液质联用研究人重组干细胞因子一级结构

通过高效液相色谱(HPLC)和质谱技术,对人重组干细胞因子(rhSCF)分子进行分析,以确证其一级结构.将rh-SCF样品胰酶酶切,HPLC-RPC分离,基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱仪(MALDI-TOF-MS)对rhSCF的酶切肽段进行解析,并对rhSCF的O-糖基化和N-糖基化位点进行了分析.结果:(1)rhSCF分子质量得到测定;(2)rhSCF的一级结构得到确认,测定的肽质量谱的覆盖率达到94%,分子中有两对二硫键;(3)鉴定了样品中的N-糖基化位点,并对rhSCF产品的O-及N-连接糖型上的糖结构进行初步探讨.结果显示:rhSCF一级氨基酸序列和二硫键形成位置与理论上一致,糖基化特性符合毕赤酵母表达蛋白的糖基化特点.     

重组人脂联素基因构建、表达、纯化及活性鉴定

根据脂联素cDNA序列设计并合成9条寡聚核苷酸片段,经重叠PCR技术获得重组人脂联素基因.构建pET-22b( )/ADPN表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.表达产物通过Ni-NTA柱纯化,SDS-PAGE分析显示,其分子量约为30 ku,与预期结果一致.内皮细胞生长抑制实验证实,重组人脂联素生理浓度下具有抑制人内皮细胞生长的活性并呈时间依赖性.以上工作为进一步研究脂联素的生物学功能奠定了基础.     

国产胸腺肽诱导肝癌细胞凋亡及其机制

以ＭＴＴ法检测胸腺肽对ＨｅｐＧ２的细胞毒作用,以细胞原位凋亡染色法（Ｔｕｎｅｌ法）检测胸腺肽诱导ＨｅｐＧ２细胞凋亡,并以ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法及免疫组化法检测药物处理后ｂｃｌ－２、Ｆａｓ抗原的表达变化。结果显示在０～１５０ｕｇ／ｍＬ浓度范围内,胸腺肽对ＨｅｐＧ２无明显的细胞毒作用,当药物浓度超近１５０ｕｇ／ｍＬ以上,细胞毒作用呈上升趋势,其ＩＣ５０为３３０ｕｇ／ｍＬ,而低于１５０ｕｇ／ｍＬ的胸     

阿霉素与肺癌单克隆抗体交联物的制备及其生物活性

以氧化葡聚糖法制备阿霉素（ＡＤＭ）与肺癌单克隆抗体＿３Ｄ＿３（ＭｃＡｂ＿３Ｄ＿３）的交联物ＡＤＭ－Ｄｅｘ－ＭｃＡｂ＿３Ｄ＿３，ＡＤＭ与ＭｃＡｂ＿３Ｄ＿３克分子比为４６：１．经ＩＦＡ测定，交联物的抗体活性大部分保持．体外细胞毒试验显示，ＡＤＭ－Ｄｅｘ－ＭｃＡｂ＿３Ｄ＿３对肺癌细胞Ｌ＿（３４２）的杀伤作用比游离ＡＤＭ增强，其５０％的杀伤浓度分别为１．１２μｍｏｌ／Ｌ和２．２３μｍｏｌ／Ｌ；对非靶细胞ＭＧ＿（ｃ－８０３）和ＢＥＬ＿（－７４０２）的毒性很弱，５０％杀伤浓度分别为１７．４５μｍｏｌ／Ｌ和２３．８１μｍｏｌ／Ｌ结果提示ＭｃＡｂ＿３Ｄ＿３具有导向作用，可以携带结合的ＡＤＭ特异地杀伤肿瘤细胞。     

电场诱导细胞融合产生杂交瘤

摸索和探讨了HPES-1型高级基因转移仪在BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0电融合中的应用,获得了一组选择参数,采用短脉冲输出方式,脉冲幅度6kV,脉冲宽度50μs,脉冲数2~9,循环数50×2及脉冲休止时间2s的电融合参数,纳合高细胞密度(10~5cell/200μl)增加细胞间聚集的方法,可较容易地获得杂交瘤,并应用该技术成功地制备了分泌人血清白蛋白单克隆抗体的杂交瘤。     

用荷瘤裸鼠模型研制抗人肝癌单克隆抗体

1985年Watanabe等报道:用去胸腺载瘤小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0融合获得抗结肠癌单克隆抗体之后,利用荷瘤裸鼠模型成功研制抗人肿瘤单抗的报道已相继出现:但所获单抗多为IgM,IgG类的单抗得率不高,本工作采用多次手术大部切除瘤块的方法延长荷瘤裸鼠的成活期,获得一株抗人肝癌IgG类单抗、其研制过程和结果报道如下。     

嵌筋与外贴钢板加固木框架填充墙抗震性能试验研究

为了研究木框架内砖砌体填充墙的抗震加固方法,共完成了3个缩尺试件的低周往复荷载试验.基于试验研究,得到了试件的破坏特征、滞回曲线、骨架曲线、承载力、延性和耗能能力等抗震性能指标.试验结果表明:未加固试件的破坏主要由填充墙的剪切裂缝控制且伴有平面外倾斜,木框架未见损伤;对砖砌体填充墙采用嵌入水平钢筋与端部外贴钢板进行加固可以有效地提高试件的承载力与延性,且一定程度的裂缝损伤对加固后试件的名义屈服荷载、峰值荷载影响不大,但对延性与能量耗散能力影响明显.     

幽门螺杆菌空泡毒素相关蛋白基因、空泡毒素基因与上消化道疾病的关系

采用ＰＣＲ法对７７例胃、十二指肠患胃粘膜Ｈｐ ｃａｇＡ基因和ｖａｃＡ基因的扩增以探讨ｃａｇＡ基因和ｖａｃＡ基因型Ｈｐ与上消化道疾病的关系。７７例Ｈｐ感染患中,６０例检测出ｃａｇＡ基因,阳性率为７７．９％,消化性溃疡和慢性胃炎的阳性率分别为８７．８％（４３／４９）和６０．７％（１７／２８）,其差别有显意义（Ｐ〈０．０１,ｖａｃＡ的２种亚型ｖａｃＡ１和ｖａｃＡ２各占７９．２％（６１／７７）和２０．８％（１６／７７）。每种胃粘膜只能扩增出ｖａｃＡ１或ｖａｃＡ２的一种产物,其中ｖａｃＡ１在消化性溃疡和慢性胃炎中的检出率为８７．８％（４３／４９）和６４．３％（１８／２８）,两判别有显性（ｐ〈０．０２）。这些结果提示ｃａｇＡ基因和ｖａｃＡ１基因型Ｈｐ与消化性溃疡关系密切,这对ＨＰ相关的消化道疾病的预后和临床治疗有     

双过氧钒化合物NH4[OV(O2)2(C8H7N3)]·4H2O抗肿瘤活性研究

在细胞和动物实验水平上,研究了双过氧钒化合物NH4[OV(O2)2(C8H7N3)]×4H2O(简写bpV(Imi-Py))对癌细胞的增殖作用,碱性磷酸酶的活性抑制和体内抗肿瘤作用.研究结果显示bpV(Imi-Py)对胃癌细胞株MGC-803、肺癌细胞株95D和L342的IC50值分别为8.27、26.37和9.54μmol/L,而对人正常肾胚胎细胞HEK293的IC50值达6 642μmol/L,表明该化合物对肿瘤细胞具有特异杀伤作用.研究还表明bpV(Imi-Py)对MGC-803细胞提取液的碱性磷酸酶(ALP)也有明显抑制作用,呈现量效关系.动物体内抗肿瘤实验发现bpV(Imi-Py)能抑制肝癌细胞生长,肿瘤体积实验组较对照组下降35.6%,表明bpV(Imi-Py)有较好的抗肿瘤活性.另外,小鼠急性毒性实验的LD50为147.2mg.kg-1,说明bpV(Imi-Py)是一种中等毒性的抗肿瘤化合物.图4,表1,参15.