郑麦366γ-醇溶蛋白基因的克隆、系统进化和乳糜泻毒性分析

采用基因组PCR法,从强筋优质小麦品种郑麦366中克隆得到12个具有独特编码区的γ-醇溶蛋白新基因(命名为ZH366R-1-ZH366R-12,GenBank注册序列号为JN849083-JN849089和JX828391-JX828395),其中,ZH366R-5、ZH366R-8、ZH366R-11和ZH366R-12有完整的开放阅读框,除ZH366R-8存在一个额外的半胱氨酸(C)外,其他3个基因均具有γ-醇溶蛋白的典型分子特征,含有8个保守的半胱氨酸残基.克隆基因与42个来源于强筋优质小麦品种或代表普通小麦起源的二倍体祖先供体种的γ-醇溶蛋白的聚类分析和已知免疫多肽的分布分析表明,γ-醇溶蛋白在整个推断氨基酸序列和主要免疫肽的分布上均存在一定的基因组特异性.在重复区II含有1个额外半胱氨酸残基的γ-醇溶蛋白通常是由Gli-B1位点编码的,且在优质强筋小麦品种中均有分布,推测Gli-B1位点编码的γ-醇溶蛋白可能对面筋品质有独特贡献,而由Gli-D1位点编码的γ-醇溶蛋白,通常在重复区II分布有较多种类和数量的免疫多肽,乳糜泻(CD)毒性最强.     

中华补血草金属硫蛋白基因的克隆及高盐处理下的表达模式分析

以中华补血草叶片为材料,提取其总RNA并反转录cDNA,并以cDNA为模板,克隆得到包含该基因完整开放阅读框的cDNA序列,序列分析表明,该基因开放阅读框长249 bp,编码82个氨基酸;该蛋白含有14个半胱氨酸,主要分布在蛋白质的N端和C端,呈CC,CX,CXXC形式排列.预测该蛋白分子质量为8 133.1 D;等电...     

睾丸特异表达蛋白质RNF138的表达纯化及抗体制备

目的:制备RNF138的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA文库中扩增mRNF138的开放阅读框,并克隆至原核表达载体pET-30a中;将测序正确的pET-30a(+)/mRNF138重组质粒转化大肠杆菌Rosseta菌株,经IPTG诱导表达后通过镍离子螯合柱(Ni-NTA)...     

ω-3转基因克隆绵羊诞生

我们构建了含有bfat-1表达载体pIE-bF1,通过脂质体介导转染获得转基因细胞系,再以核移植技术获得转基因克隆胚胎。胚胎移植后,于2010年10月27日出生两只克隆羊。经检测均为转ω-3基因克隆绵羊。     

巨大芽孢杆菌AP25内切葡聚糖酶基因的克隆及序列测定

从土壤中分离到一株产纤维素酶的巨大芽孢杆菌AP25，经羧甲基纤维素平板检测，该菌可产生葡聚糖内切酶。根据GenBank登录的β-1，4内切葡聚糖酶基因（DQ782954．1，M28332．1，AY859492．1）的同源性序列，利用PCR方法克隆到该酶的基因，并对其进行测序。测序结果显示其全长为1500bp，推测其含499个氨基酸。与GenBank中的已知葡聚糖内切酶相比较，发现该酶的氨基酸序列与Bacillus subtilis的β-1，4内切葡聚糖酶基因同源性达到达94％。     

茶树早期光诱导蛋白1基因的克隆和表达分析

报道了茶树早期光诱导蛋白1基因(CsELIP1)的cDNA和DNA序列的克隆.该基因编码蛋白含190个氨基酸残基,其基因组序列含有两个内含子(长度分别为129和855 bp).表达分析显示,CsELIP1的mR-NA水平在常温加较强光照(200μmol.m-2.s-1)和低温(5℃)弱光时上调都较少,但在5℃加200μmol.m-2.s-1时被强烈上调,表明CsELIP1的表达可能有一种在其他植物ELIP基因表达中存在的PSⅡ光合效率介导的调节方式.也暗示CsELIP1基因的生理作用可能涉及到茶叶细胞的光保护作用.     

拟南芥活性氧响应基因GDI功能初步分析

从拟南芥(Arabidopsis thaliana)T-DNA插入突变体库中筛选分离到活性氧敏感突变体gdi并克隆出相应基因GDI,生物信息学分析发现该基因具有多个ABA及氧化胁迫相关顺式作用元件,定量PCR及GUS染色结果表明该基因主要在花器官中表达,激光共聚焦实验显示GDI蛋白在细胞质中广泛分布.     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

Production of human lysozyme-transgenic cloned porcine embryos by somatic nuclear transfer

Due to their physiology and organ size, pigs have significant potential as human disease models and as organ transplantation donors. Genetic modification of pigs could provide benefits for both agriculture and human medicine. In this study, five fetal pig fibroblast cell lines from two species (Wuzhishan and Landrace pigs) were transfected using double-marked human lysozyme (HLY) plasmids (pBC1-HLY-GFP-NEO) by a liposome-mediated method. The ratio of green fluorescent protein (GFP)-expressing cells was >95% in sw7, sw8, slw3 and slw6 cell lines, but only 49.3% in slw9 cells. Cells from the four highly transgenic lines were used as nuclear donors to construct embryos, which were then cultured after fusion and activation by electric stimulation. The rate of cleavage was 76.7%, 48 h after activation. After 7 days, 18.5% of cleaved eggs had developed to the blastocyst stage and 93.3% of blastocysts were GFP-positive. These results indicate that transgenic fetal pig fibroblast cell lines could be obtained by a liposome-mediated method, though the transfection efficiency varied between cell lines. Reconstructed embryos derived from transgenic cells could successfully develop into blastocysts, most of which were GFP-positive.     

氨肽酶N基因启动子的克隆及在造血细胞和不同肿瘤细胞中的活性分析

从人外周血淋巴细胞中克隆了氨肽酶N基因（APN）的上游启动子并进行了序列分析。构建了含APN上游启动子和荧光酶报告基因的重组质粒pXP1-APNLuc，对骨髓母细胞和几种肿瘤细胞进行转染。分析结果表明APN止游启动子具有骨髓特异性，其在骨髓母细胞KG1a中活性最高，而在Jurkat细胞中活性很低。APN启动子在肺腺癌细胞中活性较高，在肝癌细胞中基本无活性，在舌癌细胞和食管癌细胞中活性明显降低。APN基因启动子的这一特点为在肿瘤患者实施化、放疗的同时，特异性地保护造血系统提供了新的思路。