稳定表达绿色荧光蛋白的B16细胞株的建立及其生物学特性研究

目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的B16黑色素瘤细胞株，并研究其生物学特性。方法转染增强型绿色荧光蛋白基因入B16细胞，经G418联合单克隆培养，筛选阳性细胞。激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP阳性细胞形态；流式细胞仪检测细胞内EGFP基因的蛋白表达；RT-PCR检测EGFP基因的mRNA表达；皮下接种及MTF法评价细胞在体内外的生长特性。结果流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白的细胞阳性率为99．81％，RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA阳性表达。生长曲线显示其体外增殖趋势与B16相似，EGFP—B16体内成瘤速度较B16慢（P〈0．05）。结论稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP—B16细胞株成功建立，可作为作为进一步研究恶性黑色素瘤的材料。