反义ACC合成酶基因导入番茄的研究

 采用农杆菌介导法将携带有反义ACC合成酶基因和NPT II的表达载体pKAC导入番茄栽培品种美国大红五星102、美国大红108、美国大红王、大红II号等中.经过卡那霉素筛选后,获得了一批抗性苗,其中有3株PCR检测为阳性.实验证明,不同激素配比对番茄子叶不定芽的诱导有一定影响,适宜的农杆菌侵染时间和浓度是番茄基因转化成功与否的关键,延迟选择有利于番茄基因转化细胞的生长.     

增殖细胞核抗原反义核酸联合5-FU抑制肝癌细胞生长

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义寡核苷酸(ASODN)联合5-FU对离体肝癌细胞及小鼠肝癌生长的抑制作用。方法:用5-FU、5-FU联合PCNA ASODN、5-FU联合聚乙烯亚胺(PEI)介导的PCNA ASODN(PEI-ASODN)分别转染人肝癌SMMC-7721细胞,改良MTT法(WST法)分析细胞生长增殖抑制效果;建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,腋下移植瘤模型小鼠,隔日给药共5次,第13天杀小鼠,观察小鼠瘤重、瘤体积改变;腹水瘤模型小鼠,连续腹腔注射给药7次,记录小鼠平均存活天数,绘制小鼠存活曲线。结果:5-FU联合PEI-ASODN时,5-FU对肝癌细胞的IC50降低为0.165μg/mL,肝癌细胞对5-FU敏感性提高了49.7倍;肝癌腋下移植瘤小鼠各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以5-FU联合PCNA反义核酸组最高;对于腹水瘤小鼠,以5-FU和PCNA反义核酸联合治疗组平均生存时间最长。结论:5-FU联合PEI-ASODN能有效抑制肝癌细胞增殖,抑制小鼠肝癌的生长,延长小鼠存活时间。     

一个新的靶点的反义bcl—2寡核苷酸诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对HL-60细胞bcl-2蛋白表达和凋亡的作用。方法：应用台盼蓝拒染法和流式细胞仪检测HL-60细胞的活性和bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的情况。结果：10μmol/L和20μmol/L的反义寡核苷酸能抑制HL-60细胞bcl-2蛋白表达和诱导细胞调亡,并且针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强。结论：针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸能抑制HL-60细胞bcl-2蛋白表达和诱导细胞调亡。     

番茄ACC合成酶基因的反义RNA—核酶嵌合基因植物表达载体的构建及对番茄的转

将克隆的番茄ACC合成酶基因的反义RNA－核酶联合的DNA序列用Hind Ⅲt KpnI切割后重组于植物表达载体pGA643中,用三亲融全导入农杆菌LBA4404中,采用叶盘法转化茄子叶,诱导出再生小植株,获得了卡那霉素的抗性植株。提取植物总DNA,用pGA643作探针,通过斑点杂交,已筛选出整合有外源基因的工程植株。为进一步研究该嵌合基因对ACC合成酶基因表达的影响及获得商品化的转基因番茄奠定了基础。     

cdk2反义RNA对乳腺癌细胞增殖及致瘤性的抑制作用

为了研究cdk2对乳腺癌细胞生长及cyclinA,cyclinB1和ckdl（cdc2)mRNA表达水平的影响,利用直接表达载体p XJ41-neo构建了表达cdk2反义RNA的重组载体,并用此载体转染了人乳腺癌细胞系Bcap37,获得了ckd2受到抑制的细胞模型Bcap37-CDK2AS,然后将Bcap37-CDK2AS细胞的生长能力及cyclinA,cyclinB1和cdk1 mRNA折水平与转入空载体的对照细胞进行了对比分析,结果显示,cdk2表达受到抑制时,细胞生长速率下降,根据测定出的细胞生长曲线,细胞培养至第7天时,细胞生长抑制率为64％,在流式细胞术的分析结果中,G1期细胞中的百分比从39％增加到47％,S期细胞由51％下降到39％,裸鼠接种的实验表明,Bcap37－CDK2AS的致瘤性明显减弱,在对cyclinA,cyclinB1和cdk1mRNA折分析中发现,Bcap37－CDK2AS中这3种基因的mRAN水平均有不同程度的下降,依据这些结果可以推测,ckd2反义RNA可使乳腺癌细胞生长及致瘤性受到抑制,并且cdk2表达的抑制将cyclinA,cyclinB和cdk14的表达水平。     

聚乙烯亚胺-整合素配体复合物介导bcl-2反义核酸对结肠癌细胞的作用

目的:观察聚乙烯亚胺(PEI) -整合素蛋白的配体(Arg -Gly -Asp ,RGD)介导的bcl - 2反义核酸(antisenseoligodeoxynucleotide ,ASODN)对结肠癌细胞caco - 2的作用效果。方法:将阳离子复合物jetPEI-RGD与bcl- 2反义核酸混合形成ASODN -PEI-RGD三聚体复合物,转染caco - 2细胞。用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察ASODN -PEI-RGD对caco - 2细胞的生长抑制作用,用流式细胞仪检测细胞的亚二倍体百分率,Heochst332 5 8染色观察细胞凋亡。结果:与ASODN对照组和jetPEI-RGD对照组相比,ASODN -PEI -RGD能够明显抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡(P<0 0 5 ) ,呈剂量和时间-效应关系。ASODN -PEI-RGD作用4 8h ,荧光染色可见大量的caco - 2细胞核固缩、核碎裂。结论:jetPEI-RGD介导的bcl- 2反义核酸能抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

反义蜡质基因质粒pWXAB的构建

蜡质蛋白也叫结合颗粒淀粉合成酶 ( GBSS) ,是直链淀粉合成的关键酶 .谷类作物包括小麦其胚乳直链淀粉含量主要由蜡质蛋白水平决定 .研究表明 ,小麦胚乳直链淀粉含量低 ,此小麦面粉生产出的面条韧性大、不粘、适口性好 .因此构建含有反义蜡质基因的质粒 ,通过转基因的方法导入小麦 ,抑制蜡质基因的表达 ,对于提高面条品质和改良淀粉性质 ,获得新品种 ,具有重要价值 .笔者以 Shimad博士惠赠的质粒p WXA2 3和本实验室已有的质粒 p5 1 0为材料 ,构建了一个含反义蜡质基因同时含有 GUS报告基因及抗除草剂基因的新质粒 [1,2 ] .用此质粒转…     

bcl-2基因反义核酸对HL-60和K562白血病细胞生存的影响

目的：探索ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存的影响。方法：主要应用细胞培养和细胞克隆的方法,检测了ｂｃｌ－２基因反义核酸对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞系生存的影响。结果：ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度在２～８μｍｏｌ／Ｌ和６～１２μｍｏｌ／Ｌ分别对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生存有明显的抑制效应,呈剂量－效应关系,二者起效应时间均为第３ｄ;ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度为４μｍｏｌ／Ｌ时,对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞集落形成都有明显抑制效应。结论：ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存有明显的影响。     

Effects of CDK4 antisense RNA on Human breast cancer cell proliferation and expression of cyclinDl, cyclinE and CDK2

The role of CDK4 in human breast cancer cell proliferation and expression of cyclinD1, cy-clinE and CDK2 has been investigated using inhibition of CDK4 expression by antisense RNA. When CDK4 expression was inhibited, the rate of cell proliferation and tumorigenecity decreased apparently. This indicates that CDK4 plays an important role in formation and development of breast tumor. The results of Northern blot analysis showed that the levels of cyclinDl and CDK2 mRNAs changed slightly whereas the level of cyclinE mRNA decreased obviously. It is suggested that the expression of CDK4 is necessary for induction of cyclinE expression. Thus, inhibition of CDK4 expression affects not only the role of CDK4 itself but also the role of other genes.