拟南芥微管结合蛋白WDL3参与ABA诱导的气孔关闭过程

以拟南芥WDL3RNA干扰株系(WDL3RNAi)和Tubulin5A-YFP植株等为材料,从叶片的失水率、气孔开度、保卫细胞微管骨架动态排布以及Ca~(2+)流动等不同角度探究在脱落酸(abscisic acid, ABA)诱导的气孔关闭信号通路中,微管结合蛋白WDL3与微管骨架以及Ca~(2+)之间的功能关系,深入了解气孔运动机理.结果表明:(1)相同条件下,WDL3RNAi的叶片蒸腾速率明显慢于野生型.(2)气孔开度实验中,WDL3RNAi对ABA信号比野生型更敏感,气孔关闭更快;微管稳定剂紫杉醇(Paclitaxel)可部分阻碍ABA的作用,微管解聚剂黄草消(Oryzalin)则进一步促进ABA诱导的气孔关闭,但WDL3 RNAi与野生型之间仍存在显著差异;激光共聚焦扫描显微镜观察发现, ABA条件下WDL3 RNAi保卫细胞内微管解聚明显加快,微管成束程度(bundling)显著降低.(3)胞内Ca~(2+)螯合剂BAPTA与ABA共同处理,野生型和WDL3RNAi的气孔关闭均受到不同程度的抑制,关闭减缓,处理前后差异显著.亚细胞结构观察发现, BAPTA阻碍了ABA引起的保卫细胞微管解聚,但WDL3 RNAi与野生型相比,依然维持相对较高的微管解聚比例.此外,非损伤微测技术检测发现,ABA引起的保卫细胞Ca~(2+)内流在WDL3RNAi中较野生型的流速更快,流量加大,显示Ca~(2+)在该信号通路中具有重要作用.综上实验结果表明,微管结合蛋白WDL3通过与微管骨架及Ca~(2+)相互作用参与ABA诱导的气孔关闭过程.     

水在不同管径超疏水性微管内的流动特性

在改性有机硅稀溶液中加入2%全氟辛基氟硅烷以及添加剂配制成超疏水液,采用滴定法在内径分别为0.447、0.728和0.873 mm的3种微铜管内壁实现微米级超疏水性涂层涂覆,其水滴表观接触角超过150°。建立微管内流动特性实验系统对超疏水性处理的减阻规律进行了实验研究,分别测量了雷诺数为100~3 000时去离子水流过处理前后微铜管时的内部摩擦阻力系数f。研究发现,内壁面的超疏水性处理显著降低了微管内的流动阻力,且该影响随微管内径的增加而增大,实验范围内流动阻力系数最大降幅达29.08%。超疏水涂层使得微管内的流动转捩现象出现滞后,且转捩Re随微管管径增加而略有增大。     

微管剪切蛋白Fidgetin在黑腹果蝇 神经发育过程中的功能初探

微管(microtubule,MT)是一种具有极性的细胞骨架.在微管动态变化过程中,有两类蛋白参与微管组装和解聚的动态调节.Fidgetin(Fign)的编码基因为CG3326,它是其中的去组装因子之一,参与微管剪切和末端解聚.本实验使用CRISPR/Cas9系统,构建fidgetin无功能突变体果蝇品系(fidgetin~(null)),观察fidgetin功能缺失对果蝇的神经发育的影响.结果表明fidgetin~(M14-2)会导致神经肌肉突触(neuromuscular junction,NMJ)的扣结数增多.通过观察fidgetin~(M14-2)的表型从而初步判断fidgetin基因对神经系统发育的影响,为fidgetin基因功能与致病机制的进一步研究提供基础.     

NGF诱导PC12细胞转化为神经样细胞微管相关蛋白2(MAP2)的表达

目的探讨神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化为神经元样细胞时MAP2的表达变化情况.方法细胞培养6 d后应用共聚焦显微镜观察MAP2表达情况;Western Blot法检测诱导不同时间点MAP2的表达情况.结果免疫组化结果显示:MAP2表达呈阳性;免疫印迹结果显示:MAP2蛋白表达在不同时间点呈动态变化,即随诱导时间延长呈递增趋势.结论 NGF成功诱导PC12细胞分化为神经样细胞,为缺血性脑卒中的体外细胞研究提供细胞参考.     

19．6μm内径的微石英管内部流动与传热的实验研究

采用实验方法研究了去离子超纯水流过内径为19．6μm的微管过程中的流动与换热特性。通过测量蒸汽加热的微管进出口的压降以及温度，得到了微管内去离子水流动的摩擦系数和Nu数，并对结果进行了分析。研究结果表明，在粘性耗散效应以及双电层效应的综合影响下微管内的摩擦系数要高于Hagen—Poiseulle理论值；而由于受流体热物性变化以及共轭传热的影响，当Re数小于400时实验测得的Nu数要低于经典层流管流的理论值。     

紫杉醇治疗卵巢癌的护理

紫杉醇是从紫杉树中提取的双萜烯植物制品，属新型广谱活性抗癌药，其独特的作用机理是促进微管蛋白聚合抑制解聚，保持微管蛋白的稳定，抑制细胞有丝分裂。主要毒性为中性白细胞减少和周围神经病变，其他毒性有过敏反应、低血压、心动过缓、肌肉关节痛、脱发等。2009年18月～2010年5月，我科对中晚期卵巢癌患者应用紫杉醇联合奈达铂[TP方案]进行化疗，取得了一定疗效，提高了患者生存质量。现将护理体会报道如下。     

IL-8-induced L-selectin shedding regulates its binding kinetics to PSGL-1

L-selectin plays a crucial role in inflammation cascade by initiating the tethering and rolling of leukocytes on endothelium wall. While many L-selectin molecules are rapidly shed from the cell surface upon activation, the remaining membrane-anchored L-selectin may still play an important role in regulating leukocyte rolling and adhesion with different binding kinetics. Here we developed an in vitro model to activate Jurkat cells via interlukin-8 （IL-8） and quantified the two-dimensional （2D） binding kinetics, using a micropipette aspiration assay, of membrane-anchored L-selectin to P-selectin glycoprotein ligand 1 （PSGL-1） ligand coupled onto human red blood cells （RBCs）. The data indicated that L-selectin shedding reduced the amount of membrane-anchored L-selectin and lowered both its reverse and forward rates. These results suggested that the rolling dynamics of activated leukocytes was determined by two opposite impacts： reducing the surface presentation would enhance the rolling but lowering the kinetic rates would decrease the rolling. This finding provides a new insight into understanding how L-selectin shedding regulates leukocyte rolling and adhesion.     

HeLa/GFP-α-tubulin/GFP-CENP-A 细胞系的构建及对其有丝分裂的观察

有丝分裂中染色体的正确排列及准确地分离依赖于一系列的分子调控机制;其中微管的精确组装与运动发挥着重要的调控作用。微管功能调控异常可导致基因组不稳定性,从而促进肿瘤的发生;同时许多以微管为靶点的抗肿瘤药物被临床广泛应用。为了在细胞水平更好地研究微管的作用机制,利用慢病毒系统构建了稳定表达绿色荧光蛋白GFP-tubulinα及GFP-cenp A的HeLa细胞系,通过实时成像的激光共聚焦显微镜,实现了对HeLa细胞在有丝分裂期微管运动的动态观察,为研究肿瘤的发生机制及抗肿瘤药物的作用机理提供了实验基础。     

植物细胞50 ku类角蛋白与β微管蛋白共存

用选择性抽提法从悬浮培养的烟草原生质体中得到类中间纤维蛋白,免疫印迹反应显示其主要成分是分子量分别为64,58,55,54,50,45 ku的6种类角蛋白,其中50 ku蛋白与微管蛋白多抗亦有免疫交叉反应. 双向电泳显示50 ku蛋白包含两种多肽成分. 对分离纯化得到的50 ku蛋白进行部分序列测定,结果表明两种多肽成分分别为新的未知序列蛋白和β微管蛋白. 结合以往的实验结果,证明在植物中间纤维成分中,50 ku 类角蛋白与β微管蛋白相结合,可能由此介导了植物中间纤维与微管共分布.