含有人凝血因子Ⅸ自身内含子Ⅰ的反向逆转录病毒载体构建及表达

目前基因治疗研究遇到的普遍问题是转染效率低下及目的基因蛋白在活体表达水平较低,其中解决目的基因表达较低的一个重要手段便是基因载体的改造。1990年,Jallat等人在转基因小鼠研究中发现:hFIX cDNA的表达量低,而其余一系列带有完整内含子Ⅰ或中间缺失4.8kb的内含子Ⅰ的转基因小鼠,其表达都和完整的Ⅸ因子表达相仿。这提示Ⅸ因子内含子Ⅰ顺序对其表达有一定的促进作用。1995年,Kurachi等人用含内含子Ⅰ片断的表达质粒转化HepG2细胞,发现瞬间表达要比cDNA高出7倍,其凝血活性和细胞内mRNA水平也有相应数量的提高。本实验室也进行了hFIX intron Ⅰ的研究工作,构建了逆转录病毒载体GlNaCi′IX,但对病毒上清进行RT-PCR检测,发现intron Ⅰ常被不同程度剪切。本文以SNMBAAIXm为蓝本,构建了反向表达载体GlNaPAi′IXBAM,其中Ⅸ因子转录方向与LTR转录方向相反,以期避免病毒包装中将intron Ⅰ剪切掉,使intron Ⅰ结构能够正确引入到靶细胞中,从而提高Ⅸ因子的表达量。     

DL-半胱氨酸对CCL_4肝中毒小白鼠LDH和SOD活性的影响

小白鼠口服花生油溶四氯化碳（ＣＣＬ４）１３．９５ｇ／ｋｇ（公斤体重）至３６ｈ诱发肝中毒和口服ＣＣＬ４前１０～２０ｍｉｎ于腹腔注入ＤＬ－半胱氨酸１００ｍｇ／ｋｇ．用凝胶圆盘电泳法显示肝中毒和中毒前腹腔注入ＤＬ－半胱氨酸小白鼠的血清乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶和肝匀浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的谱带变化．结果表明，中毒鼠血清呈现以ＬＤＨ５带占优势的肝损伤ＬＤＨ同工酶谱；中毒前腹腔注入ＤＬ－半胱氨酸的小白鼠，血清ＬＤＨ同工酶谱ＬＤＨ５显著缩减，其它同工酶带几乎未显现．ＣＣＬ４中毒的肝匀浆ＳＯＤ谱带与正常鼠比较明显变宽或呈现两条同工酶带；中毒前腹注ＤＬ－半胱氨酸的小鼠ＳＯＤ带与正常鼠略同，但有的仍呈现两条微弱的同工酶带．谱带的这些变化表明，ＣＣＬ４诱发肝细胞损伤可能与自由基生成和脂质过氧化有关，ＤＬ－半胱氨酸则可能具有阻断肝损伤的作用；ＣＣＬ４肝中毒在诱发自由基生成的同时又刺激了肝细胞ＳＯＤ活性增强     

重视物理启蒙教育 激发学生学习兴趣

如何培养学生的学习兴趣,开发学生的智能,把学生引入物理学大门,为今后学习物理奠定坚实的基础,这是初中物理启蒙教育的首要任务.本文根据笔者十几年的教学实践认为,在初中的起始教学阶段中应重视认真做好三个“第一” 以及坚持做到“三先三后” 的教学方法,对于提高学习物理的兴趣,有着积极的推动作用.     

凝血因子IX的体外检测方法研究

凝血因子ＩＸ的检测是血友病Ｂ基因治疗研究中的重要工作，在实验室原有基础上，发现和完善了凝血因子ＩＸ在蛋白质水平上的检测系统，为基因治疗血友病Ｂ提供了更为直观可靠的依据。首先，建立了以鼠抗人ＦＩＸ单克隆抗体Ａ－７为一抗的检测活性ＦＩＸ蛋白量的ＥＬＩＳＡ法，为检测活性ＦＩＸ提供了快速简便的方法。其次，实现了用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测转染细胞培养液上清中ＦＩＸ，确证了体外培养的转有人ＦＩＸｃＤＮＡ细     

核酸疫苗研究与发展前景

核酸疫苗是近几年新兴的一种疫苗,是将编码的保护性抗原基因构建真核表达质粒直接导入动物体细胞内,使外源基因通过机体内源性表达系统并提呈给免疫系统,诱发产生特异性的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗又称为基因疫苗或DNA疫苗,这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫以及遗传免疫等。目前,核酸疫苗已在病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫免疫、抗肿瘤免疫、预防变态反应中发挥了巨大的作用,在畜禽传染病方面主要用于猪瘟、猪口蹄疫、禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、传染性支气管炎等。一、核酸疫苗的免疫机理核…     

间苯二酚法测定蜂蜜中果糖的研究

对利用间苯二酚法测定蜂蜜中果糖的条件进行了优化选择，并对其应用性进行了评估．结果表明，果糖与间苯二酚、盐酸共热生成的红色络合物在483nm处吸收峰最高；当间苯二酚质量浓度为2g／L、盐酸浓度为5mol／L、加热温度为100℃、加热时间为7min、果糖的质量浓度在0．2～2g／L之间时，果糖的质量浓度与吸光值具有良好的线性关系，回归方程为Y=0．035＋0．5648x，r^2=0．9994．     

基于ArcGIS的数字河网模拟

本文主要应用ARCGIS8．3地理信息系统软件中的水文分析模块对DEM模型进行空间分析，从而生成壁山县水流方向图，集水能力图，流域河网图等图件，从而总结了根据流域的数字高程模型（DEM）自动提取河网水系的方法。该方法自动化程度高，在分析流域的河网水系结构特征时具有一定的应用价值。     

基层电大建立现代远程开放教育合作学习小组的必要性及环境分析

立足成人特点和电大特色的小组合作学习实践是电大实行远程开放教育试点,开展教学教育模式改革的有效途径.文章对电大建立远程开放教育合作学习小组的必要性、条件与环境进行了多方面的考察与分析.     

柴达木绒山羊血钾型与体重、绒产量的相关性研究

采用火焰先度法对91只柴达木绒山羊的血钾型进行了研究。结果发现：柴达木绒山羊血钾型存在高血钾（HK）和低血钾（LK）两种表型而呈现多态性，且以HK为优势表型（64．84％），KL和Kh等位基因频率分别为0．1948和0．8052，基因杂合度为0．3137；同时血钾型与体重、产绒量两个生产性状之间无显著联系（P〉0．05）。     

自激振动的计算机模拟

用计算机模拟了自激振动．演示VDP方程所描述的系统在非线性能源供给下，从任意初始条件出发都能产生稳定的周期性运动．采用庞加莱映像，演示强迫VDP方程在不同参数下所存在四种吸引子．对于强迫VDP方程．在V和ω为定值条件下，逐渐增大μ值，将出现周期倍分岔和混沌现象．