微生物谷氨酰胺转胺酶对大豆分离蛋白凝胶性的影响

利用Streptoverticillium sp.CJ3033菌株发酵得到发酵液,经过滤、离心、冷冻浓缩、乙醇沉淀和冷冻干燥后,制得的谷氨酰胺转胺酶粗酶作用于大豆分离蛋白,利用物性分析仪研究了MTG对大豆分离蛋白形成凝胶的特性及持水性的作用.通过二次回归正交组合设计的方法研究了MTG的添加浓度、作用时间、处理温度对SPI凝胶形成及保水性的影响,结果显示:MTGase对大豆分离蛋白有显著改善作用,在51℃、反应1.5 h、酶浓度9.82 U/g时,SPI的凝胶强度最大,达74.95 g/mm2;在49℃、反应1.3 h、酶浓度7.78 U/g时,SPI的持水率为96.47%.     

亮氨酸拉链结构蛋白在大肠杆菌重组子中的表达

酵母转录因子GCN4是通过亮氨酸拉链(bZIP)结构结合DNA的蛋白质之一，当GCN4二聚体与DNA结合时，亮氨酸拉链区的2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构，而其基区由无规线团结构变为α螺旋．为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理，设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需氨基酸的折叠片段，并将其克隆到Escherichia coli BL21，讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件．在蛋白质的小量表达试验中，重组子Escherichia coli BL21于5mL含有50μg／mL氨节青霉素和34μg／mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期，加入不同浓度的IPTG，继续培养以诱导蛋白质的表达，在不同的时间(如：诱导前，诱导2，4，6，8h)取样100μL到1．5mL离心管中、离心收集沉淀，将沉淀悬浮于样品缓冲液中，用10％SDS-PAGE检测；在10L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中进行了大量表达，根据小量表达的试验结果确定了IPTG的浓度和诱导时间．结果表明：含有这种拉链蛋白质的重组子Escherichia coli BL21在37℃下小量培养时，0．1-0．8mmol的IPTG均可在2-10h内诱导该蛋白质表达；而大量培养时，0．2mmol和0．4mmol的IPTG在37℃均不可能诱导表达，只在28℃时才表达；小量培养和大量培养的最佳诱导时间为4-6h，诱导剂IPTG的浓度为0．2mmol，大量表达的温度为28℃而不是37℃．     

朊病毒和朊病毒疾病治疗的研究进展

介绍了朊病毒的基本特征、化学结构以及可能具有的生理功能：参与神经系统功能的维持；通过抗氧化途径而保护神经系统细胞免受氧化损伤；参与淋巴细胞的信号转导；参与核酸代谢，给出了朊病毒治疗的几种方法，并分析了这些方法的利弊，提出了朊病毒研究拟待解决的9个问题。     

酸性茚三酮法测人绒毛膜促性腺激素的效价

ＨＣＧ中随ＮＡＮ含量的降低，ＨＣＧ的生物活性迅速下降，以此为基础研究了ＮＡＮ酸性茚三酮法测定ＨＣＧ效价的可行性。结果表明：该法测定的ＨＣＧ效价与免疫效价相比，更接近于生物效价。     

亮氨酸拉链结构蛋白基因表达载体选择

以ZG1( )、ZG1(-)、ZG2( )、ZG2(-)、ZG3( )、ZG3(-)寡聚核苷酸片段为材料，合成了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA必需的35个氨基酸的折叠片段，将此片段分别克隆到pET3b质粒和pBLZ质粒中．酶切后用2％琼脂糖电泳检测证明两者克隆成功．将这2种重组质粒分别转化到E.coli DH5a中．发现pET3b重组体在E．coli DH5a中表达成功．而pBLZ质粒重组体在E．coli DH5a中不能成功表达；从转化子中分离得到重组质粒pET3b,酶切和序到分析都证明插入序列为合成的亮氨酸拉链蛋白基因．     

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的分离纯化

利用产谷氨酰胺转胺酶的H-197菌株发酵产生MTG,发酵液通过高速离心、冷冻浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥,制得粗酶粉,粗酶粉溶解后经过SephadexG-75柱得到较纯酶样,结果表明:经冷冻浓缩、乙醇沉淀后其活力回收率为44.6%,酶的比活为0.83 U/mg.较浓缩前增加了2.43倍;粗酶经Sephadex G-75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,酶的比活力为1.44 U/mg,最终纯化倍数达7.08.     

硝酸镧对冬小麦种子萌发活力的影响

利用不同浓度的硝酸镧Ｌａ（ＮＯ３）３水溶液处理冬小麦种子结果表明；１０μｍｏｌ．Ｌ＾－１和０．１μｍｏｌ．Ｌ＾－１的Ｌａ＾３＋对种子萌发有轻微的刺激作用，并促进根，芽的生长，高浓度的Ｌａ＾３＋则完全抑制了种子的发萌发；     

一种快速提取质粒DNA鉴别重组克隆的方法

依据快检缓冲液筛选重组子克隆的方法,结合碱裂解法提取质粒DNA的原理,经过试验摸索,应用了快检缓冲液直接裂解菌液,电泳后筛选重组质粒的方法,避免了提取质粒鉴定等繁琐步骤,其结果与菌液PCR、质粒酶切鉴定结果一致,可快速筛选出重组克隆.     

重组谷氨酰胺转胺酶基因的原核表达研究

采用基因重组手段构建了含重组谷氨酰胺转胺酶基因的菌株E.coli BL21/pET30α-MTG(DE3).研究了诱导剂浓度、诱导时间、温度和转数等对重组体表达的影响,确定了融合蛋白pET30α-MTG的最佳表达条件. 结果表明:当摇菌转速250 r/min,IPTG终浓度1.0 mmol/L,温度37 ℃时,诱导培养4 h可得最大表达量.