高效液相色谱法检测牦牛乳和牦牛酸奶中的核苷酸

利用高效液相色谱法测定牦牛和水牛乳、家庭自制牦牛酸奶中核苷酸的含量．采用Agilent1100型高效液相色谱仪,紫外检测器波长为260nm,色谱柱为迪马铂金C18,柱温30℃,进样量5pl,流速为0．5ml·min^-1,流动相：pH5．6、0．1mol／L磷酸二氢钾缓冲液．结果显示,该方法能对乳中核苷酸进行有效的分离,方法稳定,重复性好．本实验在牦牛酸奶中检测到微量的胞嘧啶核苷酸（CMP）和次黄嘌呤核苷酸（IMP）,但在牦牛乳中未检测到．这两种核苷酸在德昌水牛乳中的含量也很低．     

乐至黑山羊GH和IGF-I基因多态性及其与产羔性状的关联性分析(英文)

生长激素(GH)胰岛素样生长因子I(IGF-I)在卵泡的生长和闭锁中发挥关键作用。研究采用PCR-SSCP技术对157只乐至黑山羊GH和IGF-I进行多态位点的检测。结果发现,GH基因5’侧翼区和第二外显子分别检测到2种基因型,第三外显子检测到4种基因型,第四和第五外显子分别检测到3种基因型;IGF-I基因的第二外显子检测到2种基因型。通过基因测序发现GH基因有14处单核苷酸突变位点(SNPs)—T48C,A55G)(P1引物),T781C(P2引物),G1122A,A1161G,A1171G,C1179T和C1180G(P3引物),T1481C,A1494G,G1549T和C1590T(P4引物),G1942A和G1957A(P5引物);IGF-I基因有1个SNP(G3270C)(P6引物)。关联性分析结果表明,只有GH基因第三外显子BB型乐至黑山羊产羔数比AA型多0.32(p0.05),其余基因型间产羔数差异不显著。研究初步表明GH基因可能与乐至黑山羊产羔数之间存在一定关联性。     

牦牛催乳素受体基因部分片段的克隆与序列分析

扩增出牦牛催乳素受体（尸碰尺）基因部分保守序列，为研究牦牛乳腺组织中朋三尺基因表达水平奠定基础．提取牦牛乳腺组织总RNA，根据NCB1的奶牛Jp月￡只基因cDNA序列的保守区设计特异性引物，采用RT-PCR技术扩增牦牛尸胜尺基N，结果获得577bp的片段，将该片段连接于pMD18-Simple质粒中，转化大肠杆菌，菌液PCR鉴定阳性克隆子，测序并分析氨基酸序列．分析序列与氨基酸与其他物种同源性，结果表明该序列与水牛、奶牛、绵羊、人、小鼠的尸RLR基因mRNA的对应序列的同源性分别为97．40％、99．13％、93．41％、71．07％、60．20％，编码的氨基酸同源性分别为97．40％、100％、95．83％、82-38％、72-22％．     

体外受精条件对牦牛与黄牛异种受精的影响

本实验通过改变体外受精精子浓度(0.5 × 106、2 × 106、8 × 106 个/mL), 精卵共培养时间(12 h、18 h、24 h), 体外受精96 h后是否更换培养液(IVC)以及氧气的含量(5% CO2 和5% CO2、5% O2、90% N2)等培养条件, 观察牦牛精子对黄牛卵母细胞受精后卵裂和早期胚胎发育状况. 结果显示精子浓度为2 × 106个/mL、精卵共培养24～26 h、培养96h后要更换培养液, 在5% CO2、5% O2、90% N2的条件下培养, 受精和早期胚胎的发育.     

牦牛INHBA基因的克隆及序列分析

根据GenBank检索到的普通牛的INHBA基因序列设计一对特异性引物,以牦牛卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术对牦牛INHBA cDNA进行克隆测序和序列分析.结果表明:扩增片段1360bp,包含1277bp的编码区,编码426个氨基酸.与普通牛相比,牦牛INHBA基因编码区存在2处碱基转化.牦牛与普通牛、绵羊、人、鼠和猪的核苷酸序列同源性分别为99.84%、97.97%、91.41%、87.79%、91.94%,氨基酸序列同源性分别为99.53%、98.82%、95.77%、93.88%、93.88%.蛋白质结构分析显示,INHBA蛋白不易形成α螺旋和跨膜结构,是相对保守的疏水性蛋白.