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1.
乳糖诱导pET载体表达重组蛋白的研究   总被引:33,自引:4,他引:29  
以重组人B淋巴细胞刺激因子(hBLyS)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3)(pET30(a)/hBLyS)作为研究对象,借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物的表达规律进行了优化研究。分析比较了诱导的起始阶段、所需的乳糖浓度和诱导持续时间等参数对重组产物表达的影响。实验结果表明,对T7lac启动子控制的重组目的产物,乳糖可以作为诱导剂;在对诱导条件进行优化控制的前提下,乳糖诱导目的产物的绝对表达量虽然不及IPTG,但相对成本却比IPTG低得多。研究结果为乳糖作为诱导剂应用于重组基因工程药物工业化生产提供了一定的参考。  相似文献
2.
转基因花卉的DNA提取与多重PCR分析   总被引:24,自引:0,他引:24  
分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊3种花卉的基因组DNA,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好。设计合成了3对引物,分别扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(nos)终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ)基因。普通PCR检测结果表明,3种花卉6个样品中仅矮牵牛的1个样品含有这3种转基因成分,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性。尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的2个或3个转基因成分,得到预期结果。  相似文献
3.
水分胁迫下植物脯氨酸累积的分子机理   总被引:23,自引:0,他引:23       下载免费PDF全文
脯氨酸作为一种重要的渗透保护物质,在植物的抗性生理中发挥着重要的作用。水分胁迫条件下,脯氨酸的累积通过3种不同的途径进行:效应细胞的从头合成;脯氨酸降解的减少以及脯氨酸转运系统的参与。Δ^1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)和脯氨酸脱氢酶(ProDH)在脯氨酸合成和降解的过程中起着关键的调节作用。总之,植物的脯氨酸合成、累积和代谢是一个受非生物胁迫和细胞内脯氨酸浓度高度调控的生理生化过程。P5CS基因启动子分析表明,ABA可能参与了该基因的表达。  相似文献
4.
高等植物启动子及其应用研究进展   总被引:20,自引:0,他引:20       下载免费PDF全文
高等植物基因的表达调控已成为分子生物学研究领域的热点和前沿,启动子是基因表达调控的重要元件.深入研究启动子的结构和功能,建立可用于植物转基因表达的时、空、量三维调控系统,可为功能基因组学研究及通过基因工程技术精确地调节植物代谢提供全新的思路.文中从高等植物启动子的类型、结构和功能入手,着重介绍了启动子研究及应用的最新进展.  相似文献
5.
多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立   总被引:18,自引:0,他引:18  
根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子(CaMV35S)和根癌农杆菌终止(Nos)的序列特点,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法,并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测,其中有5份样品结果阳性,结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分,较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很很好的应用前景。  相似文献
6.
鸡痘病毒载体强启动子的构建和筛选   总被引:10,自引:0,他引:10  
根据痘苗病毒天然启动子P7.5关键区的结构,人工合成4条寡核苷酸,形成早,晚期启动子,把合成的启动子进行不同组合,得到10个较有代表性的不同启动子组合PS1~10,用P7.5作对照构建成表达LacZ基因的表达载体pFBS1~10以及pFBS7.5。利用脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4,获取重组病毒,经纯化后,分别测重组欠代CEF后10,24,36,48,72h,表达β-半乳糖苷酶的活性,  相似文献
7.
受乳糖启动子控制的基因表达过程的优化   总被引:10,自引:1,他引:9  
借助于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法,对乳诱导的由乳糖启动子控制的大肠杆菌RNA聚合酶σ^70因子基因表达过程进行了优化研究。  相似文献
8.
大肠杆菌基因启动子探针型载体的构建   总被引:6,自引:5,他引:1  
利用PCR技术将pUC18和pBluescript中的多克隆位点区(MCS)及旁侧序列分别进行扩增,然后将扩增产物插入到已除去LacZα基因的pUC18中,获得三个中间载体pSUGV1,pSGV2和pSUGV3,最后将pSUPV2中无表达活性的新霉素磷酸转移酶Ⅰ(NPTⅠ)基因分别插入到三个中间载体的MCS中,构建成功大肠肝菌基因启动子探针型载体pSUPV4,pSUPV5和pSUPV6.  相似文献
9.
转基因tritordeum的遗传分析   总被引:6,自引:1,他引:5  
从一批使用无启动子“uidA转化策略转化的tritordeum中,分离出标定有花药组织特异性启动子的单株并考察其外源基因的遗传稳定性,为即将开展的启动子分离工作奠定基础;对转基因材料不同生长时期的不同组织进行Gus组织化学检测,分析Gus表达的特异性,应用RT-PCR从转录水平进一步确证启动子的特异性;所筛选出的植株中,Gus的表达特异性和To代的表现完全一样,只有花药原基和花粉粒,整合位点在各代之间传递的频率较低,明显不符合显性:隐性(3:1)规律,但Gus的表达特异性在各代之间传递时有着极强的稳定性;成功地分离出了被标定有花药组织特异性启动子的tritordeum,对其遗传特性作了进一步的分析.  相似文献
10.
盐藻启动子活性片段的克隆及序列分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
报道了以启动子探测质粒pECE7为载体克隆盐藻(Dunaliella salina)中具有启动子活性DNA片段的研究。经限制性内切酶EcoR I分别消化盐藻基因组DNA和质粒pECE7,并进行体外重组及转化筛选,得到一具有启动子活性的DNA片段Ped。经进一步氯霉素抗性筛选,证明此启动子具有较高的活性。测序结果显示Ped长243bp。对其序列分析表明它具有启动子初级结构的基本特征。Southern杂交显示此启动子片段确实来自于盐藻基因组,且其广泛存在于整个基因组中启动盐藻基因的表达。经推测,Ped中含有多种转录因子结合位点的同源序列,因此Ped可能参与了多基因表达的调控。  相似文献
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