水苏碱对葡聚糖硫酸钠诱导的炎性肠病的保护作用及其机制

为了研究水苏碱(stachydrine,Sta)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的炎性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的保护作用及其机制.将42只同一批次、体重无明显差异的雄性C5 7BL/6J小鼠随机分为7组,即对照组(control)、模型组(model)、地塞米松(dexamethasone,DXM)组、水苏碱低中高剂量组(Low-Sta,Mid-Sta,High-Sta)以及水苏碱毒性组(Sta toxicity),每组6只.模型组、地塞米松组和水苏碱低中高剂量组采用DSS水溶液(0.03 g/mL)代替正常饮水进行造模,对照组和水苏碱毒性组采用正常饮水喂养.同时DXM组每天灌胃地塞米松水溶液(1 mg/kg),水苏碱低中高剂量组每天分别灌胃水苏碱水溶液(5、10和20 mg/kg),模型组和对照组每日灌胃等量的生理盐水,水苏碱毒性组每天灌胃高剂量(20 mg/kg)的水苏碱水溶液.7 d后处死小鼠,取各组小鼠结肠测量长度并进行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)和高碘酸希夫氏染色(periodic acid schiff reagent staining,PAS),观察结肠组织的病理改变以及对照组和水苏碱毒性组肝肾的病理变化;采用蛋白印迹技术(Western Blotting,WB)检测结肠组织中炎症相关蛋白白介素6(IL-6),核因子-κB(NF-κB)和氧化应激相关蛋白如核转录因子2(NRF2)、血红加氧酶1(HMOX1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和闭合蛋白(occludin)及膜周蛋白(zonula occludens,ZO)的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中IL-6,IL-17a和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)的含量;采用流式细胞术检测结肠细胞中活性氧(ROS)阳性细胞的比例.结果显示:水苏碱毒性组小鼠的肝肾及小肠的HE染色结果与对照组相比未见灶性坏死,未见明显纤维化,未见细胞结构破坏及炎症,没有明显差别;与对照组比较,模型组小鼠的结肠长度明显缩短,并且HE结果显示模型组小鼠的肠隐窝结构破坏严重,黏膜下层出现明显的水肿以及炎细胞的浸润,PAS结果显示出模型组的糖蛋白含量显著降低,而在地塞米松和水苏碱处理后上述症状出现了明显的好转;ELISA结果显示,相较于对照组,模型组小鼠血清中的IL-6,IL-17a和TNF-α等促炎因子的含量显著增高(P＜0.001),相较于模型组,地塞米松组和低中高剂量水苏碱组的促炎因子的含量显著降低(P＜0.05).WB结果显示,水苏碱可显著缓解因DSS诱导所致的结肠中IL-6和NF-κB蛋白含量升高,并同时提高了NRF2,HMOX1,NQO1,Occludin和ZO-1蛋白的表达量;流式细胞术检测ROS结果显示,相较于对照组,模型组的ROS阳性细胞比例显著增高,但在地塞米松和低中高剂量的水苏碱处理后,ROS阳性细胞的比例均明显降低(P＜0.05),具统计学意义.以上结果表明,水苏碱可能通过抑制炎症因子的表达和抗氧化应激来缓解DSS诱导的小鼠炎性肠病.     

胃癌下调新基因GDDR表达特性及功能研究

明确胃癌下调新基因GDDR的亚细胞定位、分泌特性及生物学功能研究.与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达明确GDDR表达产物亚细胞定位;GES细胞系转染上清检测分泌蛋白表达;胃癌7901细胞系稳定转染GDDR,观察其生物学作用.发现GDDR表达产物定位于胞浆,是一分泌蛋白.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT assay)检测描绘生长曲线及流式细胞计数仪(FACS)细胞周期检测表明,GDDR对胃癌7901细胞增值显著抑制(96 h(1.233±0.017) vs (0.618±0.015), t =2.447, P =2.63×10-9),并且可以引起细胞的周期阻滞.说明胃癌下调新基因GDDR产物为胞浆分布,具有分泌特性,能通过阻滞细胞周期显著抑制胃癌细胞生长,可能为新的候选抑癌基因.     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞MAGE家族分子表达的影响

研究全反式维甲酸（ATRA）在诱导乳腺癌MCF-7细胞分化和凋亡过程中黑色素瘤相关抗原基因（Melanoma AssociatedAntigen,MAGE）家族分子的表达水平的变化,从而为其功能研究提供线索.六孔培养板培养乳腺癌MCF-7细胞至对数生长期,给以终浓度为10-6 mol/L的ATRA的刺激,于不同时间点（0 h,12 h,18 h,24 h,36 h,48 h）收集细胞,RT-PCR检测MAGE家族中（MAGE-A1、MAGE-C1、MAGE-D1、Necdin）分子的表达水平.结果ATRA诱导不同时间的MCF-7细胞MAGE家族分子表达水平呈现MAGE酸性亚家族（Ⅰ型抗原）表达逐步下调,而MAGE碱性亚家族（Ⅱ型抗原）表达逐步上升的趋势.说明MAGE家族酸性和碱性分子均参与ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡,而且可能发挥作用是相反的.     

qking基因对大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

为探讨qking基因对大鼠心肌成纤维细胞(Cardiac Fibroblast,CF)增殖及胶原合成的影响,进一步完善心肌纤维化的相关机制;为改善心机重构提供新的思路,采用胶原酶消化,差速贴壁法原代培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,以血管紧张素II(AngII)诱导CF建立增殖及胶原合成模型,运用western-blot法,RT-PCR法,流式细胞术观察过表达qking对CF增殖及胶原合成的影响.结果在CF中血管紧张素II诱导了qking表达时间依耐性的降低,在24 h后降至谷底.过表达qking后通过western-blot法及RT-PCR法检测了CF中增殖细胞核抗原(PCNA)及胶原蛋白1a/3a表达水平的变化,流式细胞术观察细胞周期,数据表明qking基因编码的QKI-6蛋白亚型的过表达能明显抑制CF的增殖;而对于CF中胶原合成未见明显影响.说明qking基因编码的QKI蛋白对CF增殖发挥负性调节作用,但对胶原合成并无明显影响.     

MAGE家族新成员Restin入核分子机制的初步探讨

restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原（MAGE）家族的新基因，初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序列（nuclear localization signal，NLS），且预测结果显示Reslin入核可能与核转运蛋白imponjn αⅡ的作用密切相关。因此克隆并鉴定了针对NLS等结构域的一系列截短体以及pACT—impotin α Ⅱ，利用细胞双杂交技术对其进行相互作用以及作用部位的检测。结果证明Restin的入核确实与核定位信号序列以及核转运蛋白的相互作用有关。