCR克隆了这6个分离物的外壳蛋白基因(CP), 测定了它们的核苷酸序列并进行了序列分析. 结果表明,6个分离物的 CP基因均为864个碱基,核苷酸序列同源性较高, 达 97.0%～100%;它们与 world-B组分离物的同源性最高,达 92.1%～100%;与 basal-B组分离物的同源性最低,仅 87.6%～90.2%. 基于 TuMV的 CP基因核苷酸序列的分子进化树显示,TuMV分离物可分为4组,本研究所分离到的6个 TuMV四川分离物属于第四组,即 world-B组.     

大麦紫黄素脱环氧化酶基因片段的克隆与分析

根据紫黄素脱环氧化酶基因(VDE)基因的保守序列设计引物,用RT-PCR的方法从大麦叶片总体RNA中克隆到VDE基因片段,测序结果显示其长度为 639bp,BLASTx比对显示与已发表的VDE基因有较高的同源性。Northern杂交表明VDE基因的表达水平成熟绿叶片中达到最高。     

犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

根据Barrett发表的犬瘟热病毒 (CDV)Onderstepoort弱毒株融合蛋白 (F)基因序列 ,设计合成了一对寡聚核苷酸引物 ,并以南京农业大学惠赠的Onderstepoort标准株反转录产物为模板 ,建立了CDV的RT PCR方法 ,并应用于CDV的诊断。结果表明 ,以该对引物 ,只能从CDV ONP标准株反转录产物中扩增出大小为 32 4bp的核苷酸片段 ,与理论设计值大小一致 ,而正常Vero细胞和同为副粘病毒科的新城疫病毒 (NDV)作为对照 ,病毒扩增结果为阴性。RT PCR可检出 1μl作 10 6倍稀释的CDV ONP标准株反转录产物 ,说明其具有很高的敏感性。应用试验结果 ,可从感染CDV犬的组织病料中提取RNA ,反转录产物中也扩增出 32 4bp的核苷酸片段。通过本研究不仅建立了敏感性、特异性好的CDV的RT PCR检测方法 ,也为F基因的克隆和序列测定及表达奠定了基础。     

传染性法氏囊病快速诊断技术的建立及其应用

根据已发表的IBDV各致病型毒株的序列，在病毒结构蛋白VP2编码基因的高变区(VP2 variable domain,vVP2)两端外侧的保守序列内设计合成了2条寡核苷酸引物，对各种不同致病型的12株参考毒株进行逆转录酶一聚合酶链式反应(RT—PCR)的检测．结果 12个参考毒株均能扩增出约679 bp的目的片段，而对作为阴性对照的常见5种鸡病病原NDV、IBV、CAIV、E．coli、pM均没有扩增出任何片段；应用建立的技术对疑似IBD的34份临床病料进行检测，并同时在基础RT—PCR扩增的片段内设计另一对引物进行Nested—PCR检测．结果基础RT—PCR方法检测到ll份阳性，Nested-PCR检测到23份阳性．研究的结果表明建立的IBD的RT—PCR诊断技术具有特异、快捷、敏感的特点．在此基础上设计的Nested—PCR则大大提高了阳性检出率(提高52．1％)．     

大鼠肝ADAMs种类鉴定及肝再生过程中ADAMsmRNA差异分析

以 2 / 3肝切除 (patialhepatectomy ,PH)大鼠为材料 ,利用PT -PCR技术 ,通过ADAMs通用引物初步分析了肝脏中ADAMs种类及PH后恢复 4h和 36h时ADAMsmRNA差异。结果表明 :PH后不同恢复时间ADAMsmRNA的扩增谱带没有差异 ,但扩增谱带的强弱有变化 ;cDNA克隆和测序分析表明 ,大鼠肝脏有ADAM15和ADAM 19mRNA同源序列。     

新疆白蒜洋葱黄矮病毒的分子鉴定

从新疆吉木萨尔县采集具有条纹花叶、畸形等症状的大蒜叶片提取总RNA,利用洋葱黄矮病毒的特异性引物进行RT-PCR扩增,可得到大小为1402bp片段。将获得的片段克隆到PMD18-T载体进行序列测定和同源性比较,结果表明,OYDV新疆吉木萨尔分离物为1402个核苷酸,可编码467个氨基酸,与GeneBank中的12个OYDV核苷酸序列相比,序列同源性为80%～99%,由此推导的氨基酸序列同源性为88%～99%。