单纯及丙泊酚联合电休克对抑郁大鼠海马TNF—α表达的影响

目的探讨单纯电休克及丙泊酚联合电休克对抑郁大鼠电休克治疗效果及海马内TNF-α表达的影响。方法50只成年Wistar大鼠随机分为5组（n=10）：正常对照组（C组）、抑郁组（D组）、单纯丙泊酚组（DP组）、单纯电休克组（E组）、丙泊酚联合电休克组（M组）。C组正常饲养，其余采用经典的慢性不可预见性应激法建立抑郁模型。建模成功后，E组直接行电休克治疗，M组腹腔注射丙泊酚90mg／kg，麻醉产生效应后行电休克治疗，每日进行以上处理1次，连续7日。以Open—field法和糖水消耗实验进行行为学评分。实验完成后处死大鼠，用免疫组化染色法检测TNF—α受体蛋白的表达；ELISA法海马TNF-α的含量，RT-PCR法测海马TNF—α mRNA表达。结果E组和M组大鼠的行为学评分高于D组和DP组，且M组高于E组（P〈0．05）；D组和DP组海马内TNF-α含量以及mRNA的表达高于其它各组（P〈0．05），M组海马内TNF—α含量以及mRNA的表达低于E组（P〈0．05），与C组差异无统计学意义（P〉0．05）；D组和DP组海马区TNF-α受体表达量低于C组（P〈0．05），M组的表达量接近于C组，但高于E组（P〈0．05）。结论慢性应激使大鼠海马内TNF—α含量升高及其受体表达下调，从而产生抑郁症。丙泊酚可以改善电休克抑郁症状可能与进一步下调抑郁大鼠海马内TNF—α的含量和上调其受体表达有关。     

外源性H2S通过调节β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达对PC12细胞APP／Aβ代谢的影响

目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）的调节作用，进而探讨其对淀粉样前体蛋白／β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H2s供体，实验设空白对照组、NaHs50μmol／L组、NaHS100μmol／L组和NariS200μmol／L组，按分组浓度处理PC12细胞24h后，RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达，并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化，EusA法检测细胞培养液中AB40和AB42水平。结果NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达，并下调C99、Ap40和Ap42蛋白表达，上调C83蛋白，各NaHS组分别与对照组比较，差别均有统计学意义（P〈0．05），而对APP蛋白表达没有影响，各组间比较差别无显著性（P〉0．05）。结论外源性H2s具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP／Aβ代谢的作用。     

香烟烟雾提取物对人内皮细胞细胞色素C氧化酶活性及细胞凋亡的影响

目的探讨香烟烟雾提取物（cigarette smoking extract，CSE）对内皮细胞细胞色素C氧化酶（cytochmme Coxidase，COX）活性及凋亡的影响。方法体外培养ECV304，分别给予0％、0．5％、1％、5％CSE刺激12h，及5％CSE刺激0h、6h、12h、24h后，生化法检测COX活性；投射电镜和流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果CSE引起COX活性下降，且随着刺激浓度和时间的增加而下降（P〈0．05）；电镜示CSE干预组细胞出现明显的凋亡形态学改变；流式细胞仪结果示不同浓度CSE分别作用12h后凋亡率依次增高，除O％CSE组和0．5％CSE组间比较无统计学意义（P〉0．05），余各组间比较均有统计学意义（P〈0．05）；5％CSE作用不同时间后，随着干预时间的延长细胞凋亡率逐渐升高（P〈0．05）。结论CSE抑制内皮细胞COX活性，呈浓度和时间依赖性；CSE诱导内皮细胞凋亡，呈浓度和时间依赖性；COX活性的下降可能在CSE所致的内皮细胞凋亡中具有重要作用。     

脂多糖致感染性脑水肿大鼠星形胶质细胞的活化和凋亡

目的通过观察脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）致大鼠感染性脑水肿后星形胶质细胞的凋亡、活化及iNOS表达情况，探讨在LPS致脑水肿中星形胶质细胞的作用。方法84只雄性SD大鼠，随机分为3组：空白对照纽（C组，n=12）；生理盐水对照纽（S组，n=12）；感染性水肿组（L组，n=60）。感染性脑水肿组又按颈内动脉注射脂多糖后6h、12h、24h、48h、72h分为5个亚组（n=12）。向颈内动脉注射脂多糖LPS150μg（0．15ml）建立大鼠感染性脑水肿模型。采用HE染色、流式细胞检测和免疫纽化染色分别观察脑组织病理改变、星形胶质细胞凋亡、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和iNOS表达情况。结果与C组和S组比较，L组大鼠星形胶质细胞胞体变大、突起增多；细胞内GFAP和iNOS表达增强，12h达高峰，除72h组，其余亚组均有统计学差异（P〈0．05）；各亚组星形胶质细胞凋亡增多（P〈0．05），24h凋亡最显著。C组和S纽比较无统计学意义（P〉0．05）。结论感染性脑水肿后星形胶质细胞凋亡增加，异常活化，分泌iNOS，参与感染性脑水肿的形成，在脑水肿的发生发展中发挥重要作用。     

DBP在难治性癫痫患者脑组织中的异常表达

目的通过观察白蛋白D．位点结合蛋白（DBP）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在难治性癫痫（IE）患者脑组织中的表达，探讨其在癫痫的发生、发展中的作用。方法用免疫组织化学及DBP／MAPK荧光双标法检测35倒难治性癫痫患者手术后脑组织标本中DBP、MAPK的表达，并与15例对照组进行比较。结果DBP主要在神经元表达，MAPK在神经元和胶质细胞中均有表达，主要分布于神经元，且IE中表达（DBP0．4737±0．0262、MAPK0．2935±0．0106）高于对照组（DBP0．2476±0．0229、MAPK0．2370±O．0125．P〈0．05），荧光双标显示DBP与MAPK分布在同一神经元上。结论DBP和MAPK在难活性癫痫患者手术后脑组织标本中表达上调，且共同表达在同一细胞上，提示两者在难治性癫痫的发生发展中可能存在一定的相互作用。     

胃癌侧群细胞耐药性研究及干细胞相关基因检测

目的研究胃癌侧群（Side Population，sP）细胞对化疗药物5-Fu（氟尿嘧啶）的耐药性及可能机制，并检测干细胞相关基因Nanog、Musashi-1及cD44的表达情况。方法选择人胃癌细胞株sGc-7901，以荧光染料H0echst 33342染色，维拉帕米桔抗对照，应用流式细胞仪分选sP细胞和nonsP细胞。细胞耐药实验比较sP细胞与nonsP细胞对化疗药物5．Fu的耐药性差异；westem_h10t检测ABcG2和bcl-2蛋白表达情况；流式细胞仪分析细胞周期；荧光定量PcR检测两组细胞中干细胞相关基因Nanog、Musashi-1及cD44mRNA的表达差异。结果胃癌细胞株sGc．790l中sP细胞的比例为2．8％，sP细胞对5-Fu的耐药存活率明显高于non-sP细胞（P〈0．05），与nonsP细胞相比，sP细胞高表达耐药蛋白ABcG2和抗凋亡蛋白bcl-2，有更多的细胞处于c0／G1期（P〈0．05），并高表达干细胞相关基因Musashi-1和cD44。结论胃癌sGC_7901细胞株中sP细胞对化疗药物5．Fu的耐药性明显高于nonsP细胞，其耐药机制可能与sP细胞高表达耐药蛋白ABcG2和抗凋亡蛋白bcl-2，有更多细胞处于G0／Gl期有关；Musashi-1和cD44可能是相对特异性的胃癌干细胞标志物。     

盐酸戊乙奎醚对大鼠感染性脑水肿AQP4表达的影响

目的：研究盐酸戊乙奎醚对感染性脑水肿保护作用的机制。方法：采用左颈内动脉注射脂多糖复制大鼠感染性脑水肿模型，将84只雄性SD大鼠随机分为对照组（C组）、水肿组（I组）、盐酸戊乙奎醚治疗组（P组）。检测6h、12h、24h、48h时各组大鼠脑组织含水量、病理形态；脑组织SOD活性、MDA含量；免疫组化法及RT—PCR法检测AQP4蛋白分布与AQP4mRNA含量。结果：（1）与C组相比，I组、P组脑含水量、MDA含量均升高，同时SOD活性、AQP4蛋白、AQP4mRNA表达均减少（P〈0．01）。与对应时间点P组相比，I组脑含水量、MDA含量均升高，同时SOD活性、AQP4蛋白、AQP4mRNA表达均减少，于24h达高峰，48h仍在较高水平（P〈0．01）。（2）脑组织光镜检查：I组大鼠脑组织损伤严重，P组损伤明显减轻。结论：盐酸戊乙奎醚能在一定程度上可减轻感染所致的脑组织损伤，上调AQP4表达，对脑水肿有一定治疗作用，其机制可能与抗氧化作用有关。     

解聚复肾宁对糖尿病肾病大鼠TNF—OL、MCP-1的影响

目的观察解聚复肾宁（Jiejufushenning，JJFSN）对糖尿病（Diabetes mellitus，DM）大鼠肾组织肿瘤坏死因子-α（Tumorneerosisfactor-alpha，TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和血清TNF-α的影响，探讨其肾保护作用机制。方法腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）建立SD大鼠DM模型，将成模DM大鼠随机分为3组：DM模型组（B组）、JJFSN组（C组）、厄贝沙坦（Irbesartan）组（D组），另设正常对照组（A组）。采用相应干预措施处理12周。常规方法测定12周末各组大鼠空腹血糖（FBG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、肾重／体重（KW／BW）、24h尿蛋白（24huFro）；放免法测血清TNF-α含量：免疫组织化学方法测肾组织TNF—Ot、MCP-1的表达；PAS染色评估细胞外基质；电镜观察肾组织超微结构改变。结果与A组相比．B组大鼠FBG、BUN、Scr、KW／BW、24huPro及血清TNF-α升高（P〈0．05），肾组织TNF—Ot、MCP-1表达明显增高（P〈0．05）；肾组织超微结构明显异常；C组和D组上述指标显著改善（P〈0．05），肾组织超微结构异常改善。结论竹FSN能延缓DM大鼠肾损害进程，其机制可能与抑制TNF-α、MCP-1上调有关。     

刚地弓形虫培养上清抑制THP-1细胞增殖及诱导凋亡的研究

摘要：目的提取弓形虫体外细胞共培养上清，并研究上清对人急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法收集对数生长期的THP-1细胞以5X10^7／ml细胞浓度接种于不同培养瓶中，对照组加入含10％胎牛血清的RPMll640，实验组加入相同体积不同数量（2×10^7／ml、4X10^7／ml、8×10^7／m1）弓形虫速殖子培养上清，采用四甲基氮噻唑蓝（MTY）法检测吸光度（A490值）并计算THP-1细胞增殖抑制率；倒置显微镜下观察细胞形态变化；Annexin-V-FITC／PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化，以Western印迹方法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性。结果MTY法检测结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制THP-1细胞株增殖，倒置显微镜下观察处理组细胞有发泡现象和凋亡小体出现。流式细胞仪检测弓形虫感染后的THP-1细胞凋亡率较对照组有升高趋势（P〈0．05），呈量效依赖性，Westernblot检测刚地弓形虫培养上清作用于THP-l细胞48h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组的比值分别有明显的升高与降低（P〈0．05）。结论刚地弓形虫速殖子培养上清对体外培养THP-l细胞增殖有明显的抑制作用，并可诱导THP-1细胞凋亡。     

重症急性胰腺炎病人外周血单个核细胞线粒体DNA拷贝数的意义

目的探讨重症急性胰腺炎患者外周血单个核细胞线粒体DNA拷贝数与患者病情严重程度、预后的相关性。方法分离研究对象（重症急性胰腺炎患者34名，健康对照组17名）外周血单个核细胞，采用荧光实时定量PCR检测各组PBMC线粒体DNA相对舍量，其与严重程度、预后的相关性。结果重症急性胰腺炎患者线粒体DNA含量较健康对照组明显降低（P〈0．05）。患者单个核细胞线粒体DNA拷贝教与APACHEⅡ评分呈负相关（r=-0．425）其中并发症组mtDNA拷贝数显著低于无并发症组（P〈0．05）。结论重症急性胰腺炎患者外周血单个核细胞中线粒体DNA含量显著下降，与患者APACHEⅡ评分呈负相关，且低水平的线粒体DNA拷贝数提示并发症发生率的升高，因此，线粒体DNA拷贝数可作为潜在评估患者病情危重程度及预后的指标，这一发现值得进一步大型，前瞻性的研究。     

基于IRS—P6AWIFS遥感影像和GIS的湖北省生态环境评价

以IRS-P6 AWIFS遥感影像为主要数据源,利用监督分类方法进行土地利用/覆被分类,在GIS技术支持下,通过空间分析提取出生物丰度指数、植被覆盖指数、水网密度指数、土地退化指数、环境质量指数等评价信息.依据国家环境监测总站2006年颁布的〈生态环境状况评价技术规范〉（HJ/192-2006）建立生态环境质量评价模型,通过模型的空间叠加进行湖北省生态环境状况评价. 结果 表明湖北省各地市生态环境状况总体较好,这与湖北各地的自然条件、气候条件、资源开发与利用等因素具有较好的相关性,表明评价模型是科学客观的.本文探索了IRS-P6 AWIFS数据和GIS技术相结合的生态环境状况评价方法,对区域生态环境的保护和改善具有积极意义.     

运用磁珠分选法建立免疫细胞共培养体系

目的以相互作用的几种免疫细胞上共同表达的抗原物质为标志,运用磁珠分选技术,从慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中同时获得并建立体外多细胞共培养体系,体外观察细胞之间的相互作用.方法采用梯度离心法分离30例慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠分选法分离获得 CXCR5+细胞,通过流式细胞仪检测 CXCR5+细胞纯度和组成,并将 CXCR5+细胞进行体外培养.在分离得到的 CXCR5+细胞的基础上,将 CXCR5+细胞分为3组,分别为对照组:不加任何刺激;实验组一:加入 IL 21刺激培养,实验组二:与人肝癌细胞系(HepG2)2215细胞混合培养.体外培养一周后,流式细胞仪检测实验组与对照组细胞 B细胞数量变化,ELISA测定培养体系中上清液 HBe抗体的含量.结果1)用流式细胞仪鉴定 CXCR5+细胞的纯度和构成:CXCR5+细胞纯度为85.5±5.8%,其中 Tfh细胞占23.8±7.4%,B细胞占35.6±7.6%;2)培养7天后,IL 21刺激组 B细胞百分率为47.2±1.8%,与(HepG2)2215混合培养组 B细胞百分率为40.2±3.5%,空白对照组 B细胞百分率为36.6±7.5%,IL 21刺激组与对照组,(HepG2)2215混合培养组与对照组 B细胞百分率均有显著差异(p<0.05);3)ELISA检测培养液上清 HBeAb定量,IL 21刺激组为0.668±0.094pg/ml,空白对照组为0.378±0.088pg/ml,两组有显著差异(p<0.05).结论使用间接免疫磁珠分离法可成功建立 CXCR5+B淋巴细胞和 Tfh细胞的共培养体系,为进一步体外研究细胞之间相互关系奠定基础     

内源性硫化氢与皮质发育障碍模型大鼠认知功能损害的相关性研究。

目的探讨皮质发育障碍DCDs（disorders of cortical development）模型鼠的认知功能与H2s的变化关系。方法用1射线照射孕15d Wistar大鼠，制作DCDs模型。采用Morris水迷宫法测试P30（出生后30天）、P60、P90F1代DCDs模型鼠和对照组大鼠的学习能力和空间记忆能力。用敏感硫电极法检测大鼠血液及海马组织中H2s浓度。用亚甲基蓝法测定大鼠海马神经元细胞胱硫醚，B-合酶CBS（cystathionine。beta-synthase）酶活性。结果水迷宫实验：P60、P90模型组大鼠较正常对照组潜伏期明显延长（P〈0．05），且随月龄增加潜伏期越长。P60、P90模型纽大鼠较对照组血液也s浓度分别降低6．5、11．5μmol,／L、海马组织H2s含量分别减少3．2、5．6μLmol／L．mg，海马组织神经元细胞CBS酶活性降低24．94、34．46μmol／L．g．min。P30模型组与对照组的各项变化不明显。结论DCDs模型鼠脑内H，S含量及海马组织神经元细胞CBS酶活性降低，内源性H2s降低与DCDs认知功能损害可能具有相关性，并为治疗皮质发育障碍的认知功能损害可能提供治疗途径。     

链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠对视网膜神经节细胞及眼压的影响

目的 研究糖尿病小鼠视网膜神经无细胞及眼压的变化.方法 5周龄的C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型.模型建立后3周和6周,行眼压测量与视网膜神经节细胞计数.结果 与对照鼠相比较,糖尿病小鼠的眼压升高(P＜0.01),视网膜神经节细胞比值减少(P＜0.01).结论 糖尿病会导致小鼠视网膜神经节细胞的减少和眼压升高,这些病理改变可能是糖尿病视网膜病变的重要组成部分.     

Lumican基因对人肺腺癌细胞株A549体外增殖和侵袭的影响

目的 观察基膜聚糖(Lumican)基因过度表达对人肺腺癌细胞株A549体外增殖和侵袭的影响.方法 以携带人Lumican基因的重组慢病毒感染A549细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选法建立稳定细胞株.分别用Real-time PCR和Western blotting方法检测A549细胞组、空载体组及Lumican感染组目的基因mRNA和蛋白的表达.运用MTT法研究Lumican基因对A549细胞增殖的影响.运用Transwell法检测Lumican基因对A549细胞侵袭的影响.结果 ①各组Lumican mRNA表达差异显著(x2=21.60,P＜0.01),Lumican感染组明显高于其它两组(F=102.86,P＜0.000 1),Lumican感染组的蛋白表达水平高于其它两组.②Lumican感染组在不同时间(1、2、3、4、5 d)OD(吸光度)值与A549细胞组和空载体组差异不显著(P＞0.05).③各组穿膜细胞数差异显著(x2=23.49,P＜0.01),Lumican感染组明显高于其它两组(F=73.92,P＜0.001).结论 成功构建了Lumican高表达的人肺腺癌A549稳定细胞株,Lumican基因对人肺腺癌细胞的体外增殖能力无影响,但能增强人肺腺癌细胞的体外侵袭能力.     

含氧有机物结构与毒性(log1/C)关系研究

为探寻含氧有机物结构与毒性(logl/C)的关系,应用分子顶点及顶点相互作用值对部分含氧有机物进行了结构表征.采用多元线性回归及逐步回归建立了2个定量结构-毒性关系模型.经过比较,发现模型(M2)具有最佳模拟结果,此时模型的复相关系数(R)为0.952,标准偏差(SD)为0.325.采用Jackknife法对模型进行了稳健性检验,结果表明,回归模型具有可接受的总体稳健性及良好的预测能力;另外,采用留一法(leave-one-out)对模型进行交互检验,复相关系数(RCV)为0.927,标准偏差(SDCV)为0.396,这也说明所建模型的稳定性与预测能力均较为理想.     

正背栅SOI-MOSFET二维阈值电压解析模型

通过建立沟道区域和埋氧区域的二维泊松方程,并考虑衬底区域的掺杂和背栅偏压对器件阈值电压的影响,得到了一种正背栅全耗尽SOI-MOSFET二维阈值电压模型.根据模型计算结果,研究了衬底掺杂浓度和衬底(背栅)偏压对器件阈值电压的影响,通过与MEDICI数值模拟结果的比较表明,该模型能预计不同衬底掺杂浓度和衬底(背栅)偏压对阈值电压的影响,正确反映器件的短沟效应和背栅效应.     

RNA干扰靶向沉默COX 2基因对MG 63骨肉瘤细胞生物学特性的研究

目的 通过构建小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)降低MG 63骨肉瘤细胞环氧合酶 2(COX 2)基因的表达,并进一步研究其对MG 63骨肉瘤细胞增值、侵袭、迁移能力的影响及分子机制。方法 设计靶向干扰COX 2基因的siRNA,通过脂质体转染MG 63骨肉瘤细胞,使其抑制MG 63骨肉瘤细胞COX 2基因的表达,后采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室实验研究其对MG 63骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,采用RFQ PCR和Western blot分别从基因和蛋白的水平检测MG 63骨肉瘤细胞侵袭性相关因子基质金属酶(MMP 9)的表达及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 转染MG 63骨肉瘤细胞后,实验组与阴性对照组和空白对照组比较,通过RFQ PCR和Western blot检测COX 2基因表达降低约90%(P0.05),MTT检测MG 63骨肉瘤细胞增值能力明显受到抑制(P0.05),Transwell实验检测MG 63骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力明显下降(P0.05),经RFQ PCR、Western blot检测侵袭性相关因子MMP 9和血管内皮生长因子VEGF的mRNA及蛋白表达降低(P0.05)。空白对照组和阴性对照组比较无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。结论 人MG 63骨肉瘤细胞COX 2基因被抑制后,MG 63骨肉瘤细胞增值、侵袭、迁移能力明显下降。     

成年大鼠脊髓损伤后内源性神经前体细胞的增殖与分化规律的研究

目的观察成年大鼠脊髓损伤后内源性神经前体细胞的增殖与分化,探讨内源性神经前体细胞的自然变化规律。方法制作脊髓压迫损伤模型,Brdu腹腔注射标记神经前体细胞,免疫荧光法(Immunofluoreseence)检测大鼠脊髓Brdu、GFAP、MBP阳性细胞数的变化。结果 1)正常组可观察到少量Brdu阳性细胞,脊髓损伤后Brdu阳性细胞显著增加(p0.05),并在第7天达到最大值,21天时仍高水平表达。2)正常组可见少量Brdu/GFAP和Brdu/MBP阳性细胞,脊髓损伤后Brdu/GFAP,Brdu/MBP双标阳性细胞数显著增加(p0.05)。结论脊髓损伤后神经前体细胞的数量在第7天达到最大值,我们认为,一周内可能是神经前体细胞增殖分化调控的关键时期。此外,新生星形胶质细胞和少突胶质细胞大量增殖,并与神经前体细胞的迁移、后肢功能恢复表现出一定的同步性,提示新生胶质细胞可能参与了脊髓损伤后神经功能的修复作用。