PLA-PAMAM纳米粒作为非病毒基因载体的研究

采用乳化-分散-蒸发方法制备了表面含有聚酰胺-胺树状大分子的聚乳酸纳米粒,并将DNA与该阳离子纳米粒复合,研究了复合物的理化性质、细胞毒性和转染效率.结果表明在氮/磷比为2以上时,DNA与阳离子纳米粒形成了稳定且带正电的复合物,能保护DNA抵御核酸酶的降解,且复合物的细胞毒性较小.在无血清介质中,阳离子纳米粒可以将DNA有效地转移到细胞内得到表达,转染效率与未纳米化的PAMAM相比有明显的提高,且转染的最佳氮/磷比为2～5.     

一种基于有限运行时间自动机的基因网络模型

阐述了最近几年来国外基因网络系统逻辑行为的研究新进展——基于有限状态自动机模型的方法,针对该方法的局限性,提出了一种基于有限运行时间自动机的基因网络模型,以描述网络行为的时间约束.     

中国白兔IL-6基因的分子克隆及其表达研究

运用RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定.结果中国白兔IL-6基因全长726 bp,编码242个氨基酸,其中前26个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IL-6基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IL-6氨基酸序列中,在108-110位存在1个潜在的N-联糖基化位点,同时存在9个Cys残基.将pTIL-6双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-6,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为29.5kDa的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的16.2%.     

抗生素生物合成基因簇克隆方法

抗生素生物合成基因簇的克隆是药物创新和产量提高的必要前提,PCR技术、基因文库的构建及标记探针的筛选、异源宿主的表达和染色体步查等方法, 常用于抗生素生物合成基因簇的克隆.载体系统及生物信息学的发展对基因克隆产生了重大影响.     

基于知识编码的剪切位点预测

在现有生物统计中，对脱氧核糖核酸中碱基的编码表达主要限于腺嘌呤，鸟嘌呤，胞嘧啶和胸腺嘧啶4种．但这种编码方式的变量太少，同时没有考虑碱基在脱氧核糖核酸中的位置信息，在剪切位点预测中，准确率不会超过90％．据此采用基于知识的编码方式，即真剪切位点与假剪切位点的统计差表，结合支持向量机方法，大大提高了剪切位点识别的准确率，并进一步采用碱基的统计特征的多变量编码方式使真给体位点和假给体位点的预报率分别达到96．4％和93．0％，真受体位点和假受体位点的预报率分别达到94．4％和93．0％．     

硒化麒麟菜多糖对宫颈癌细胞株生长和淍亡的影响

目的：探讨硒化麒麟菜多糖在体外对宫颈癌Hela细胞株生长和凋亡的作用及机制。方法：以宫颈癌Hela细胞株为研究对象，用MTT法检测硒化麒麟菜多糖对肿瘤细胞增殖的影响，流式细胞仪检测细胞周期、细胞调亡以及凋亡基因Fas的表达情况，以顺铂为对照组，比较硒化麒麟菜多糖与顺铂的疗效。结果：硒化麒麟菜多糖可阻滞宫颈癌Hela细胞的生长使之停留在S和G2-M期，从而抑制了肿瘤细胞的增殖，同时通过促进Fas表达，诱导Hela细胞凋亡。结论：硒化麒麟菜多糖通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制，对宫颈癌细胞的增殖有一定的抑制作用。     

Gene flow from transgenic oilseed rape (Brassica napus L.) to cruciferous weeds under mentor pollen inducement

The alien gene flow between genetically modified glyphosate-resistant rapeseed variety Q3 (Brassica napus L.) and four cruciferous weeds was studied under mentor pollen inducement. The results showed that when Thlaspi arvense L., Capsella bursa-pastoris (L.) Medic, Cardamine hirsute L. and Rorippa palustris (L.) Besser were pollinated with mentor pollen, the mixed Q3 and the weed, pollen grains aggregated largely and germinated quickly, and the numbers of pollen tubes penetrating into the style and the ovary were greatly increased as compared with corresponding self-pollination groups. Twenty four to forty eight hours after pollination, several pollen tubes were observed to penetrate into the ovule via micropyle in each mentor combination. However, when the mentor progenies were analyzed by PCR, all of them showed negative for the Q3 herbicide-resistant gene. Collectively, these results indicated that crossing between T. arvense, C. bursa-pastoris, C. hirsuta, R. palustris (as female) and Q3 (as male) was highly incompatible and the herbicide-resistant gene could not flow from Q3 to these four weeds.     

假单孢菌PKE117木素过氧化物酶的酶学性质及基因克隆

对纯化得到的假单孢菌PKE117的胞外木素过氧化物酶的酶学性质进行了初步研究,发现其最适pH为5.0,最适温度为30℃,以藜芦醇为底物,在25℃,pH3.0的琥珀酸钠缓冲液中与底物反应时的Km值为(0.277±0.0008)mmol/L,vmax为(0.049±0.001)mmol.mg-1protein.min-1。根据LiP已知保守序列设计引物,提取质粒,扩增得到一条199bp的DNA片段lip1和一条563bp的DNA片段lip2,序列比对结果显示与已报道的白腐真菌过氧化物酶基因的同源性不是很高。核苷酸翻译后的氨基酸序列比对结果发现,LiP1与Pycnoporus sanguineus的漆酶的同源性达到100%,与Mycobacteriumbovis的木素过氧化物酶的同源性达到80%;LiP2与Arabidopsis thaliana的过氧化物酶同源性达到100%,与Hordeum vulgare的过氧化物酶1同源性为75%。