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为研究MHCⅡ类基因转录活化因子(CⅡTA)对人类白细胞抗原(HLA)Ⅱ类分子表达的影响,用RT-PCR方法从Raji细胞中克隆到C Ⅱ TA基因cDNA 5'端片段,构建成CⅡTA反义RNA真核表达载体 pcDNA-Ⅱ,基因转移 HLA Ⅱ类分子诱导型表达的 HeLa细胞.经 IFN-γ诱导,发现稳定转染pcDNA-Ⅱ的细胞中HLA-DR,DP和DQ的表达均较转pcDNA3空载体的细胞有显著下降,而 HLAⅠ类分子的表达不受影响.实验证明 CⅡ TA反义 RNA对 HLA Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用,为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据. 相似文献
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反转录病毒载体在基因治疗中可能会产生野生型病毒颗粒而引起安全性问题,本文研究含FIXcDNA重组质粒基因治疗血友病B的可能,构建了不具反转录病毒载体结构的两重组质粒pSCIXTN和pCIXTN,前者合SV40早期启动子和hCMV启动子共同控制的FIXcDNA,后者仅含hCMV启动于控制的FIXcDNA,它们都含有TK启动于驱动的neo基因,通过电击法将基因转移到PA317和HT1080细胞,在HT1080细胞中的FIX表达量分别为220、212ng/(106细胞·24h)通过与pCMVIX共转染靶细胞,可以增加人IX因子表达1.5~3.5倍,显示了用质粒载体转染靶细胞在血友病B基因治疗中是一条潜在可行的途径.本项研究用自制的电击仪转移PA317和HT1080等细胞,最高的转移效率达10-3,并探讨了细胞种类,DNA量,DNA结构,电压,脉冲时间与转移效率及表达量的关系. 相似文献
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四例血友病B患者基因治疗的临床试验 总被引:2,自引:0,他引:2
报道了对四例血友病B患者基因治疗的临床试验,取自四例血友病B患者的自体皮肤成纤维细胞,通过反转录病毒介导的基因转移,能高效地分泌人凝血因子Ⅸ。用胶原包埋经遗传修饰的自体皮肤成纤维细胞,再移植到血友病B患者皮下。四例患者经治疗后,自发出血症状得到了减轻,血浆中凝血因子Ⅸ蛋白浓度和凝血活性明显地增加,其中两例患者增加较大,达到正常值的4% ̄5%。另外两例患者体内的凝血因子Ⅸ和凝血活性也有不同程度的提高 相似文献
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乳腺表达人凝血因子Ⅸ的转基因小鼠的研究 总被引:5,自引:2,他引:3
通过正压手动显微操作技术,将能在离体细胞和活体细胞表达的人凝血因子Ⅸ的表达载体pMCⅨmDNA导入586枚昆明白种小鼠受精卵,随后将显微注射后存活的499枚受精精卵移植于假孕受体母鼠,获得216只F0代仔鼠。PCR和Southern印迹杂产分析证实有6只仔鼠的基因组中有外源基因阳性整合,整合率为3%;ELISA测定2只F0代转基因雌鼠的乳汁中人凝血因子Ⅸ蛋白的含是均已达100ng/ml一期法测定其 相似文献
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基因位于染色体上,染色体存在于细胞核中,通常只有在细胞分裂时才能够清楚地看到。凡是能分裂的细胞都可以制作染色体标本,即使在体内不能分裂的细胞,如淋巴细胞,在体外培养时,加入刺激细胞分裂的植物凝血素(Phytohemagglutinin PHA)后,同样可以制得染色体标本。在显微镜下看到的人类染色体,长度相差很大,最长的染色体大约是7μ,约为最短染色体的5倍。根据染色体的相对长度和着丝粒(Centromere)的位置, 相似文献
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单纯疱疾病毒胸苷激酶基因(HerpesSimplexVirus-ThymidineKinase,HSV-tk),配合核苷酸类似物(NAS)GCV或ACV的基因治疗是目前肿瘤基因治疗领域中一种较有希望的治疗方法.反转录病毒和腺病毒介导的HSV-tk/NAS肿瘤基因治疗系统的建立,并运用该系统进行脑胶质瘤、垂体瘤、黑色素瘤的基因治疗离体细胞和动物试验,取得了显著的肿瘤杀伤作用,特别是腺病毒介导的脑胶质瘤基因治疗动物试验效果很显著,能够完全消除肿瘤.同时,还建立了反转录病毒以及腺病毒HSV-tk基因治疗的安全性检测体系,为基因治疗的临床试验提供了安全性保证. 相似文献