猪脑心肌炎病毒VR-129 B株VP2重组蛋白的构建表达及其免疫活性分析

为获得大量猪脑心肌炎VP2基因及蛋白研究的细胞模型,构建pDC315-EMCV-VP2真核表达载体,且将其转染到293T细胞,筛选出阳性质粒进行克隆。EMCV VR-129B株VP2基因序列参照GenBank(登录号:X74312),利用RT—PCR方法扩增VP2的全基因序列,将其与质粒pDC315经NheI和XhoI双酶切后连接,构建pDC315-EMCV-VP2重组表达质粒,并将其转染至293T细胞。使用荧光定量PCR方法观察pDC315-EMCV-VP2真核表达载体在细胞中的表达情况。双酶切PCR结果获得大小为780 bp的基因片段,测序结果显示与GenBank上已经公布的同名基因(登录号:X74312)序列片段同源性为100%,重组质粒构建成功。实时荧光定量PCR(QPCR)结果显示,重组质粒转染组与空质粒组之间相比,EMCV-VP2基因的表达量显著上调(P0.001);在荧光显微镜下观察转染细胞,转染成功部分出现较亮绿色荧光,EMCV-VP2基因表达稳定。从转染细胞中提取重组蛋白与EMCV阳性血清和阴性血清进行ELisa反应,具有较好免疫活性。     

对新形势下港口企业文化建设的探索

港口企业文化是企业文化的一个分支,具有鲜明的行业特性,集中体现为港口资源的有限性、港口生产的专业服务性以及港口产品的不可转移性等。这些特性决定了港口企业必须突破一般企业文化建设的模式,着重于通过港口企业的硬件建设和软件建设,进行理论创新、服务创新、技术创新、制度创新。面对新形势下港口企业文化建设的新变化,港口企业文化建设必须与时俱进地提出和补充许多新的企业文化建设理念,才能跟上形势发展的需要,方能有所作为。     

猪源纤维蛋白粘合剂对大鼠皮肤创伤的愈合及羟脯氨酸表达的影响

【】 目的 为促进皮肤创伤愈合提供实验依据,最终为临床新应用提供依据,探究猪源纤维蛋白粘合剂(FS)其对大鼠皮肤创伤的愈合及其对创面皮肤羟脯氨酸表达的影响,。方法 72只体重为160-200 g SD雄性大鼠随机分为空白对照组、白凡士林组和FS组,于背部制作直径为1.5 cm的全层圆形皮肤切除创面,每组各24只,空白对照组不做任何处理,白凡士林组和FS组则分别用医用白凡士林和FS涂抹伤口。术后3 d、7 d、14 d和21 d测量各组大鼠的皮肤伤口面积,计算各组皮肤创面愈合率,取术后7d和14d伤口皮肤标本进行HE病理组织学观察;并于术后7d、14d和21d取组织进行酶联免疫法测定愈合组织中羟脯氨酸蛋白含量。结果 在术后3 d、7 d、14 d和21 d时,FS组的伤口愈合率高于空白对照组,且其差异具有统计学意义(p<0.05)。HE染色结果显示在第7d时FS组胶原沉积高于空白对照组,血管新生数亦高于空白组、白凡士林组,差异均具有统计学意义 (p<0.05);在14 d时,与空白对照组相比,FS组胶原沉积较高且差异具有统计学意义(p<0.05),而血管新生数各组之间无统计学意义(p>0.05)。对各组创面组织中HYP含量进行测定,结果发现,在第7 d、14 d和21 d时,FS组大鼠皮肤创伤组织中HYP含量均明显高于空白对照组 (p<0.05)。结论 猪源纤维蛋白粘合剂能有效促进大鼠皮肤创伤的愈合,缩短愈合时间,其具有潜在的应用价值,为临床皮肤创伤治愈提供了新思路。