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温度、酸碱度和变性剂对黄花石蒜凝集素活性和构象的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
采用荧光光谱研究了不同温度、pH和变性剂对黄花石蒜凝集素(Lycoris aurea agglutinin,简称LAA)凝血活性和分子构象的变化关系,结果表明:LAA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,经过3种变性剂的处理都能使LAA分子构象发生不同程度的变化并导致活性的丧失,浓度为6 mol/L的盐酸胍和脲,20 mmol/L的SDS可以使LAA完全丧失凝血活性,荧光光谱的变化表明了这种变性过程具有阶段性. 相似文献
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苦参凝集素的色氨酸残基修饰与荧光光谱研究 总被引:9,自引:4,他引:5
苦参凝集素(SFL)经等电聚焦测得其等电点为5.56,用比色法测得每分子SFL含有3个色氨酸残基,经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰表明其中2个Trp残基位于分子表面,当这2个Trp残基补修饰后,SFL的凝血活性完全丧失,糖保护试验表明,SFL专一性抑制糖Man能够保护SFL,阻断NBS对SFL的修饰作用,说明色氨酸不仅是SFL凝血活性所必需的,而且还参与其糖结合部位的组成,SFL随着NBS的逐渐修饰,其内源荧光光谱亦相应发生变化,结果表明分子表面的2个Trp残基可能位于分子的疏水袋中,而另一个Trp残基则埋藏于分子内部,荧光淬灭研究表明,丙烯酰胺能淬灭87%色氨酸残基的荧光。 相似文献
3.
用KI、CsCl和丙烯酰胺对黑豆(Glycine max var.)凝集素Ⅰ(GMLⅠ)进行内源荧光淬灭研究.天然黑豆凝集素Ⅰ在280 nm波长激发下显示λmax为339 nm的内源荧光发射光谱,表明凝集素荧光生色基团位于相对疏水的环境中;3种淬灭剂对GMLⅠ的荧光淬灭属于动态淬灭机制.GMLⅠ分子的生色基团Trp残基对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度为100%,而对阴离子淬灭剂KI的可接近程度为81.6%,对阳离子淬灭剂CsCl的可接近程度为52.8%,表明GMLⅠ中大部分Trp残基位于分子表面或近表面,只有小部分包埋于分子内部的疏水性环境中,并且Trp残基周围所处微环境带正电荷的比例比带负电荷的比例高. 相似文献
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水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建 总被引:2,自引:0,他引:2
根据分布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列,以水稻品种“桂朝2号”黄化苗组DNA为模板,用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58,经过Pr58启动子进行的鉴定和分析表明,具备大多数高等植物启动子的保守元件,预计它的RSSG58基因在特异表达方面具有一定的作用。为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件,将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析,由PCR从Pr58中得以3个不同大小两端带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ,Pr58Ⅱ和Pr58Ⅲ,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报造基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ,pRGFPⅡ和pRGFPⅢ,用于农杆菌介导法水稻遗传转化。其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础。 相似文献
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将小麦麦胚和麸皮的浸取液,经加热和利用pH沉淀,获得疏基蛋白酶抑制剂粗品;再经DEAE-Sepharose,Sephadex G-100分子筛层析,在SDS-PAGE和HPLC柱上得到均为单一蛋白带的小麦CPI纯品。其纯化度为原料浸液的42倍。由SDS-PAGE测得CPI分子为单一肽链 相似文献
6.
用45Ca跨膜流动技术测定黄精凝集素Ⅱ对大鼠主动脉Ca2+跨膜内流的影响.黄精凝集素Ⅱ在0.1~10μmolL-1时,不影响静息状态下Ca2+的内流,但能抑制NE和KCl引起的Ca2+内流,其抑制能力依赖于凝集素的浓度;在10μmolL-1时,可完全阻滞NE引起的Ca2+增加,并能有效地阻滞KCl引起的内流作用.表明黄精凝集素Ⅱ能阻滞细胞外的Ca2+通过受体操纵钙通道(ROC)和电压依赖钙通道(PDC)的内流 相似文献
7.
野花生豆凝集素在pH7.0和pH5.0缓冲体系中,用EDTA去除其金属离子,CML凝血活性下降.Ca^2 、Mg^2 、Mn^2 、Zn^2 可使去除金属离子CML活性基本恢复到天然水平,表明这些二价金属离子为CML活性所必需.研究不同温度和不同浓度盐酸胍条件下CML的圆二色谱、荧光光谱及其凝血活性的变化,结果表明CML含有较多β-折叠,具有较强的抗变性能力;脲变性的时间扫描荧光光谱证实了CML变性过程的阶段性。 相似文献
8.
鲍锦库 《四川大学学报(自然科学版)》2009,46(5)
经缓冲液抽提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose离子交换及Sephacryl S-200分子筛层析,从白芸豆种子纯化得到白芸豆凝集素(Phaseolus coccineus lectin,PCL)。SDS-PAGE和Sephacryl S-200凝胶过滤分析表明白芸豆凝集素是由两个30 kDa的单体组成的分子量约为56 kDa的同源二聚体蛋白。凝血活性结果表明白芸豆凝集素能凝集的兔血细胞和人ABO血型细胞,无血型专一性。其凝血活性在80 ℃以下和pH 3.0-10.0时保持稳定。脲、盐酸胍对PCL凝血活性的影响表明,随着变性剂浓度的升高,凝血活性逐渐丧失。不同温度、pH和不同浓度变性剂条件下PCL的荧光光谱分析表明PCL变性过程的阶段性。 相似文献
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凝集素是一种非酶非免疫来源、能特异性结合糖的蛋白或糖蛋白,广泛分布于动植物及真菌中,具有凝集细胞、抗病毒、抗细菌、抗真菌及寄生虫,以及影响精卵识别和诱导肿瘤细胞凋亡或自噬等生理功能。在物种抗击外来伤害、免疫反应、信号转导等诸多生物过程中发挥重要作用。在所有凝集素中,植物凝集素分布最广,种类最多,功能多样。本文介绍了植物凝集素的研究背景,主要生物学功能及其在医学、分析测试方法和农业领域的应用,并在此基础上展望植物凝集素在医学、农业和生化领域的研究方向。 相似文献
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采用荧光光谱研究了一支箭凝集素(OPA)在不同温度,pH值以及不同淬灭剂作用时,其活性和分子构象变化的关系,结果表明:OPA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,分子构象也无较大变化,但在pH 12时,其分子构象发生较大变化,活性也基本丧失.荧光淬灭剂丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对OPA中Trp淬灭程度达100%,KI淬灭约62.5%的Trp荧光.表明OPA发射荧光的氨基酸残基大部分位于分子表面,少部分位于分子内部疏水环境中,且发荧光氨基酸所处微环境带电荷. 相似文献