三疣梭子蟹第一次卵巢发育过程中卵母细胞和卵泡细胞超微结构的观察

通过透射电镜技术研究了东海三疣梭子蟹初产卵巢发育过程中卵巢的超微结构的变化.1)三疣梭子蟹初产卵巢发育过程中卵黄发生期可分为初期和后期;2)卵黄发生初期在7~9月间,此阶段卵黄生成以内源性合成为主,卵母细胞核物质外输明显,胞浆内大量的粗面内质网正在进行卵黄物质的内源性合成;3)卵黄发生后期在10月至第二年4月间,卵泡细胞与卵母细胞的结合阶段,卵母细胞借助卵泡细胞进行外源性卵黄物质合成,卵母细胞与卵泡细胞间的界线逐渐消失,部分卵泡细胞由于胞质大量输出仅见胞核,此时内源性卵黄合成仍然存在;4)排卵后,由于大量成熟卵细胞的排出,卵巢组织存在大量的基膜,残留成熟卵母细胞中的卵黄物质已经解体,卵黄颗粒自中央向边缘逐渐松散.     

牛体外受精技术研究的现状与展望

系统综述了牛体外受精技术研究的现状及存在的问题．并对今后的研究方向和前景提出了展望。牛卵母细胞可在不含血清的成熟培养液中获得受精及胚胎发育能力，促卵泡素、促黄体素及上皮细胞生长因子均对这一过程具促进作用。肝素是迄今最为有效的精子获能处理方法，但在受精过程中对精子获能起决定作用的是卵丘细胞和卵母细胞本身。提高受精质量可明显提高受精卵的胚胎发育能力。体外受精卵可通过改善培养条件或与体细胞进行复合培养发育到囊胚阶段．但后者更为稳定可靠。目前，牛卵母细胞的体外受精分裂率可达８０％，囊胚发育率达４０％左右．两枚鲜胚的移植妊娠率可达５０％～６０％．而两枚冻胚的移植妊娠率仅３０％～５０％。因此，尚需进一步提高体外受精胚胎的活力和改进胚胎的冷冻保存技术。     

受精滴中精子不同平衡时间对牛卵母细胞体外受精的影响

为寻找精子在受精滴中的最佳平衡时间, 以加入精子时间为０ ｈ （对照组）, 分别在０ｈ, ０．５ ｈ, １ ｈ, ２ ｈ, ４ ｈ 随机加入等数卵母细胞到各受精滴, 结果显示： ０ ｈ, ０．５ ｈ 组卵裂率较高, 分别为８７．７％ 、８４．７％ , 与其他组相比差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）; ０．５ｈ 组的囊胚率最高,为６７．５％ ,与对照组的５７．７％ 比较差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）。结果表明,受精滴中精子经过０．５ｈ 平衡后, 弱精及死精粘聚沉淀, 余下活力强的健壮精子, 此时加入牛卵母细胞受精, 可获得较高卵裂率及囊胚率     

肝素及血小板激活因子对牛卵母细胞体外受精的影响

在受精液中添加不同浓度的肝素（２，６，１８，５４，１６２，４８６ｍｇ／Ｌ）均能明显提高牛卵母细胞的受精分裂率（分别为８３．６，８４．９，８５．７，８９．２，８４．５和９０．２％，比对照组７３．６％，Ｐ〈０．０５）和卵裂指数（授精后４４－４５ｈ大于２－细胞的卵裂数占卵裂总数的百分率，分别为８５．７，８５．０，８９．９，９．８７，８７．４和８５．５％，对对照组５７．６％，Ｐ〈０．０１。然而，卵母细胞的     

猪卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰场收集卵巢，用注射器从卵泡中吸出卵丘－卵母细胞复合体，对猪卵母细胞体外成熟的条件进行研究，根据卵母细胞体外成熟时的核成熟率、胞质成熟及体外受精时精子的穿卵速度，合适的体外成熟培养时间为４２～４５ｈ．卵母细胞周围卵丘细胞的多少及其排列紧密状态与卵母细胞的体外成熟率密切相关。卵泡大小与卵母细胞的体外成熟率有关，大卵泡卵优于小卵泡卵。ＰＭＳＧ促进猪卵母细胞体外成熟。     

卵母细胞在离子通道研究中的应用

由于非洲爪蟾卵母细胞体积较大，故其蛋白质和RNA合成活性很高，、同时，卵母细胞本身仅有很少几种内源性通道和受体，因此可以忠实、高效地表达多种类型的外源性通道和受体、非洲爪蟾卵母细胞现已成为一种研究外源性离子通道基因的工具，在分析多亚基通道翻译后的加工和组装、检测突变通道特性、比较不同组织来源的通道特性、检测第二信使系统对通道功能的调制、分析和鉴定编码通道蛋白的克隆基因等方面有暑广泛的应用。     

哺乳动物卵母细胞体外成熟培养的影响因素

随着哺乳动物体外受精、细胞核移植和外源基因导入等高新技术的不断深入，人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加，卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。通过卵巢卵母细胞体外成熟获取大量成熟卵母细胞，然后进行体外受精、体外生产胚胎愈来愈引起人们的注视。对影响卵母细胞体外成熟的因素进行了综述。     

中华锯齿米虾卵母细胞卵黄发生的超微结构

利用透射电镜对中华锯齿米虾卵母细胞的卵黄发生过程进行超微结构的研究.结果表明:中华锯齿米虾卵黄发生过程是双源性的.在卵黄发生过程中,卵母细胞中的线粒体、内质网、溶酶体和核糖体等多种细胞器均参与了其内源性合成,其中线粒体最早参与形成卵黄颗粒.在卵黄发生的中后期,内质网成为内源性合成卵黄蛋白最主要的细胞器,并最终演化成颗粒较大且有膜包被的卵黄球;溶酶体也在此时期发挥其特有的吞噬功能,通过融合分解线粒体、内质网等胞质细胞器,最终形成一种十分致密的卵黄球.外源性卵黄则主要通过卵质膜形成的微绒毛和微吞饮小泡从卵周隙及滤泡细胞中摄取外源物质而形成.     

水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育的比较

目的对MII期水牛卵母细胞进行人工诱导激活,可以间接判断体外成熟卵母细胞质量的优劣,并且,卵母细胞的充分激活也是提高核移植效率的关键因素之一。比较了水牛卵母细胞体外成熟时间对孤雌激活胚发育能力的影响以及不同化学激活方法对水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响,并在相同条件下,对孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力进行了比较。结果表明,水牛卵母细胞体外成熟27 h或30 h的囊胚发育率(19.0%,17.7%)明显高于体外成熟21 h或24 h的囊胚发育率(12.3%,13.8%);Ion联合6_DMAP激活水牛卵母细胞的效果优于其他几组激活方法;在相同培养条件下,孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力存在着差异,其中卵裂率差异不显著,但孤雌激活胚的囊胚发育率显著高于体外受精胚(21.7%,13.0%)。     

中华大蟾蜍“高温卵”cDNA文库的构建

以长足但不具成熟潜能的中华大蟾蜍“高温卵”为材料,提取总RNA和mRNA,以Not I/Oligo dT18为引物,经反转录合成第1链cDNA;再以DNAPolymerase I合成第2链.所得到的cDNA加装衔接头后定向克隆到λ-ExCell载体上,构建cDNA文库.结果显示,平均每个“高温卵”中总RNA的含量为5.66μg,poly A+RNA含量约为63.96 ng,构建的cDNA文库的丰度为8.93×10-5pfu/μg cDNA.随机挑选的2个重组噬菌体经NotI、EcoR I双酶切后,均能酶切出外源片段,说明我们已成功地构建了中华大蟾蜍"高温卵"的cDNA文库.