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1.
本文介绍了一种构建辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus , ChiVMV)侵染性克隆的简易方法. 基于辣椒脉斑驳病毒的全长确定序列, 根据基因内部的单一限制性酶切位点, 设计引物, 将ChiVMV分成KL1,KL2, KL3三个片段通过RT PCR和TA克隆的方法将3个片段构建到PMD19 T载体上. 通过双酶切将ChiVMV前面7000bp的片段构建到载体上, 从而将全部的ChiVMV cDNA分段构建到两个重组质粒中, 成功地避免了全长病毒序列在大肠杆菌中不稳定的现象. 进行体外转录时, 先通过PCR扩增出两个彼此有一定重叠的平末端片段, 再利用两个重叠片段为模板用重叠PCR的方法扩增出全长带T7启动子的ChiVMV cDNA, 并通过T7 RNA聚合酶成功转录出ChiVMV的病毒RNA.  相似文献   
2.
从感染芜菁皱缩病毒(TCV)的拟南芥中提取总RNA,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到TCV的外壳蛋白基因P38.在目的基因ORF框两边引入酶切位点BamHⅠ和SacⅠ,并连接到表达载体pET30-a上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,37℃经0.5mM/L IPTG诱导6h后获得了分子量约为48kD的融合蛋白.经Ni-NTA纯化目的蛋白,注射大白兔制备抗血清.Western blot结果表明制备好的抗血清能成功检测感染TCV的拟南芥.  相似文献   
3.
研究了50 μmol/L除草剂norflurazon (NF) 对自然干旱胁迫下拟南芥野生型植株和叶绿体信号突变体gun1和gun5的生理参数和一些抗性基因转录水平的影响.干旱胁迫与除草剂协同处理10 d时,叶片出现白化和萎蔫;叶片含水量明显下降;丙二醛含量大幅度升高;活性氧积累明显加重;Lhcb基因表达下调;POD,APX,GPX和Rd29a基因的转录水平显著上调.突变体gun1和gun5叶片白化比野生型严重;突变体生理指标的变化幅度比野生型大;突变体基因表达的变化幅度很小(甚至没有变化),远小于野生型.这些结果表明,叶绿体信号的关键分子GUN1和GUN5蛋白可能参与了干旱信号传导和适应机制,尤其是GUN1蛋白的作用更为明显,暗示叶绿体信号转导途径可能与植物抗逆过程有交叉.  相似文献   
4.
芜菁花叶病毒四川分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
从四川省3个蔬菜基地感病的甘蓝、花菜、萝卜、叶芥菜分离到芜菁花叶病毒6个分离物.利用 RT-PCR克隆了这6个分离物的外壳蛋白基因(CP), 测定了它们的核苷酸序列并进行了序列分析. 结果表明,6个分离物的 CP基因均为864个碱基,核苷酸序列同源性较高, 达 97.0%~100%;它们与 world-B组分离物的同源性最高,达 92.1%~100%;与 basal-B组分离物的同源性最低,仅 87.6%~90.2%. 基于 TuMV的 CP基因核苷酸序列的分子进化树显示,TuMV分离物可分为4组,本研究所分离到的6个 TuMV四川分离物属于第四组,即 world-B组.  相似文献   
5.
水杨酸对干旱胁迫下豇豆幼苗抗氧化酶活性的影响   总被引:5,自引:1,他引:4       下载免费PDF全文
研究了外源水杨酸(Salicylic acid,SA)对干旱胁迫下豇豆(Vigna sinensis L.) 幼苗叶片抗氧化酶类活性的影响.在干旱胁迫下,经SA和H2O预处理的豇豆幼苗,随胁迫时间的延长,叶片中各种抗氧化酶活性和相对含水量都逐渐下降,但经SA预处理的叶片含水量高于同期水处理叶片含水量,过氧化物酶(POD)、超氧化歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性都明显高于同期对照的叶片酶活性.对三种抗氧化酶非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱分析可知,在SA预处理和干旱胁迫下,除了CAT没有同工酶条带数目的变化外,SOD和POD都出现了谱带数目的改变.以上结果表明,SA使豇豆幼苗抗氧化酶活性有较大提高,增强了植株对干旱胁迫的抵抗能力.  相似文献   
6.
作者研究了水杨酸(SA)处理对菜豆幼苗不同器官抗氰交替途径容量(Valt)、实际运行活性(ρValt)与AOX表达量的影响。结果表明:SA未处理的菜豆幼苗不同器官中均存在抗氰呼吸,其中真叶的Valt和ρValt最高,其次是子叶,而下胚轴的最低;SA处理24h以后,均可使菜豆幼苗3种器官Valt与ρValt显著提高,但不改变三者抗氰呼吸活性的大小顺序。显然,SA对菜豆抗氰呼吸只起到诱导作用,并不改变它们不同器官间的呼吸特异性。Western杂交分析结果显示:菜豆不同器官Vah与ρValt的差异与AOX蛋白水平的变化相关,真叶中AOX的表达量最多,下胚轴的AOX表达量最少;SA处理时,诱导菜豆幼苗不同器官抗氰呼吸增高的程度与AOX合成表达量的增加一致,二者紧密相关。  相似文献   
7.
通过对专性CAM植物瓦松(Orostachysfimbriatus)和兼性CAM植物长药景天(Se-dumspectabile)的NAD-苹果酸酶进行比较研究,在反应系统含5mmol/LMnCl_2,50μmol/LCoA,5mmol/L DTT,pH值为7h,其苹果酸饱和曲线均为双曲线,且瓦松的NAD-苹果酸酶对苹果酸极为敏感。光对该酶活性无明显影响。该酶对温度较敏感,其最适温度为55℃。晴天的酶活明显比阴天高;即使在阴天,瓦松的酶活也较高。在同一温度条件下,瓦松的酶活高于长药景天。  相似文献   
8.
对专一性CAD植物瓦松的CAM活性与NAD-ME的关系进行了初步研究,结果表明,瓦松的MAD-ME有明显的昼夜调节特性,其活性昼高夜低;同时,该活性还存在季节性变化,在7月酶活性可达最高峰。其酶的最适PH为7,最适温度为55℃。  相似文献   
9.
小麦幼苗经渐进水分胁迫处理后,叶绿体的电子传递活性将随处理时间逐渐的增长而降低.24h轻度胁迫下,光合全电子链、PSⅡ和PSⅠ电子传递活性有轻微下降,而48h中度和72h重度胁迫,将使它们明显降低.这表明,叶绿体电子传递活性对水分胁迫的响应与胁迫程度有关.PSⅡ的DCIP光还原活性与PSⅡ电子传递活性有相同的变化模式.类囊体膜和PSⅡ膜蛋白组分稳态水平的电泳分析表明,在中度和重度水分胁迫下,叶绿体光化学活性的降低与光合功能蛋白组分含量的减少有关.还讨论了植物光合电子传递功能对水分胁迫的敏感性  相似文献   
10.
在CMV启动子控制下构建含有B区缺失型FⅧ基因(BDDFⅧ)和Bcl xL基因编码序列的真核表达载体pF8B和只含B区缺失的FⅧ基因(BDDFⅧ)的真核表达载体pF8,通过双酶切和测序验证重组真核表达载体构建的正确性;经过MTX压力筛选得到稳定表达BDDFⅧ活性的CHO F8B和CHO F8细胞株.在相同可控培养参数下进行发酵培养,Bcl xL基因过表达赋予CHO F8B细胞较强的抗调亡能力和更高的BDDFⅧ表达活性,BDDFⅧ的表达活性后者是前者的5倍多.  相似文献   
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