β-淀粉样蛋白基元序列寡聚化及纤维化的功能研究

【目的】β-淀粉样蛋白形成的寡聚体是引起阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)发病的主要原因之一,研究β-淀粉样蛋白各段序列在寡聚和纤维化过程中的作用,以便更好地阐明该蛋白的寡聚机制和毒性作用。【方法】以C-端及N-端删节的6种β-淀粉样肽段作为研究对象,通过硫磺素T荧光检测、Tris-Tricine电泳、透射电镜等方法定性定量分析这些肽段的寡聚化和纤维化能力。【结果】1)氨基酸37~42具有增强Aβ寡聚化和纤维化的功能;2)氨基酸18~36对于寡聚和纤维化很重要,但不能缺少N-端的参与;3)Aβ1-17参与β-淀粉样蛋白长纤维的形成。【结论】β-淀粉样蛋白各段氨基酸序列对该蛋白寡聚和纤维化所贡献的不同作用,这对于β-淀粉样蛋白毒性机制的研究起到一定的帮助作用。
     

β-淀粉样蛋白与膜脂作用后的交联研究

β淀粉样蛋白(Aβ)与细胞膜相互作用形成寡聚体存在于膜脂内,聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分析这些膜内寡聚体的结构和状态,但十二烷基硫酸钠(SDS)使得寡聚体原有的结构极易被破坏,使用合适的交联剂来稳定蛋白在膜上的状态,从而获取寡聚体本身的结构.用双琥珀酰亚胺辛二酸酯磺酸钠盐(BS3)对Aβ42进行交联,将BS3与戊二醛交联进行比较分析,通过电泳、脂质体技术,并采用电镜照片对照分析.实验结果显示:1)BS3交联后的样品能保持蛋白原先的状态;2)BS3不会导致蛋白过度交联,很适合作为分析膜脂与β淀粉样蛋白相互作用的交联剂.因此,报道了BS3分析β淀粉样蛋白这种易聚集蛋白在插膜后的结构,且BS3可以替代戊二醛成为更有效的交联剂,这将为β淀粉样蛋白及其他易聚集蛋白插膜提供很好的研究方法.