MTT法测定人表皮癌细胞的抗药性

在用ＭＴＴ测定细胞存活性率以研究人表皮细胞ＫＢ－３－１及其抗阿霉素细胞株ＫＢ－Ａ－１对化疗药物阿霉素,长春花碱和秋水仙碱的多药抗性时,发现培养基中血清浓度的变化对ＭＴＴ法测定结果有影响,吸光值在血清浓度为ｗ＝０．０２时最高,ｗ＝０．３０时最低,ｗ＝０．０５－０．２０之间波动不大。而不加血清使甲 溶解困难而产生误差。培养基中的血清（常为ｗ＝０．１０）不影响ＭＴＴ法的结果,在完全培养基中用ＭＴＴ法测定     

葡萄糖酸钙对肌苷发酵的影响

在肌苷的摇瓶发酵过程中,10g／L的葡萄糖酸钙适于肌苷的合成和菌体生长。初始培养基中加入10g／L的葡萄糖酸钙,能够诱导葡萄糖酸激酶的生成,大幅提高其比活,增大磷酸戊糖（HMP）途径的通量。肌苷的产率由10.76g／L提高到18.36g／L。     

发酵过程多水平问题及其生物反应器装置技术研究

回顾了发酵过程优化与放大所依据的基本思想和方法,认为采用以动力学为基础的最佳工艺控制点为依据的静态操作方法,实质上只是化学工程宏观动力学概念在发酵工程上的延伸,往往忽视细胞代谢流的存在。以细胞代谢流的分析与控制为核心的生物反应工程学的观点,通过实验研究,提出了基于参数相关的发酵过程多水平问题研究的优化技术和发酵过程多参数调整的放大技术。随着过程传感技术和计算机技术的发展,设计了一种定型为FUS50L（A）的新概念生物反应器。这种新型生物反应器是以物料流检测为手段,过程优化与放大为目标,成功地应用在青霉素、红霉素、金霉素、肌苷、鸟苷发酵和Pichia酵母表达系统的基因工程人血清白蛋白（rhSA）、疟疾疫苗等高密度高表达培养,大幅度提高发酵水平,并直接放大到几百升,甚至100 m3以上生产规模发酵罐。     

庆大霉素分泌过程的初步研究

应用恒温系统及缓冲液体系,考察了温度及pH值分泌过程的影响,然后在此基础上又讨论了添加葡萄糖、金属离子Fe^2 、K^ 和Mn^2 以及超声波和微波处理的效果,实验发现,pH＝7．4,温度34℃,以及添加5g／LKCl或50mg／LMnSO4都能刺激庆大霉素的分泌。     

CYP725A4分子序列分析与结构建模

CYP725A4在大肠杆菌等原核宿主中难以实现高效功能表达,是制约紫杉醇异源合成的瓶颈之一.文中利用生物信息学方法对该酶分子的序列进行疏水性和跨膜区分析,构建了其分子进化树,在此基础上用同源建模方法构建了其天然态以及切除N端跨膜区后的三级结构,并对CYP725A4实现功能表达所必需的辅助还原酶也进行了天然态和切除N端跨...     

阿维菌素发酵过程参数相关特性研究及过程优化

微生物发酵是一个复杂的生物过程,通过对阿维菌素发酵过程中反映菌体代谢的在线参数,如OUR、CER、RQ、DO、pH以及离线参数的相关性分析,根据分析结果对发酵过程工艺进行优化,提出在发酵后期根据RQ确定碳源补加时机、根据过程pH确定碳源补加速率,使阿维菌素的发酵单位从国内平均水平3.8 g/L提高到了5.05 g/L。     

基因工程枯草杆菌生产中性蛋白酶的研究

使用一株基因工程枯草杆菌ＤＢ４０３（ｐＷＬ２６７）生产中性蛋白酶，其宿主ＤＢ４０３失去了野生菌株９９％的胞外蛋白酶生产能力，质粒ｐＷＬ２６７则带有野生菌株中性蛋白酶的全部结构基因。在分批培养中，中性蛋白酶的活性为２６２ｍｇ／ｍｉｎ·Ｌ左右，通过培养基改进达到３．２８６ｇ／ｍｉｎ·Ｌ。连续培养表明，中性蛋白酶的比生产速率在比生长速率为０．２ｈ￣（－１）时最大。在控制补加葡萄糖和其它培养基成分的补料分批培养中，中性蛋白酶活性达１７．６７０ｇ／ｍｍ·Ｌ。     

基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵表达重组人血清白蛋白

在摇瓶条件下对基因工程菌Pichia pastoris的发酵条件进行了实验，并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时，接种量为10%且种子细胞光密度（OD600）为20左右时，细胞生长的延迟期约为2.11h，细胞生长光密度与培养时间的关系模型为：y=0.7841e^0.2319t（线性相关系数r=0.9936）；在补料发酵时细胞浓度可达115g/L-160g/L（干重），在120h重组人血清白蛋白表达量达3.6g/L。     

生物搅拌反应器的CFD模拟及在肌苷发酵中的应用

通过改变搅拌桨叶间距,对50 L的气液搅拌生物反应器在指定转速、每升发酵液中每分钟通入空气1 L条件下的搅拌流场、剪切力、空气体积分率进行模拟,从流体力学角度对反应器进行了优化。将模拟优化结果用于实际肌苷发酵过程中,结果表明:计算流体力学(CFD)模拟优化后的搅拌桨位置能改善发酵罐内部的流场和气体分布,从而对菌体代谢和肌苷合成产生影响,使每升发酵液的产苷量提高了4.06 g。     

头孢菌素C发酵过程代谢特性

考察了头孢菌素C的发酵过程特征,对发酵过程的重要生理参数DO、CER、OUR、RQ等进行了在线检测和相关分析,并分析了比生长速率和比产物生成速率的变化规律。在发酵过程中OUR、CER最高分别达到了90.2 m o l/(m3.h)和69.8 m o l/(m3.h),表明头孢菌素C发酵代谢强度很大,对氧的需求量也非常大。比产物生成速率在发酵60~100 h最高达到2.15 U/(h.g)(细胞干重)。同时分析了头孢菌素C发酵过程中甲硫氨酸代谢规律,表明维持培养基中一定浓度的甲硫氨酸对头孢菌素C的合成有促进作用。通过对三级发酵和四级发酵的比较,表明在现有的设备和工艺条件下,三级发酵生产头孢菌素C要优于四级发酵,同时通过控制发酵前期菌丝浓度可获得最大产素水平。