Effects of simulated microgravity on the alkaline phosphatase activity and intracellular calcium concentration of cultured chondrocytes

The effects of simulated microgravity on matrix mineralization of chondrocytes were examined using cultured chicken embryonic chondrocytes as the model. In four days, there was a time course decrease in alkaline phosphatase activity of chondrocytes, a marker of matrix mineralization. Meanwhile, in two days, there was a significant drop in intracellular calcium concentration in contrast to the control. These results indicate that simulated microgravity can suppress matrix calcification of cultured chondrocytes, and intracellular calcium may be involved in the regulation of matrix calcification as the second messenger. Yang Shuzhang made the same contribution to this work as the first author     

黑曲霉木聚糖酶性质的研究

利用分光光度计对黑曲霉木聚糖酶的性质进行了研究,结果表明在pH5．0—7．0范围内保持60％以上的酶活,pH值稳定范围较广;木聚糖酶耐热性较强,在60℃仍有一定的活性;K^ 和Cu2^ 对木聚糖酶活有抑制作用,而CO3^ 、Ca2^ 、Ba2^ 、Zn2^ 、Fe3^ 、Mg2^ 和Cr3^ 对酶活有激活作用,Al3^ 对木聚糖酶活性基本无影响。     

基于盐碱条件下产腈水合酶菌株的筛选与高酶活表达工艺的研究

利用含有一定比例丙烯腈和丙烯酰胺的特制培养基从新疆盐碱环境下筛选和分离产睛水合酶微生物,获得了具有在较高盐浓度和pH偏碱性条件下生长良好、菌苔为光滑、橙红、湿润的菌株。研究其细胞培养特性。通过对菌株的极端定向培育和产酶过程的研究,采用葡萄糖．诱导剂耦合补加工艺进行催化剂的制备,同时加入各种诱导剂进行产酶诱导。结果表明,pH=7．2,葡萄糖浓度维持在3-5g／L,发酵培养基中加入0．3％NH4a,0．6％丙烯腈,并在培养48h后加入0．3％丙烯腈,产生的脯水合酶酶活最高,可达8208．3U／mL。     

基于金纳米线构建电化学传感器间接检测碱性磷酸酶活性

在临床实践中，碱性磷酸酶（ALP）是最常检测的酶之一，已被广泛用作肝病、骨病、乳腺癌、前列腺癌以及糖尿病等多种疾病的重要检测指标.通过自组装方法在氧化铟锡（ITO）导电玻璃上制备金纳米线（AuNWs），利用4-巯基苯甲酸（4-MBA）修饰AuNWs，对其进行改性，与铜离子（Cu²⁺）螯合形成Cu²⁺-AuNWs/ITO电极.在ALP活性检测中，电解液中的焦磷酸根阴离子（PPi）与电极表面Cu²⁺结合，湮灭了Cu²⁺的电化学信号.ALP的加入使底物PPi水解并释放出Cu²⁺，电化学信号增加.构建的Cu²⁺-AuNWs/ITO电极对ALP活性检测范围为60~180 U·L^-1，且抗干扰性能良好.     

二硫键影响GH11木聚糖酶稳定性研究进展

低聚木糖具有改善肠道微生态的益生作用,在降血糖、降血压、防止便秘等方面表现出良好的保健效果。近年来,利用生物酶技术制备功能性低聚木糖的相关研究受到广泛关注。糖苷水解酶(glycoside hydrolase, GH)11家族木聚糖酶具有底物特异性强和催化效率高的特点,在低聚木糖生产应用中表现出显著优势；然而,大多数天然GH11木聚糖酶存在稳定性较差的问题,无法满足工业生产中高温、酸、碱等极端条件的要求。利用酶工程技术对天然木聚糖酶进行分子改造,以适应高温、酸、碱等生产条件,使底物特异性强、催化效率高的酶相对稳定地发挥作用,对于制备功能性低聚木糖的工业生产具有重要的实际意义。根据GH11木聚糖酶的分子结构及其特点,通过比较其分子内相互作用力对酶热稳定性的影响,发现二硫键在改善酶的稳定性方面具有十分显著的优势。基于对GH11木聚糖酶结构的分析,总结了引入二硫键的常规策略,比较了酶在不同区域引入不同数量二硫键对GH11木聚糖酶稳定性的改善效果,对引入二硫键后酶稳定性显著变化的几个区域进行定位,并指出多个二硫键对改善酶稳定性的作用方式,希望为提高酶稳定性的酶分子改造研究提供基础数据,为拓宽GH11木聚糖酶工业应用范围提供科学参考。