4种兜兰RubisCO的分离纯化及酶学性质初步研究

采用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析与凝胶过滤层析的方法，分离纯化得到硬叶（P. micranthum）、紫纹（P. purpurattum）、带叶（P. hirsutissimum）和亨利（P. henryanum）4种兜兰RuBisCO的大、小亚基，分子量分别为51.5~54.5kD和15~16kD. 4种兜兰RubisCO的羧化/加氧活性在pH8.0、温度30℃时最高，其活性大小顺序为硬叶兜兰紫纹兜兰亨利兜兰带叶兜兰，且紫纹兜兰、亨利兜兰的羧化/加氧活性比值相对高于硬叶兜兰、带叶兜兰；硬叶兜兰RubisCO的Km（RuBP）值最小.4种兜兰RubisCO的特性反映了其不同的生理和生境特征.     

硬叶兜兰花芽SSH文库的构建

以硬叶兜兰花芽cDNA为Tester,营养芽cDNA为Driver,利用SMART策略构建了硬叶兜兰花芽的抑制性消减杂交(SSH)文库.通过PCR对文库中插入的片段进行检测后,筛选了288个插入片段为500bp以上的克隆进行测序.测序结果去除载体序列后聚类得到18条差异表达片段,用BLAST进行比对分析表明,这些差异表达基因所编码的蛋白与光合作用、合成代谢、基因调控等功能有关,其中包括多个转座子和反转录转座子的同源基因.     

金钗石斛VRN1-like基因的克隆及其表达分析

用20mg/L的噻重氮苯基脲（thidiazuron,TDZ）处理金钗石斛（Dendrobium nobile）成株叶片,观测其对开花的影响;以金钗石斛类原球茎为材料,通过同源克隆分离其VRN1-like同源基因,利用半定量RT-PCR分析细胞分裂素对该基因在腋芽和类原球茎中表达的影响. 结果表明,喷施TDZ可以代替低温处理诱导金钗石斛开花;通过同源克隆得到了金钗石斛VRN1-like基因DnVRNA的全长cDNA. 该cDNA编码的蛋白与高羊茅（Festuca arundinacea）和小麦（Triticum monococcum）中VRN1蛋白的氨基酸序列一致性分别为63%和62%. 半定量RT-PCR结果表明,DnVRNA在腋芽中的表达受TDZ的促进,而在类原球茎中,其表达也受到细胞分裂素和低温的诱导,暗示该基因可能参与细胞分裂素替代低温诱导金钗石斛成花的生物学过程.     

热解生物油中酚类化合物的萃取

以松木快速热解生物油为原料,对蒸馏得到的富含酚类馏分进行了萃取-反萃取提取酚类化合物的研究,考察了不同有机溶剂如二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯、正己烷、环己烷等对酚类的萃取效果.结果表明:乙酸乙酯能够有效地萃取碱化后生物油中的非酚有机物,使水相中酚类物质含量提高;而在反萃取过程中,乙酸丁酯、正己烷和石油醚对酚类的萃取选择性比其他几种萃取剂要好,其中以乙酸丁酯对酚类的萃取率最高.若采用乙酸乙酯为萃取剂,乙酸丁酯为反萃取剂,则本方法从新鲜生物油中萃取酚类的总萃取率可达59.1%.