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构建具有不同类型和长度的5'非编码区(UTR)及3'UTR的丙型肝炎病毒(HCV)全长cDNA克隆,体外转录制备RNA,转染肝癌细胞HepG2,研究不同RNA转录体在细胞内的复制情况。通过RT-PCR与Westernblot等方法证明:蛋白编码区来源于1a基因型并具有1b型5'UTR及3'UTR(全长或缺失98nt保守区)的2种嵌合型HCVRNA,都可以在病毒易感细胞中复制和表达;而以脑心肌炎病毒(EMCV)内核糖体进入位点(IRES)替代HCV5'UTR的嵌合型RNA转染细胞,检测不到病毒正、负链RNA与蛋白表达。以上结果说明HCV1b型5'UTR与3'UTR可以支持1a型病毒RNA的正常复制,3'UTR保守区的存在与否,对病毒复制影响不大。 相似文献
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杨敬让 《福州大学学报(自然科学版)》1982,(2):70-78
本文论述软支承动平衡机的工件的许用工作转速与其机械振动系统的自振频率的关系，从而给出一个计算其弹簧片的公式。 本文还明简地介绍了操作该机时的补偿与无补偿平衡法． 相似文献
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通过PCR法扩增出HCV包膜糖蛋白E1-E2的全长基因片段.将测序正确的片段克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建HCV包膜糖蛋白基因真核表达载体.再采用脂质体法转染肝癌细胞系hepG2,利用RT - PCR、Western blot等方法对目的基因的转录与表达进行分析与鉴定.结果表明所构建的含有HCV包膜糖蛋白E1-E2基因的真核表达载体在HepG2细胞中能瞬时表达.重组真核质粒的构建及表达为下一步建立稳定转染细胞系及进一步研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定了基础. 相似文献
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在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化.根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因.合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化.成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和western-h1ot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶.获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础. 相似文献
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通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。 相似文献
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片形吸虫成虫虫体抗原制备及ELISA实验研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:研究人体片形吸虫病ELISA检测试剂盒的检测效果。方法:采用云南大理本地采集的牛体片形吸虫成虫制备可溶性粗抗原,包被反应板,采用人体片形吸虫病ELISA法(FAWA-ELISA)进行研究,分别检测26份片形吸虫患者血清、102份其他寄生虫病患者血清和25份健康人血清,评价检测试剂盒的检测效果。结果:检测试剂盒的敏感性为100.0%、特异性分别为95.28%(95%CI:98.9%~91.2%),约登指数分别为0.95。结论:FAWA-ELISA试剂盒检测效果较好,且成本相对较低,可适宜用于云南片形吸虫病流行区流行病学筛查,减轻病原学检测的工作量。 相似文献
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针对石油加工过程中常减压蒸馏塔顶的HCl腐蚀，采用失重法研究了新型中和缓蚀剂SF-121B、BZH-1和SH-A在HCl-H2O环境下对碳钢的缓蚀效果，并与7019和氨水复合使用的效果进行比较。结果表明：随着HCl浓度和温度的增加，碳钢腐蚀率增加，SF-121B、BZH-1和SH-A的缓蚀效果优于7019与氨水复配使用的效果，SF-121B与氨水复配在保持较好缓蚀效果的同时能降低操作费用。 相似文献
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21世纪的我国农业将面临着严峻的形势,只有大力实行农业可持续发展战略,正确选择农业可持续发展模式,才是中国农业实现现代化的唯一出路。 相似文献