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1.
载脂蛋白E-基因敲除鼠VLDL和IDL在动脉硬化中的作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
探讨载脂蛋白E(apoE)-基因敲除鼠极低密度脂蛋白(VLDL)和中间密度脂蛋白(IDL)组分(apoEko-VLDL/IDL)致动脉硬化作用.采用超离法从apoE-基因敲除鼠血浆中分离VLDL和IDL组分,与鼠腹腔巨噬细胞共育,观察apoEko-VLDL/IDL与巨噬细胞的相互作用.ApoEko-VLDL/IDL导致细胞胆固醇酯含量显著增加.其诱导的细胞[3H]胆固醇油酸脂量高达15.1nmol/mg细胞蛋白,是天然低密度脂蛋白的8.4倍.形态学观察显示,经apoEko-VLDL/IDL处理的巨噬细胞与苏丹黑B呈阳性染色.细胞结合实验表明,125I-apoEko-VLDL/IDL与巨噬细胞的总结合可被非标记配基取代80%以上,特异结合呈一饱和图形.同时细胞缔合和细胞内降解实验也显示相似结果.非修饰的apoEko-VLDL/IDL可通过一特异而不依赖于apoE的途径导致巨噬细胞胆固醇酯的显著蓄积  相似文献
2.
获得四环素抗性的温敏同源重组载体质粒pRNT15的构建   总被引:1,自引:0,他引:1  
苏云金芽孢杆菌工程菌株TnX对蚊幼虫具有高毒力,但红霉素抗性基因的存在限制了其商品化.根据转座子Tn917载体的基因序列,利用重叠延伸PCR法克隆同源重组序列到pRN5101上得到pRN15,根据pBU4载体上的四环素抗性基因序列,对pRN15进行改造,使其失去红霉素抗性,获得四环素抗性,载体命名为pRNT15.重组载体四环素抗性的获得,使之扩大了使用范围,也为工程菌株染色体中红霉素抗性基因的敲除奠定了基础.  相似文献
3.
Lats基因敲除小鼠胚胎玻璃化冷冻的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
用冷冻麦管、细胞冷冻管分别采用一步法和二步法对Lats基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻,胚胎解冻后,囊胚发育率分别为90%、90.1%、89.2%和91.4%;移植后着床率分别为:50.0%、47.1%、43.4%和46.5%,差异不显著;并且与对照组相比差异也不显著。因此,玻璃化冷冻可以作为Lats鼠保种方法之一。  相似文献
4.
大鼠HPRT基因敲除载体的构建   总被引:1,自引:0,他引:1  
根据已知大鼠HPRT基因的外显子序列,从大鼠HPRT基因BAC中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的3.0kb和1.7kb的长臂(LongArm,LA)和短臂(ShortArm,SA),并克隆到pSL1180和pKO中.3.0kb长臂片段包含5′端部分序列和exon1部分序列,1.7kb短臂位于exon6和exon7之间.依次将neor、SA、LA克隆到pBS相应酶切位点,得到pBS-HPRT,再将LA-neor-SA片段由pBS中切出,克隆到pKO的KpnI和NotI位点之间,得到大鼠HPRT基因敲除载体pKO-HPRT.  相似文献
5.
大肠杆菌 aroL 基因敲除及其对莽草酸合成的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
以E.coli DH5α基因组为模板克隆莽草酸激酶Ⅱ基因(aroL),构建质粒pMD-aroL,经HpaⅠ、BsaBⅠ酶切后插入卡那霉素抗性基因(kan)得pMD-aroL::kan,利用pKD46的λ重组系统,用该质粒上的kan及两端的aroL同源序列替换E.coli Top10F′基因组上的aroL基因,再运用质粒pCP20编码的FLP重组酶消除kan基因.Southern blot证实基因敲除是成功的,测序结果表明kan已经从基因组上消除,摇瓶发酵显示构建的基因工程菌的莽草酸产量是原始菌株的1.57倍.  相似文献
6.
雌性Akt2基因缺失小鼠生殖表型研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过对雌性Akt2 基因敲除纯合子小鼠(Akt2(-/-))及野生型小鼠(Akt2(+/+))基础指标、大体形态学指标、血清糖脂水平和性激素水平等方面的评估,探讨Akt2基因缺失对糖脂代谢和卵巢功能影响.雌性Akt2(+/+)及Akt2(-/-)小鼠各16只,行口服糖耐量(OGTT)实验(2mg/kg),阴道涂片监测动情周期,于动情间期进行动力学实验,将纯合子和野生型小鼠分别随机分为空白组和刺激组2组,刺激组予HMG(人绝经期尿促性激素)(0.5IU/g)刺激2h,空白组予等体积的生理盐水刺激2h,检测各组小鼠体重、体内脂肪重量、血脂、空腹胰岛素水平和生殖激素水平,卵巢常规病理检测各组小鼠卵巢形态学变化.结果发现,同野生型小鼠相比,纯合子小鼠动情周期显着延长(P<0.05),随机血糖、0h血糖、2h血糖、空腹胰岛素水平和HOMA指数均显著升高(P<0.05),而血清甘油三醑(TG)水平则显著降低(P<0.05);性激素检测发现纯合子小鼠血清17羟孕酮(17-OHP)、雌二醇(E2)、△17-OHP、△E2均显着升高.综上,本文认为Akt2基因不仅可以影响机体糖脂代谢,同时也影响卵巢功能,说明胰岛素调节糖代谢的关键信号分子对卵巢生殖功能同样具有重要的调节作用.  相似文献
7.
核盘菌交配型基因mat 1-1敲除载体的构建及转化   总被引:1,自引:1,他引:0       下载免费PDF全文
利用根癌农杆菌介导真菌遗传转化方法对核盘菌的交配型基因mat 1-1进行基因同源重组的敲除对比实验, 获得了缺失mat 1-1基因的转化
菌株. 先利用PCR方法获得mat 1-1基因的左右两侧片段, 将测序正确的两个侧翼片段分别重组到农杆菌转化载体PBI-G3C中, 并将新霉素抗性标记引入农杆菌转化载体PBI-G3C中, 构建成农杆菌介导转化核盘菌的打靶载体ΔPBI-G3CN-mat 1-1, 再将ΔPBI-G3CN-mat 1-1质粒转化至根癌农杆菌EHA105中. 利用核盘菌菌丝进行转化, 将得到的转化菌株, 利用PCR方法进行验证, 证实有敲除菌株存在. 通过对敲除菌株进行生理表型的测定发现, 缺失mat11基因的敲除菌株其生长速度与野生核盘菌菌株相比无明显差异, 但敲除菌
株不能产生菌核与子囊盘.  相似文献
8.
通过生物信息学分析2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33的基凶组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子(Opacityfactor of S.suis,OFS)的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs^37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs^37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定.根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs^37-683基因敲除株.PCR、测序和RT—PCR分析结果均显示ofs^37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs^37-683基因敲除株构建成功.该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础.  相似文献
9.
以产油丝状真菌深黄被孢霉M6-22(Mortierella isabellina 6-22)为出发菌株,利用亚硝基胍诱变技术筛选到一株对潮霉素药物敏感的菌株Mortierella isabellina 6-22-4,同时构建了含有潮霉素抗性基因表达单元和深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因5'与3'端部分同源序列的重组质粒PD4MI6,用于对深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基鼠的敲除.通过PEG/CaCl2介导的原生质体转化法,将质粒PD4MI6转化入深黄被孢霉M6-22-4菌株.转化子经潮毒素抗性选择平板筛选、分子检测获得了一个△6-脂肪酸脱氢酶基因缺失的突变株Mut6.气相色谱分析结果显示,该突变株γ-亚麻酸特征峰消失,相应地亚油酸产量显著增加.培养结果表明该突变株的菌落形态、颜色及生长状况与出发菌株M6-22或M6-22-4相比均有显著改变.  相似文献
10.
通过PTPα基因敲除(knockout)小鼠来研究海马突触可塑性的变化,在海马schaffer collateral—CA1通路中采用场电位记录的方法研究发现,与Wild Type相比较,基因敲除小鼠的Long Term Potentiation(LTP)增强而Long Term Depression(LTD)受到抑制,去增强效应消失。θ频率诱导的LTP增强,但是其基本的突触传递性质并没有发生变化.  相似文献
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