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长毛对虾碱性磷酸酶功能基团的研究 总被引:4,自引:1,他引:4
用对-氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基,酶活力不受影响,说明该酶不是“巯基酶”.用N溴代琥珀酰亚胺修饰酶后,活力完全丧失,修饰后的酶在275nm处的紫外吸收峰完全消失,340nm处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭,说明色氨酸残基是酶活性必需基因之一.用甲醛、醋酸酐修饰氨基,溴代乙酸修饰咪唑基也可以使酶活力完全丧失,说明赖氨酸残基及组氨酸残基也是酶活性功能基因.用乙酰丙酮修饰精氨酸残基,酶活力下降了50%,精氨酸残基可能与维系酶分子构象有关. 相似文献
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从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶,用快速蛋白液相层析法(FPLC)的Su-perose12柱和MonoS柱对其进一步纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和FPLC的Superose12柱鉴定为单一纯的酶制剂,它的分子量为52000,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体。酶的提纯倍数为612.52。 相似文献
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文昌鱼酸性磷酸酯酶金属辅基初探 总被引:1,自引:5,他引:1
从厦门文昌鱼Branchiostoma belcheri(Gray)分离提纯酸性磷酯酶(EC3.1,3.2),进一步经Sephadex G-75和羧甲基纤维素(CM-52)柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯酶制剂,比活力为351μm/min mg。酶液吸收峰在280nm,320nm,500nm,表现出含铁离子蛋白的特征吸收峰,用原子吸收法和化学法(邻啡绕啉比色法)分析,证明了文昌鱼酸性磷酸酯酶(ACPase)含有铁离子;还原剂Na_2S_2O_4处理浓度提高,酶活力及荧光强度下降,280nm和500nm峰下降,320nm峰消失,以Na_2S_2O_4测定ACPase失活和变性速度常激,结果表明,Na_2S_2O_4的失活常数大于变性带数。 相似文献
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中华猕猴桃蛋白酶催化功能基团的研究 总被引:2,自引:2,他引:0
从野生中华猕猴桃分离提纯得SDS电泳单一纯酶制剂,酶蛋白的总巯基数为7,其中游离巯基数为1.3×10~(-5)MpCMB使酶活力丧失100%,酶修饰失活呈一级反应,表明酶分子的唯一游离巯基为该酶催化活性的必需功能基团.酶在2×10~(-4)M PMSF,活力仍不受影响,提示Ser残基与酶的催化功能无关.以Na_2S_4O_6保护游离巯基,用NBS修饰Trp残基,并辅以紫外光谱和萤光光谱分析.结果表明Trp残基为酶催化功能所必需.初步的CDC化学修饰结果亦表明,羧基似与酶催化活性有关. 相似文献
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长毛对虾磷酸酯酶的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
从长毛对虾(Penaeuspenicillatus)头胸部、肌肉分别提取纯化碱性磷酸酶ALPase(EC.3.1.3.1)和酸性磷酸酶ACPase(EC.3.1.3.2),经快速蛋白液相色谱(FPLC)检测AL-Pase,聚丙烯酰胺凝胶电泳以及等电聚焦电泳检测ACPase,得到单一纯酶.ALPase紫外特征吸收峰在278nm处,荧光激发峰在282nm处,发射光谱特征峰在340nm处.ACPase在280nm处有紫外吸收特征峰,荧光激发峰在284nm处,发射峰在347nm处.分别测定了酶的相对分子质量、亚基数、氨基酸组成、等电点、酶水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)的最适温度,最适pH,米氏常数Km值,金属离子Mg2+、Cu2+、Hg2+,有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇,化学修饰剂BrAe、NBS、pCMB等以及蛋白质变性剂胍、脲等对酶活力的影响.比较研究健康虾和病虾ACPase酶活力及酶动力学特征常数的变化(健康虾酶Km=0.08mmol/L,病虾酶Km=0.143mmol/L).病虾酶Km值明显增大,表现对底物亲和力下降.活化能明显增大(健康虾酶41.03kJ 相似文献
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文昌鱼酸性磷酸酯酶的化学修饰 总被引:2,自引:4,他引:2
用DEAE-纤维素(DE-22)并改进酶的提纯方法,聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白区带的酶制剂比活力为359μM/mg(E)/min(Npp为底物)·用凝胶过滤法测得该酶分子量为58600,氨基酸组成有20种,共467个氨基酸残基。10~(-4)M pCMB使酶活力丧失98%;1×10~(-3)M PMSP该酶活力丧失96%,2×10~(-4)M NBS以及1×10~(-2)M BrAc酶活力均丧失90%·酶修饰失活呈一级反应,修饰过的酶紫外280nm吸收峰消失·初步判断文昌鱼AcPase分子上的Cys,Trp,His,Ser等氨基酸残基可能是酶的活力必需基团。 相似文献
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8.
在分析细菌化学趋向性基础上,引入逾渗理论,提出描述细菌在多孔介质中分布的微观仿真模拟方法.仿真计算结果和实验测定结果对比显示,该方法可以较好地模拟再现多孔介质中的细菌菌浓分布情况.最后对该方法最有潜力的应用提出了建议. 相似文献
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本文对僧帽牡蛎(Ostrea cucullata)碱性磷酸酶的酶学特性进行了若干探索. 实验结果表明,碱性磷酸酶的最适pH与所用的废物有关,以磷酸苯二钠为底物时,酶的最适pH为10.3,而以β-甘油磷酸钠为底物时,则降为9.5.所得结果证实,pH对酶的影响有可逆和不可逆之分,在pH8.5—10.0范围内,pH对酶的影响是可逆的,而当pH大于10.5时,则为不可逆, 实验求得,僧帽牡蛎碱性磷酸酶对磷酸苯二钠作用的Km值为1.9×10~(-4)M,在10-50℃时.酶对磷酸苯二钠反应的“活化能”为9550卡/克分子。酶在30℃以下活性稳定,最适温度区在39℃附近;50℃保温一段时间,酶活力大大降低. 僧帽特蛎的碱性磷酸酶与从其它材料获得的碱性磷酸酶一样,可被镁离子激活:其最适激活浓度为8.33mM,但被汞离子,锌离子,氰化物和半胱氨酸强烈抑制.氟化物和钼酸盐对酶的影响不明显. 相似文献
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文昌鱼碱性磷酸酶功能基团的修饰与酶活力变化关系 总被引:3,自引:0,他引:3
用DEAE-Cellulose(DE-11)改进了酶的分离提纯方法,将酶提纯163倍,初步获得电泳均一的酶制剂。酶经光氧化后,活力迅速丧失,其失活过程按一级反应进行。酶经N-溴代琥珀酰亚胺作用后活力逐渐丧失。溴代乙酸在较高浓度下亦能抑制酶活力。酶经酰化后活力亦受抑制。实验结果初步表明:咪唑基吲哚基及氨基都是酶活力所必需的基因。 相似文献