以酵母菌双杂合技术寻找志贺氏菌IpaH7.8作用蛋白质的目标蛋白

背景:志贺氏菌感染能造成人类出血性腹泻,此菌常带有一大型毒性质体,以携带第三型分泌系统及相关致病基因,并透过此系统释放作用蛋白,协助菌体侵入人类肠壁细胞,操控细胞功能,以利在细胞中存活及增殖.IpaH家族蛋白是作用蛋白中较特别的一群,志贺氏菌常带有数个IpaH家族基因,除了在毒性质体上,经常同时存在染色体上.从蛋白质结构上来说,IpaH家族蛋白皆由两个功能性区域组成,其C端均为E3泛素连接酶,而N端在不同IpaH家族蛋白则具有不同的白氨酸重复序列,可能结合不同的目标蛋白,最后将其泛素化.其中IpaH4.5、IpaH7.8、IpaH9.8在侵入宿主细胞后才释放:目前已有研究发现IpaH4.5和IpaH9.8的目标蛋白,其他IpaH蛋白的目标蛋白和功能则仍未知,因此我们希望利用酵母菌双杂合技术找出IpaH7.8的目标蛋白.方法:使用酵母菌双杂合系统筛选,接着将可能的候选蛋白,以其在细胞内的分布、伪阳性的可能性、与IpaH7.8交互作用的强度等,作进一步评估,最后以共同沉淀技术进行验证.结果:经酵母菌双杂合系统筛选后,我们得到6个候选蛋白,其中多数参与细胞的代谢反应.其中一候选蛋白-RAD50,主要分布在细胞核,而我们直接在细胞中表现IpaH7.8 N端和绿色萤光蛋白的融合蛋白,也发现绿色萤光聚集在细胞核,因此推测RAD50为候选蛋白的可能性最高.将IpaH7.8和RAD50进行共同沉淀,显示两者在生物体外的条件下可互相结合.     

Purifications and Structure Elucidations of Cyciopenol and Cyciopenin

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是激活的巨噬细胞分泌的一种多功能因子,其过量表达可以引起类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病.因此,寻找开发其小分子抑制剂具有重要意义.在对一株分离自厦门海沧红树林土壤青霉属(Peni-cillium sp.)真菌的次级代谢产物进行分离纯化以获得TNF-α抑制制的研究中,通过中压反相硅胶柱层析(RP-18)、常压凝胶柱层析(Sephadex LH-20)、硅胶柱层析(Si-Gel)等柱层析技术对两种产量较高的化合物进行了分离纯化.通过对两个化合物的一维(1D-)、二维(2D-)核磁共振(NMR)和质谱(MS)数据的深入解析,确定两个化合物为生物碱圆弧菌醇和圆弧菌素,两者的产率分别达7.0和3.9 mg/L,并通过X射线单晶衍射确定了圆弧菌醇手性碳的绝对构型.圆弧菌醇和圆弧菌素是生物合成TNF-α诱导的人类HIV病毒复制强抑制剂纯绿青霉素过程的中间产物,但是在拮抗过量TNF-α的实验中并没有表现出明显的活性.该研究为开发利用这两种生物碱及通过生物转化合成纯绿青霉素,及加速新的潜在免疫抑制剂的研究提供基础.     

大理学院附属医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的:对大理学院附属医院2011年至2012年临床分离的大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌的耐药性进行分析,指导临床合理应用抗生素。方法:菌株分离及培养按常规方法进行,细菌鉴定采用VITET-2 Compact 60全自动微生物分析仪,药敏试验采用K-B法。结果:共收集标本183株,其中大肠埃希菌146株:口痰92株(63%)、分泌物17株(11.6%)、尿液16株(10.9%),脓液9株(6.1%),其他12株(8.2%);肺炎克雷伯杆菌37株:口痰27株(73%)、分泌物5株(13.5%)、脓液3株(8%)其他2株(5.4%)。药敏试验结果显示:大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药率较低,分别为10.3%、6.2%、2.7%和10.8%、13.5%、2.7%。结论:大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌两年痰液中检出率呈上升趋势,对左氧氟沙星、头孢唑啉,氨曲南,头孢他啶等耐药率超过50%,特别是头孢他啶的耐药率相对于2008年显著升高,而对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药性较低,临床应根据药敏实验合理选择抗生素。     

嗜盐古菌ABDH12的部分生理生化特征及Br蛋白基因部分序列的研究

文章分析新疆艾比胡嗜盐古生菌物种与细菌视紫红质（bacteriorhodopsin，BR）蛋白基因资源，对分离纯化到的极端嗜盐古生菌菌株ABDH12，对其进行了生理生化特性研究，采用PCR方法扩增技术和编码螺旋c至螺旋G的BR蛋白基因片断，测定了BR蛋白基因核心序列。基于生理生化特性和BR蛋白基因序列的同源性比较，以及系统发育分析表明，BR蛋白中对于完成质子泵功能以及与视黄醛结合的关键性氨基酸残基均为保守序列，位于膜内侧的序列比位于膜外侧的序列更保守，并且ABDH12中的螺旋C至螺旋G的蛋白与其他菌株差异明显，是两种新的BR蛋白，序列号为：FJ796897。迄今为止，国内极少有关艾比湖嗜盐古菌的BR蛋白研究的报道，文章可为今后研究同类极端环境中新的物种资源提供素材和参考。     

亚硝酸型生物脱氮在MBR处理垃圾渗滤液中的中试研究

垃圾渗滤液作为一种恶劣的污水,以其氨氮和COD浓度高而著称,如何高效处理垃圾渗滤液正成为众多学者研究的方向。本文即通过在MBR中实现短程硝化反硝化,考察其对垃圾渗滤液的处理效果。     

震惊世界的“巨魔”

2000年上半年，许多国家的媒体都报道了一个惊人的消息：美国发现了世界上最大的、存活时间最长的生物——魔菌。魔菌面积800万平方米，用形象一点的比喻，足有1700个足球场大，其寿命长达2400年。     

泌尿生殖道感染酵母菌258株菌相分析

目的：探讨机体微生态环境紊乱状态下酵母菌（条件致病菌）引起泌尿生殖道感染菌种分布特点。方法：常规真菌培养、分纯、鉴定。结果：258株酵母菌中念珠菌属251株，占总数的97.2%，且以白念珠菌、热带念珠菌、埃切念珠菌、光滑念珠菌、白球念珠菌为主，共239株占95.2%(239/251)。结论：临床酵母菌为主的真菌泌尿生殖道感染以念珠菌居首且日趋增多，应予以高度重视。     

西藏嗜盐菌xz515紫红膜中类菌紫质分子的AFM成像

嗜盐菌H.sp.xz515是从西藏扎北湖分离出的一种嗜盐菌新株，H.sp.xz515中紫红膜上的质子吸收和释放的过程与普通嗜酸盐（Halobacterium salinarum)中紫膜上的过程相反，而且紫红膜的质子泵的效率也比紫膜的低，但原子力显微镜的观测图像显示类菌紫质分子在细胞膜上也是三聚体结构，三聚体再形成六边形排列。类菌紫质分子的C至G螺旋的一级结构和菌紫质分子之间的同源性仅56％，但B和D螺旋之间界面上相互作用的氨基酸残基却是保守的，表明这些氨基酸残基在维持蛋白质寡聚体的稳定性上起着重要的作用。     

固定化优势菌去除焦化废水中COD的研究

采用聚乙烯醇(PVA)-硼酸包埋固定化法,包埋经筛选出的优势菌,制成固定化优势菌胶片.研究了不同条件下(温度、pH等)优势菌对COD的去除效果以及与未添加固定化优势菌的处理工艺进行比较,并对优势菌在最优环境下的生存状态进行了测定和观察.     

醋酸菌液态发酵产酸的研究

通过正交试验探讨了醋酸菌液态发酵产酸的最佳配方及工艺。