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1.
本文介绍了一种构建辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus , ChiVMV)侵染性克隆的简易方法. 基于辣椒脉斑驳病毒的全长确定序列, 根据基因内部的单一限制性酶切位点, 设计引物, 将ChiVMV分成KL1,KL2, KL3三个片段通过RT PCR和TA克隆的方法将3个片段构建到PMD19 T载体上. 通过双酶切将ChiVMV前面7000bp的片段构建到载体上, 从而将全部的ChiVMV cDNA分段构建到两个重组质粒中, 成功地避免了全长病毒序列在大肠杆菌中不稳定的现象. 进行体外转录时, 先通过PCR扩增出两个彼此有一定重叠的平末端片段, 再利用两个重叠片段为模板用重叠PCR的方法扩增出全长带T7启动子的ChiVMV cDNA, 并通过T7 RNA聚合酶成功转录出ChiVMV的病毒RNA. 相似文献
2.
从感染芜菁皱缩病毒(TCV)的拟南芥中提取总RNA,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到TCV的外壳蛋白基因P38.在目的基因ORF框两边引入酶切位点BamHⅠ和SacⅠ,并连接到表达载体pET30-a上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,37℃经0.5mM/L IPTG诱导6h后获得了分子量约为48kD的融合蛋白.经Ni-NTA纯化目的蛋白,注射大白兔制备抗血清.Western blot结果表明制备好的抗血清能成功检测感染TCV的拟南芥. 相似文献
3.
研究了50 μmol/L除草剂norflurazon (NF) 对自然干旱胁迫下拟南芥野生型植株和叶绿体信号突变体gun1和gun5的生理参数和一些抗性基因转录水平的影响.干旱胁迫与除草剂协同处理10 d时,叶片出现白化和萎蔫;叶片含水量明显下降;丙二醛含量大幅度升高;活性氧积累明显加重;Lhcb基因表达下调;POD,APX,GPX和Rd29a基因的转录水平显著上调.突变体gun1和gun5叶片白化比野生型严重;突变体生理指标的变化幅度比野生型大;突变体基因表达的变化幅度很小(甚至没有变化),远小于野生型.这些结果表明,叶绿体信号的关键分子GUN1和GUN5蛋白可能参与了干旱信号传导和适应机制,尤其是GUN1蛋白的作用更为明显,暗示叶绿体信号转导途径可能与植物抗逆过程有交叉. 相似文献
4.
芜菁花叶病毒四川分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从四川省3个蔬菜基地感病的甘蓝、花菜、萝卜、叶芥菜分离到芜菁花叶病毒6个分离物.利用 RT-PCR克隆了这6个分离物的外壳蛋白基因(CP), 测定了它们的核苷酸序列并进行了序列分析. 结果表明,6个分离物的 CP基因均为864个碱基,核苷酸序列同源性较高, 达 97.0%~100%;它们与 world-B组分离物的同源性最高,达 92.1%~100%;与 basal-B组分离物的同源性最低,仅 87.6%~90.2%. 基于 TuMV的 CP基因核苷酸序列的分子进化树显示,TuMV分离物可分为4组,本研究所分离到的6个 TuMV四川分离物属于第四组,即 world-B组. 相似文献
5.
研究了外源水杨酸(Salicylic acid,SA)对干旱胁迫下豇豆(Vigna sinensis L.) 幼苗叶片抗氧化酶类活性的影响.在干旱胁迫下,经SA和H2O预处理的豇豆幼苗,随胁迫时间的延长,叶片中各种抗氧化酶活性和相对含水量都逐渐下降,但经SA预处理的叶片含水量高于同期水处理叶片含水量,过氧化物酶(POD)、超氧化歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性都明显高于同期对照的叶片酶活性.对三种抗氧化酶非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱分析可知,在SA预处理和干旱胁迫下,除了CAT没有同工酶条带数目的变化外,SOD和POD都出现了谱带数目的改变.以上结果表明,SA使豇豆幼苗抗氧化酶活性有较大提高,增强了植株对干旱胁迫的抵抗能力. 相似文献
6.
水杨酸对菜豆不同器官抗氰呼吸诱导与交替氧化酶表达的比较研究 总被引:4,自引:0,他引:4
作者研究了水杨酸(SA)处理对菜豆幼苗不同器官抗氰交替途径容量(Valt)、实际运行活性(ρValt)与AOX表达量的影响。结果表明:SA未处理的菜豆幼苗不同器官中均存在抗氰呼吸,其中真叶的Valt和ρValt最高,其次是子叶,而下胚轴的最低;SA处理24h以后,均可使菜豆幼苗3种器官Valt与ρValt显著提高,但不改变三者抗氰呼吸活性的大小顺序。显然,SA对菜豆抗氰呼吸只起到诱导作用,并不改变它们不同器官间的呼吸特异性。Western杂交分析结果显示:菜豆不同器官Vah与ρValt的差异与AOX蛋白水平的变化相关,真叶中AOX的表达量最多,下胚轴的AOX表达量最少;SA处理时,诱导菜豆幼苗不同器官抗氰呼吸增高的程度与AOX合成表达量的增加一致,二者紧密相关。 相似文献
7.
通过对专性CAM植物瓦松(Orostachysfimbriatus)和兼性CAM植物长药景天(Se-dumspectabile)的NAD-苹果酸酶进行比较研究,在反应系统含5mmol/LMnCl_2,50μmol/LCoA,5mmol/L DTT,pH值为7h,其苹果酸饱和曲线均为双曲线,且瓦松的NAD-苹果酸酶对苹果酸极为敏感。光对该酶活性无明显影响。该酶对温度较敏感,其最适温度为55℃。晴天的酶活明显比阴天高;即使在阴天,瓦松的酶活也较高。在同一温度条件下,瓦松的酶活高于长药景天。 相似文献
8.
对专一性CAD植物瓦松的CAM活性与NAD-ME的关系进行了初步研究,结果表明,瓦松的MAD-ME有明显的昼夜调节特性,其活性昼高夜低;同时,该活性还存在季节性变化,在7月酶活性可达最高峰。其酶的最适PH为7,最适温度为55℃。 相似文献
9.
渐进水分胁迫对小麦叶绿体光化学活性及类囊体膜蛋白组分水平的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
小麦幼苗经渐进水分胁迫处理后,叶绿体的电子传递活性将随处理时间逐渐的增长而降低.24h轻度胁迫下,光合全电子链、PSⅡ和PSⅠ电子传递活性有轻微下降,而48h中度和72h重度胁迫,将使它们明显降低.这表明,叶绿体电子传递活性对水分胁迫的响应与胁迫程度有关.PSⅡ的DCIP光还原活性与PSⅡ电子传递活性有相同的变化模式.类囊体膜和PSⅡ膜蛋白组分稳态水平的电泳分析表明,在中度和重度水分胁迫下,叶绿体光化学活性的降低与光合功能蛋白组分含量的减少有关.还讨论了植物光合电子传递功能对水分胁迫的敏感性 相似文献
10.
在CMV启动子控制下构建含有B区缺失型FⅧ基因(BDDFⅧ)和Bcl xL基因编码序列的真核表达载体pF8B和只含B区缺失的FⅧ基因(BDDFⅧ)的真核表达载体pF8,通过双酶切和测序验证重组真核表达载体构建的正确性;经过MTX压力筛选得到稳定表达BDDFⅧ活性的CHO F8B和CHO F8细胞株.在相同可控培养参数下进行发酵培养,Bcl xL基因过表达赋予CHO F8B细胞较强的抗调亡能力和更高的BDDFⅧ表达活性,BDDFⅧ的表达活性后者是前者的5倍多. 相似文献