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目前基因治疗研究遇到的普遍问题是转染效率低下及目的基因蛋白在活体表达水平较低,其中解决目的基因表达较低的一个重要手段便是基因载体的改造。1990年,Jallat等人在转基因小鼠研究中发现:hFIX cDNA的表达量低,而其余一系列带有完整内含子Ⅰ或中间缺失4.8kb的内含子Ⅰ的转基因小鼠,其表达都和完整的Ⅸ因子表达相仿。这提示Ⅸ因子内含子Ⅰ顺序对其表达有一定的促进作用。1995年,Kurachi等人用含内含子Ⅰ片断的表达质粒转化HepG2细胞,发现瞬间表达要比cDNA高出7倍,其凝血活性和细胞内mRNA水平也有相应数量的提高。本实验室也进行了hFIX intron Ⅰ的研究工作,构建了逆转录病毒载体GlNaCi′IX,但对病毒上清进行RT-PCR检测,发现intron Ⅰ常被不同程度剪切。本文以SNMBAAIXm为蓝本,构建了反向表达载体GlNaPAi′IXBAM,其中Ⅸ因子转录方向与LTR转录方向相反,以期避免病毒包装中将intron Ⅰ剪切掉,使intron Ⅰ结构能够正确引入到靶细胞中,从而提高Ⅸ因子的表达量。 相似文献
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小白鼠口服花生油溶四氯化碳(CCL4)13.95g/kg(公斤体重)至36h诱发肝中毒和口服CCL4前10~20min于腹腔注入DL-半胱氨酸100mg/kg.用凝胶圆盘电泳法显示肝中毒和中毒前腹腔注入DL-半胱氨酸小白鼠的血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶和肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)的谱带变化.结果表明,中毒鼠血清呈现以LDH5带占优势的肝损伤LDH同工酶谱;中毒前腹腔注入DL-半胱氨酸的小白鼠,血清LDH同工酶谱LDH5显著缩减,其它同工酶带几乎未显现.CCL4中毒的肝匀浆SOD谱带与正常鼠比较明显变宽或呈现两条同工酶带;中毒前腹注DL-半胱氨酸的小鼠SOD带与正常鼠略同,但有的仍呈现两条微弱的同工酶带.谱带的这些变化表明,CCL4诱发肝细胞损伤可能与自由基生成和脂质过氧化有关,DL-半胱氨酸则可能具有阻断肝损伤的作用;CCL4肝中毒在诱发自由基生成的同时又刺激了肝细胞SOD活性增强 相似文献
46.
卢丽萍 《曲靖师范学院学报》1997,(5)
如何培养学生的学习兴趣,开发学生的智能,把学生引入物理学大门,为今后学习物理奠定坚实的基础,这是初中物理启蒙教育的首要任务.本文根据笔者十几年的教学实践认为,在初中的起始教学阶段中应重视认真做好三个“第一” 以及坚持做到“三先三后” 的教学方法,对于提高学习物理的兴趣,有着积极的推动作用. 相似文献
47.
凝血因子IX的检测是血友病B基因治疗研究中的重要工作,在实验室原有基础上,发现和完善了凝血因子IX在蛋白质水平上的检测系统,为基因治疗血友病B提供了更为直观可靠的依据。首先,建立了以鼠抗人FIX单克隆抗体A-7为一抗的检测活性FIX蛋白量的ELISA法,为检测活性FIX提供了快速简便的方法。其次,实现了用Westernblot法检测转染细胞培养液上清中FIX,确证了体外培养的转有人FIXcDNA细 相似文献
48.
α-乙酰乳酸脱羧酶的提取条件与应用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从BD-5菌株中提取α-乙酰乳酸脱羧酶,为提高酶的得率,探讨了破壁方法、除杂蛋白、硫酸铵沉淀提取粗酶等的条件,以及提取过程中酶的损失情况和菌体存放时间对酶活力的影响等。结果表明:该菌株的菌体用超声波破壁、50%饱和度硫酸铵除杂蛋白,80%饱和度硫酸铵提取粗酶效果较好,菌体存放时间过长,酶活力明显降低。将用该菌株提取的酶应用于啤酒发酵中,证明有明显的降低双乙酰的效果。 相似文献
49.
赵永刚 《兰州理工大学学报》1997,(4)
采用摄动变分法,取圆薄板的中心最大振幅为摄动参数,对在复合载荷作用下的圆薄板的非线性振动问题进行了研究,一次近似得到了圆薄板的线性固有频率,二次近似得到了静变形状态下的非线性固有频率. 相似文献
50.
基于变步长随机共振的弱信号检测技术 总被引:11,自引:1,他引:11
针对绝热近似小参数随机共振难以满足工程实践中大参数下的弱信号检测,以及单一频率的共振分析在实际应用中的局限性问题,提出了一种变步长随机共振数值算法.该方法通过调整计算步长,使随机共振理论同时适用于犬、小参数条件下的弱信号特征提取.计算机仿真结果表明,对变步长随机共振后的信号作幅值谱和小波分析,均能准确得到低信噪比信号中的多个有用成分,充分证明该算法在大参数条件下可对弱信号中的多个特征频率产生共振输出.同时,变步长随机共振也可以有效抑制信号小波分解中由强噪声引起的边频干扰,提高小波分析在低信噪比信号检测中的可靠性. 相似文献