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221.
烟草腺毛全长cDNA文库的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
冻刷法收集烟草品种K326腺毛组织,Trizol法提取总RNA,采用SMART技术构建了烟草腺毛的全长cDNA文库.经鉴定表明,文库滴度为1.01×106pfu/mL,重组率为99.5%.随机选择24个阳性克隆进行插入片段测序,结果显示,插入片段长度在800~1 000 bp之间,将测得的序列进行Unigene归并和序列全长分析,得到了23条Unigene,21条序列有相关同源信息,其中14条为全长,完整性比率达到66.7%.结果表明,文库质量较好,可用于下一步基因克隆及基因表达谱的研究. 相似文献
222.
为了鉴定杜洛克猪相对于梅山猪在大卵泡中高表达的基因,本研究应用抑制性消减杂交技术成功构建了以梅山大卵泡c DNA为driver,杜洛克大卵泡c DNA为tester的消减c DNA文库。结果显示:以G3PDH和β-actin为指标检测文库的消减效率为25,从该文库中获取了350个有效的阳性克隆,PCR检测插入片段主要分布在150-750 bp。克隆测序得到74个有效的EST序列,GO分析表明主要与细胞信号、细胞结构、代谢、细胞分化、基因/蛋白质合成、细胞组织防护等功能相关。利用q PCR技术验证了ELTD1、Grb14、SNRPE、CSDE1、ALDH18A1、e IF4E、BMPR-IB等基因在梅山和杜洛克大卵泡中的表达模式。结果发现在两猪种的大卵泡间存在显著性差异。本研究有助于揭示影响猪卵泡发育和生殖数量控制的分子基础。 相似文献
223.
采用异硫氰酸胍酚氯仿法分离铁胁迫玉米根总RNA,然后采用寡聚dT 纤维素层析柱法纯化Poly(A) + RNA.用含有XhoI位点的linkerprimer 锚定合成cDNA 第一条链后,采用替代法合成第二条链,接着连接上EcoRIAdapter 以便定向重组到载体上.cDNA 经过XhoI消化和分级分离后,带有XhoI和EcoRI粘性末端的cDNA 定向重组到λZAP表达载体的XhoI和EcoRI位点上.经体外包装,重组的噬菌体转导宿主菌XL1Blue MRF,最终获得滴度为4-5 ×105 pfu/ug 的λZAP 表达cDNA 文库.通过差异筛选法和质膜双向电泳验证了缺铁和加铁条件下cDNA 和质膜蛋白的差异 相似文献