根癌农杆菌介导的GFP在洋葱表皮细胞定位研究

采用根癌农杆菌介导的方法,以受控于CaMV35S启动子的携带有GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1300-35S-GFP转化洋葱表皮细胞.荧光显微镜下观察结果显示,GFP基因在经浸染和共培养后的洋葱表皮细胞中得到了表达,绿色荧光分布在细胞核和细胞质中,为进一步研究新基因的亚细胞定位和瞬时表达奠定了基础.     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

Shoot regeneration fromAgrobacterium tumefaciens-induced tumors of a tropical timber tree,Fagraea fragrans

Summary Agrobacterium tumefaciens A208 with nopaline plasmid pTiT37 was used to obtain stem tumors on plantlets ofFagraea fragrans grown in vitro. Bacterial elimination and tissue proliferation were simultaneously achieved by growing tumors on cefatoxime medium. After some tissue growth the shoots regenerated. An examination of these showed the presence of nopaline, indicating genetic transformation by T-DNA.     

影响农杆菌介导的辣椒基因转化因素的研究

试验设置农杆菌类型、辣椒基因型、外植体、vir基因活化培养基、方法5个因素，研究了利用根癌农杆菌介导法辣椒遗传转化的效果。以获得Km抗性芽外植体频率为指标，发现农杆菌菌株类型和辣椒基因型对转化效率都有较大影响，直接影响着转化效率。采用预培养2d的子叶外植体，用农杆菌侵染5～7min，可获得最高的转化效率。     

胰蛋白酶抑制剂抗虫基因转化烟草的研究

实验用携带质粒pAM194/TI的根癌农杆菌LBA4404转化烟草,通过筛选,共获得35株卡那霉素抗性苗.GUS组织染色、PCR检测及抗虫试验表明胰蛋白酶抑制剂抗虫基因已经成功地整合进再生植株染色体基因组中,有些已正确表达.     

农杆菌介导的胆碱脱氢酶基因(betA)转化小麦及影响转化效率的因素

用LBA4404／pCDH，Agl 1／pUNN2和Ag;P(无质粒)3种菌株分别转化小麦品种济南177、99P、核生3号幼胚诱导的愈伤组织以及济南177的幼胚．其中以胚性愈伤组织为外植体，获得了转基因植株．PCR和PCR-Southem分析证实转化植株中包含了外源基因．通过染色体分析，发现胚性愈伤组织在农杆菌LBA4404侵染后形成的染色体削减比经Agl1侵染和未经感染的对照形成的染色体削减程度更大，甚至发现较多的染色体断片．分析了农杆菌菌株，材料的基因型，外植体类型，培养时间和温度以及筛选的时间和周期对于转化效率的影响．     

根癌农杆菌介导苜蓿体胚转化及转基因植株再生

用含质粒载体pCAMBIA2301(带有受CaMV35S启动子调控的GUS基因和nptⅡ基因)的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens转化晋南苜蓿Medicago sativa L.cv.Jinnan的体胚组织,发现负压处理有利于提高转化频率(可达35%),3批共158个体胚切块的转化实验共获得具有卡那霉素抗性的再生植株15株,经组织化学染色和分子检测,证实GUS基因已整合到转化植株基因组中,在芽、叶片、叶柄和根等组织中均有表达,并在土壤栽培过程中保持稳定的表达.     

大苞栝楼发根在光辐射发根反应器中的培养

利用农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)R1601诱导药用植物大苞栝楼(Trichosanthes bracteata Voigt)外植体无菌苗发根，建立毛状根生物反应器培养系统．分析了光照强度、溶氧饱和强度及碳源等外界影响因子对反应器中发根生长的作用．结果表明：在光照强度为25W／m^2、溶氧饱和强度为80％时，发根的比生长速率与生物量维持在较高的水平；蔗糖对发根生长的促进作用明显优于葡萄糖：在30～40g／L的糖含量范围内，于MS培养基中采用两级添加方式添加蔗糖，发根生物量(9．5g／L)比采用单级添加方式的(7．2g／L)高出20％以上．     

多因子正交试验对发根农杆菌生物波培养基的筛选

用Ｌ１６（４＾５）正交设计考察了牛肉浸膏、酵母浸出汁、蛋白胨、蔗糖及琼脂５种ＶＥＢ细菌培养基成分对发根农杆菌Ａ４的生物波形成的影响,主差分析结果显示,各因子对菌落直径的影响都极显著,它们的作用大小依次为：琼脂,蛋白胨,蔗糖,牛肉浸膏,酵母梁出汁,各因子对生物波成环数的影响也都极显著,它们的作用大小依次为：蔗糖,牛肉浸膏,蛋白胨,酵母浸出讦,琼脂,筛选出的最佳波动波动培养基为２．０ｇ／Ｌ牛肉浸膏＋０     

大肠杆菌甜菜碱醛脱氢酶基因的测序及对烟草的转化

对利用聚合酶链式反应所克隆的大肠杆菌ｂｅｔＢ基因进行了序列测定,结果证实获得了该基因的克隆ｐＸＹ０１,ｐＸＹ０５以及亚克隆ｐＸＹ１１。将该基因置于ＣａＭＶ３５Ｓ启动子调控下,导入根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４中,叶盘法转化烟草,在含卡那霉素的选择培养基上筛选抗性芽,并进一步诱导小植株的再生。利用ＰＣＲ技术检测基因整合到烟草基因组中。