带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化

为构建pGEX-TAT-GFP原核表达质粒并优化GST-TAT-GFP表达条件,将PCR扩增的基因TAT-GFP克隆至质粒pGEX-2T,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并优化表达条件,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及荧光学特性鉴定.结果表明:构建的质粒经PCR、酶切和DNA测序正确,含有重组质粒的宿主菌经过IPTG诱导表达分子量约为54.3 kD的融合蛋白GST-TAT-GFP,并经优化确定最佳的诱导表达条件.     

TAT-SOD融合蛋白的跨膜转导性质的研究

探讨了融合蛋白TAT-SOD的跨膜转导特性.实验结果表明:非变性的TAT-SOD也可以不受细胞种类限制,突破质膜屏障,显著提高L02、A375、Hela细胞的胞内SOD的活力;TAT-SOD的这种跨膜转导有明显的浓度、时间依赖关系,随着浓度和时间的增加而增加;在TAT跨膜转导SOD过程中,TAT-SOD首先黏附到细胞膜上,黏附量随TAT-SOD浓度的提高而明显增加,随作用时间的延长虽然也有增加,但是在30 min内迅速达到一个较高的水平,其后增加的趋势极为缓慢.细胞紫外线辐射防护试验表明,320 U/mL的TAT-SOD对细胞的保护率约为野生型SOD的5倍.试验结果说明,TAT-SOD具有明显的跨膜转导能力,可提高SOD的生物利用率.     

不同来源SOD蛋白的稳定性比较

纯化制备了来源于猪血的天然SOD,由大肠杆菌体系表达的PTD-SOD1以及由酵母体系表达的重组SOD和PTD-SOD2三种基因重组SOD蛋白,并从pH稳定性、温度稳定性、水浴时间稳定性和外源试剂耐受性几个方面对它们进行了比较.结果表明,重组SOD的稳定性总体上是最强的,PTD-SOD2次之,PTD-SOD1最弱,而天然SOD仅比PTD-SOD1稍强.     

嗜硫性色谱分离鸭蛋抗体

采用嗜硫性色谱从鸭蛋蛋黄中提取抗体 .将澄清的蛋黄水溶性部分脱脂后 ,利用嗜硫色谱 (T -gel)分离鸭蛋蛋黄中的抗体 (IgY) ,得到的两种鸭蛋抗体 ,经SDS -PAGE检测 ,分子量分别为 2 0 0kD和 12 0kD .整个分离过程的IgY回收率极高 .     

融合蛋白PTD-SOD对顺铂导致的肝脏损伤的保护效应

建立了顺铂损伤的小鼠模型,通过测定小鼠的体重增长率、肝脏指数以及SOD活力等肝组织抗氧化指标,探讨在注射顺铂前后给予融合蛋白PTD-SOD对顺铂导致的肝脏损伤的保护效应.在注射顺铂后马上注射融合蛋白PTD-SOD的对顺铂导致的肝脏损伤保护效果最好.