变性高效液相色谱检测霍乱弧菌

变性高效液相色谱（DHPLC）是近几年刚发展起来的一种快速检测PCR扩增产物的新技术．应用该技术快速检测O1、O139、非O1、非O139群霍乱弧菌的外膜蛋白基因（ompW）．根据霍乱弧菌外膜蛋白基因的特异性引物，PCR扩增的产物经DHPLC进行快速检测．以54株参考菌株做特异性检测．在丹东口岸国境外环境水体采集水样310份，以PCR—DHPLC和常规分离培养进行了比较，对丹东口岸国境外环境水体霍乱弧菌感染状况进行了检测，并对分离株进行了ompW基因测序．试验结果表明该方法有很好的特异性，310份水样中经PCR—DHPLC检测出58株霍乱弧菌的分菌株，阳性率为19％，与常规分离培养比较，符合率为100％．分离株的ompW序列与Genbank中的存在1％～3％的差异．这种检验方法特异性强，简便快捷，为霍乱防治提供了一种有效的检测新手段．  

双重PCR法快速检测欧鳗鲡嗜水气单胞菌

采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌为阳性对照,以大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、鳗弧菌、溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌为阴性对照检测了嗜水气单胞菌溶血素与外膜蛋白基因的特异性.结果表明:被检测的32株欧鳗鲡致病菌中,检测到的4株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌,其生化鉴定结果全部为嗜水气单胞菌,而仅具有外膜蛋白基因的13株细菌中只有5株生化鉴定结果为嗜水气单胞菌.证明双重PCR法可用于快速检测部分嗜水气单胞菌.  

不同盐度对Halomonas aquamarina外膜蛋白表达的影响

革兰氏阴性细菌的外膜蛋白(Omp)在维持细菌的生理状态和抵抗外界极端环境中起重要的作用.为研究革兰氏阴性细菌外膜蛋白的抗盐机制,通过比较深海中度嗜盐菌Halomonasaquamarina在正常盐度浓度(0.56mol/LNaCl)、较高(1mol/LNaCl)和高盐度(2mol/LNaCl)下外膜蛋白的双向电泳图谱,获得11个差异点.对这11个差异点进行肽质量指纹图谱及其生物信息分析,鉴定出其中的6个蛋白,并对中度嗜盐细菌外膜蛋白的抗盐机理做了初步的探讨.  

禽大肠杆菌O18、O78分离株免疫保护机理的研究

以禽原性大肠杆菌Ｏ１８，Ｏ７８分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫１４日龄鸡，以相同或不同外膜蛋白（ＯＭＰ）型的Ｏ１８，Ｏ７８分离株攻毒，结果以Ｏ７８血清型内相同和不同ＯＭＰ型分离株间能获得最大保护，Ｏ１８血清型内相同ＯＭＰ型分离株间获得最大保护，而不同ＯＭＰ型分离株间不能保护，两个血清型的分离株间不率ＯＭＰ型是否相同，均缺乏保护，以间接ＥＬＩＳＡ试验，间接血凝试验分别测定了试验鸡针对大肠杆菌ＯＭ  

用杆状病毒表达系统表达的HIV-2gp105和gp36的反应原性与抗原特异性分析

用ELISA方法分析由杆状病毒 昆虫细胞表达系统表达的HIV 2外膜蛋白gp1 0 5和跨膜蛋白gp36的反应原性和特异性 .结果表明 ,二者均具有很好的反应原性和抗原特异性 ,可作为免疫抗原和检测抗原加以应用  

哈维氏弧菌TS-628菌株抗原性研究

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼虾养殖中常见的致病菌,由该菌引发的病害给世界各地的养殖业带来重大经济损失,但对其有效抗原的筛选或相关疫苗的研究报道相当少,对其病害的防治也尚无有效措施.本文以患病青石斑鱼分离到的病原菌哈维氏弧菌TS-628菌株为研究对象,分别提取它的鞭毛蛋白、脂多糖(LPS)和外膜蛋白(OMP),并采用Western blot技术分析检测这3种成分的抗原性.结果显示,鞭毛蛋白主要的免疫印迹带约有4条,其中43、52 ku为主要免疫反应显色带;OMP主要的免疫印迹带约有5条,其中43 ku为最主要免疫反应显色带, 35、38、47和52 ku也具有较强的免疫显色反应.LPS没有检测到免疫印迹反应.这一研究结果将为灵敏检测哈维氏弧菌以及研制高效疫苗奠定基础.  

Determination of the genus-specific antigens in outer membrane proteins from the strains of Leptospira interrogans and Leptospira biflexa with different virulence

Objective:To determine the existence of genus-specific antigens in outer membrane proteins (OMPs) of leptospira with different virulence. Methods: Microscope agglutination test (MAT) was applied to detect the agglutination between commercial rabbit antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen and 17 strains of Leptospira interrongans belonging to 15 serogroups and 2 strains of Leptospira biflexa belonging to 2 serogroups.The outer envelopes (OEs) of L.interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar lai strain lai (56601) with strong virulence and serogroup Pomona serovar pomona strain Luo (56608) with low virulence,and L.biflexa serogroup Semaranga serovar patoc strain Patoc I without virulence were prepared by using the method reported in Auran et al.(1972).OMPs in the OEs were obtained by treatment with sodium deoxycholate. SDS-PAGE and western blot were used for analyzing the features of the OMPs on electrophoretic pattern and the immunoreactivity to the antiserum against TR/Patoc I antigen, respectively. Results:All the tested strains belonging to different leptospiral serogroups agglutinated to the antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen with agglutination titers ranging from 1:256-1:512. A similar SDS-PAGE pattern of the OMPs from the three strains of leptospira with different virulence was shown and the molecular weight of a major protein fragment in the OMPs was found to be approximately 60 KDa.A positive protein fragment with approximately 32 KDa confirmed by Western blot,was able to react with the antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen, and was found in each the OMPs of the three stains of leptospira.Conclusion: There are genus-specific antigens on the surface of L.interrogans and L.biflexa. The OMP with molecular weight of 32 KDa may be one of the genus-specific protein antigens of leptospira.  

多杀性巴氏杆菌抗原的研究进展

多杀性巴氏杆菌在自然界分布广泛，是畜、禽、野生动物及人类的一种共惠性病原．可以在同种和不同种的动物间传染，可以引起多种畜禽巴氏杆菌病，主要就多杀性巴氏杆菌的抗原成分进行概述．  

弧菌广谱性外膜蛋白抗原筛选及其单抗的交叉免疫原性研究

采用生物信息学方法分析几种病原性弧菌OmpK、OmpU和OmpW蛋白种间和种内的同源性,筛选高保守性蛋白OmpW.成功构建具备稳定分泌抗体IgG3的细胞株S5C10,鉴定其对5种弧菌具有特异性交叉免疫反应,而对9种非弧菌无免疫反应.研究结果显示OmpW可作为广谱性疫苗成分,其单抗可特异性检测多元弧菌.  

嗜水气单胞菌外膜蛋白omp TS基因的高效表达及其免疫原性

根据嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的核苷酸序列设计引物，运用聚合酶链式反应(PCR)扩增出与预期大小相符的基因片段。将此基因片段克隆至质粒pRSET A的BamH I和EcoR I位点，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTC诱导获得高效表达，SDS—PAGE蛋白电泳表明在39．9kD处出现超强特异带，占总蛋白的51％。以Ni-NTA-Conjugate抗体进行Western blot分析证明该39．9kD的蛋白为所表达的融合蛋白。纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异抗体。ELISA和Western blot检测结果显示，该抗体与表达的融合蛋白和嗜水气单胞菌中提取的36．9kD外膜蛋白均呈阳性反应，表明所表达的融合蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性，从而为此融合蛋白作为疫苗的候选成份提供理论依据。