首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
文章检索
  按 检索   检索词:      
出版年份:   被引次数:   他引次数: 提示:输入*表示无穷大
  收费全文   97篇
  国内免费   4篇
  完全免费   26篇
  综合类   127篇
  2015年   2篇
  2014年   7篇
  2013年   2篇
  2012年   12篇
  2011年   9篇
  2010年   8篇
  2009年   2篇
  2008年   7篇
  2007年   11篇
  2006年   12篇
  2005年   14篇
  2004年   14篇
  2003年   7篇
  2002年   12篇
  2001年   4篇
  2000年   3篇
  1998年   1篇
排序方式: 共有127条查询结果,搜索用时 31 毫秒
1.
抗菌肽AD基因的改造及在毕赤酵母中的表达   总被引:14,自引:0,他引:14  
采用PCR技术改造抗菌肽AD基因,将其C末端改造为Asn编码,改造后的抗菌肽Cecropin AD基因克隆到pPICZα-A载体上,构建成酵母重组分泌型表达载体,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)受体菌GS115中,采用zerocin抗性标记筛选重组转化子,经摇瓶发酵,浓缩发酵液进行酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和抑菌活性检测。结果表明,改造后的Cecropin AD基因在毕赤酵母中获得了表达,表达产物经α-Factor信号肽引导分泌到胞外,具有较强的杀菌活性。  相似文献
2.
外源蛋白在巴氏毕赤酵母中高效表达的策略   总被引:14,自引:0,他引:14       下载免费PDF全文
 高效表达外源蛋白, 在理论和实践上特别是在生物制药中具有重要意义, 巴氏毕赤酵母( Pichia pastoris) 是表达外源蛋白最理想的真核表达系统之一.影响外源蛋白在 P. pastoris中表达的因素很多, 主要包括外源基因自身的特性、载体、宿主细胞几个方面,了解和灵活运用它们的联系,有助于获得外源基因在 P. pastoris 中的高效表达.  相似文献
3.
利用转基因毕赤酵母高表达小分子药用多肽的研究   总被引:7,自引:2,他引:5       下载免费PDF全文
天然小肽Gsp有明显的降血糖功效,由59个氨基酸残基组成。其编码基因由本实验室设计、合成,并重组构建成表达质粒 pPIC9-Gsp。经电穿孔将该质粒转化为毕赤酵母GS115 (His4-mut+ ),挑选His+ muts 型菌株进行重组蛋白胞外表达研究。表达蛋白经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析确定了相对分子质量的正确性,其氨基酸测序显示与天然多肽序列一致,并经紫外扫描分析确定了表达量为344mg/L左右。  相似文献
4.
将编码枯草芽孢杆菌AS1.398 的中性蛋白酶功能区和包含前导区序列(“pro”序列)在内的全长基因克隆到酵母整合型质粒pPIC9K中,电转化His4 缺陷型巴斯德毕赤酵母SMD1168,通过MD-G418平板、PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS-PAGE分析和酶活测定表明,枯草芽孢杆菌AS1.398的全长中性蛋白酶基因在毕赤酵母中获得了高效表达,表达产物分泌至培养基中,分子量约为43kD。经甲醇诱导培养后,发酵液中的中性蛋白酶活力达20000 U/mL。  相似文献
5.
家蝇防御素defensin cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达   总被引:6,自引:0,他引:6  
提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pasto-ris)受体菌GS115。经表型筛选和PCR鉴定证明目的片段已稳定整合到酵母染色体基因组中。在含不同浓度的Zeoc in平板上筛选到高拷贝整合的转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达,用Tric ine-SDS-PAGE确定了表达产物的正确性,琼脂孔穴平板扩散法、比浊法测定了表达产物的活性,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的杀菌活性。  相似文献
6.
天蚕抗菌肽B在毕赤酵母中的表达   总被引:6,自引:0,他引:6  
Cecropins B是一种昆虫抗菌肽,具有分子量小,热稳定性、水溶性好、抗菌谱广等优点,更为重要的是抗菌肽对真核细胞几乎没有作用,仅仅作用于原核细胞和发生病变的真核细胞,是目前已知天然抗菌肽中活力最强的一种。根据毕赤氏巴斯德酵母(Pichia pastoris)偏好密码子,改造并化学合成天蚕素基因B,克隆到pPIC9K载体中,构建分泌型重组酵母表达载体CB-pPIC9K,转化Pichia pastoris受体菌KM71,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,Cecropin B获得表达,分子量约3.8KD,摇瓶发酵产率可达到200μg/mL,并对其抗菌活性进行了初步测定。结果表明我们表达的重组Cecropins B对G-菌有较好的抑菌活性,且具有较好的热稳定性。这些特点使得重组抗菌肽Cecropins B在食品防腐、疾病防治和动物饲料添加剂等方面显露出很好的应用前景。  相似文献
7.
蚯蚓纤溶酶7~#组分基因在甲醇酵母中的克隆与表达   总被引:6,自引:2,他引:4  
为了使蚯蚓纤溶酶(EFE)最佳活性组分EFE_7#基因在甲醇酵母(Pichiapastoris)中获得表达,构建了表达载体pPIC9K_EFE,通过对电击条件的优化,转化率达到5×103个/μgDNA.为了便于筛选阳性克隆,以该基因的原核表达产物为抗原免疫动物,获得了与天然EFE_7#组分具有相同免疫特异性的抗体.用该抗体为探针对上述转化子进行筛选,得到了上百株阳性重组子.RT_PCR和westernblotting证明,EFE_7#基因在这些重组子中获得了表达,表达产物相对分子质量高于天然产物.  相似文献
8.
野生革耳菌漆酶cDNA在巴斯德毕赤酵母中的表达   总被引:5,自引:0,他引:5  
将分离到的野生革耳菌(Panusrudis)漆酶的cDNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建成受强启动子AOX1控制的重组表达载体.重组质粒DNA经BglII线性化后,电击转化毕赤酵母GS115细胞,通过G418筛选和PCR鉴定的重组酵母在甲醇诱导后能分泌表达活性漆酶.低温培养是该漆酶基因活性表达的必要条件.培养基中添加400μmol/L的CuSO4最有利于漆酶的活性表达.  相似文献
9.
人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达   总被引:5,自引:0,他引:5  
甲醇酵母(Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人Cu,Zn-SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体pPIC3.5K,经转化his4缺陷型酵母GS115,用MD培养基及PCR方法筛选阳性转化子,并用含G418的YPD培养基筛选多拷贝转化子,经甲醇诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人Cu,Zn-SOD,经计算机扫描分析,表达量占酵母可溶性  相似文献
10.
巴氏毕赤酵母SMD1168表达人溶菌酶的发酵条件   总被引:4,自引:1,他引:3  
研究用毕赤酵母SMD1168菌株(MutS,HIS4+)表达人溶菌酶(HLZ)的发酵条件。此菌株具有对胞外分泌的外源蛋白不降解、对反应器氧传递效率的限制不敏感的特性,有利于在常规反应器条件下的过程放大。在培养基中添加复合维生素,在流加甲醇溶液中添加山梨醇或甘露醇可维持细胞正常的生长和代谢,并表达高活性的HLZ。采用恒溶解氧的方式流加甘油溶液以提高细胞密度,在一段时间内使细胞处于碳源半饥饿状态后,使用恒速流加甲醇溶液诱导HLZ表达。HLZ的体积生成速率达到9.6mg/(L·h)左右,上清液中HLZ的含量约为1.6g/L,发酵周期为110h。  相似文献
设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号