中药在癌症治疗中的作用

从中医药治疗恶性肿瘤的研究进展入手,主要探讨中药在肿瘤治疗中对放化疗的减毒增效、治疗癌症并发症、逆转肿瘤的多药耐药等重要作用.中药相对于放化疗抗癌具有毒副作用小,整体观念强,不影响劳动力,弥补放化疗不足等优点.     

甜菜M14品系花器官蛋白质双向电泳体系的建立

双向电泳是目前唯一能将数千种蛋白同时分离与展示的技术.以具有野生白花甜菜优质基因资源的甜菜M14品系为材料,从植株取材、样品制备、蛋白质定量、上样量、双向电泳、染色、脱色等方面优化,构建了高效、稳定的甜菜M14品系花器官蛋白质双向电泳技术平台.结果证明所获得的凝胶图谱背景清晰,对比度高,重复性好,蛋白质点边缘平滑,并且...     

P糖蛋白及其检测方法

肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药性是化疗失败的主要原因之一,P-gp/mdr1介导的多药耐药是最经典的耐药机制.目前,对肿瘤细胞P-gp的检测主要从mRNA水平、蛋白水平及细胞水平进行,对其表达水平的检测具有潜在的临床意义。     

甜菜M14品系Cystatin基因植物蛋白纯化表达载体的构建及转化烟草

植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂是一类具有提高植物对各种生物及非生物胁迫抗逆性的重要蛋白质。利用前期获得的甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的编码区序列构建了带有His标签的甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的植物蛋白纯化表达载体,并将其转化烟草,获得T0代阳性转基因植株,为下一步利用融合蛋白的His标签从转基因烟草中大量纯化甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂奠定了基础。     

RNA干扰技术及其应用

RNA干扰(RNA in terference,RNA i)技术是抑制和逆转基因表达的新型生物学研究工具.论述了RNA i的作用机制及其在基因组学、基因治疗、药物探查等方面的应用情况.d sRNA在酶切作用下产生siRNA,后者与RNA诱导沉默复合物R ISC结合,共同降解靶mRNA,从而达到阻断特异基因表达的目的.该技术已对基因功能、基因治疗和药物筛选等方面的体外实验产生了深刻的影响,但由于存在一些尚未解决的问题,这项技术尚未进行大规模临床应用.     

跨界基因沉默菌株的快速构建及对靶标基因干扰能力的检测

"跨界基因沉默"是一种利用大肠杆菌在哺乳动物细胞中传递小干扰RNA并引起基因沉默的新颖技术,具有实用、稳定和低成本等优点.该技术通过构建一种能转录出短发夹RNA(shRNA)的大肠杆菌,而这种大肠杆菌产生的shRNA能靶向哺乳动物细胞中的特定基因,从而引发RNA干扰(RNAi).本文用RecA同源重组的方法将跨界基因沉默质粒的工作元件快速地整合到大肠杆菌的染色体DNA上,构建了跨界基因沉默菌株.通过吖啶橙染色实验证明了跨界基因沉默菌株能够入侵哺乳动物细胞,最后Western blot结果表明跨界基因沉默菌株可以对靶标基因产生干扰作用.该技术的完善将进一步促进工程菌的研发和利用.     

高脂对中华鳖肝脏组织中microRNA及相关基因表达的影响

为研究高脂对中华鳖肝脏组织中micro RNA及相关基因表达的影响,选取180只中华鳖随机分成两个实验组,分别投喂脂肪质量分数为7.98%(对照组)和13.86%(高脂日粮组)的饲料.定制光周期为12 h光照vs12 h黑暗.饲养6周后,每间隔3 h采集一次肝脏样品,研究高脂对中华鳖micro RNA及相关基因节律性表达的影响.结果表明,中华鳖肝脏组织中3个重要的micro RNA均具有节律性表达特征,且与生物钟核心基因(Clock,Bmal1和Bmal2)和脂肪代谢基因(Lxrα,PPARα和Sirt1)之间具有较强的相关关系.但高脂日粮改变了mi R-1a,mi R-21和mi R-34a节律性表达特征和表达水平,从而引起其相应靶基因(生物钟核心基因和脂肪代谢基因)的昼夜节律表达模式、m RNA表达水平及他们之间的相关关系发生相应改变.该结果为micro RNA参与调控中华鳖肝脏中脂肪代谢相关基因的节律表达提供新视角.     

内含子miRNA与宿主基因之间的关系

miRNA是一种小的非编码RNA分子,是重要的基因表达调节剂,在个体发育、新陈代谢和一些疾病的形成中发挥重要作用.根据其所在位置不同,mi RNA可分为基因间mi RNA和内含子miRNA,已知有一半以上的mi RNA位于编码蛋白质基因的内含子区域内,其中有内含子mi RNA嵌入的基因称为宿主基因.由于内含子mi RNA与宿主基因关系的特殊性,因此有研究者发现其与宿主基因执行共表达但可起相同或相反的作用,即内含子mi RNA可与促进宿主基因的基因或位点结合,从而抑制宿主基因的表达;也可与抑制宿主基因表达的基因结合,从而正调宿主基因的表达.因此,内含子micRNA的发现不仅提供了对内含子功能的更多认识,且有助于理解宿主基因通路的功能.从mi RNA的形成、内含子mi RNA定义及其与宿主基因之间的关系进行综述,以期为内含子mi RNA的研究提供更好的思路.     

靶向CK1α基因shRNA表达载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

通过RNA干扰实验沉默酪蛋白激酶1α(Casein Kinase 1,CK1α)基因,探讨其对肺癌细胞A549生长增殖的影响.首先构建3个针对CK1α基因不同位点的短发夹表达载体pGenesil-CK1α-S1、pGenesil-CK1α-S2、pGen-esil-CK1α-S3和一个无义错配载体pGenesil-NK,分别转染A549细胞,用G418筛选出阳性克隆,得到A549-S1、A549-S2、A549-S3及A549-NK细胞株.再通过RT-PCR和Western blotting方法,分别检测了CK1α基因的mRNA和蛋白的表达情况.比对A549-NK,A549-S1、A549-S2及A549-S3 mRNA水平的抑制率分别为84.3%、57.9%和61.8%(P<0.001);蛋白质水平的抑制率分别为78.4%、51.3%和59.9%(P<0.001).选择干扰效率较好的A549-S1细胞进行后续实验.细胞计数绘制生长曲线、CCK-8法观察细胞增殖状况和流式细胞仪检测细胞所处周期时相来分析转染CK1α基因shRNA表达载体对A549细胞生长增殖的影响.实验结果显示,A549-S1与A549和A549-NK两对照组的平均值比较,细胞计数抑制率为(37.7±2.2)%(P<0.01);CCK-8抑制率为(26.2±1.5)%(P<0.05);S期减少(75.0±4.0)%(P<0.01);G2/M期减少(45.2±5.4)%(P<0.05).因此,转染CK1α基因shRNA表达载体可导致CK1α基因的沉默,明显抑制A549细胞的生长和增殖.     

RNA干扰技术在植物遗传特性改良中的应用研究

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一项新的分子生物学技术,是外源和内源性双链RNA(double-strands RNA,dsRNA)在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,从而导致转录后基因沉默的现象。RNAi现象广泛存在于生物体中,是2l世纪的研究热点之一。目前,RNAi及相关沉默反应的机制在植物中的研究取得了重大进展,RNAi已发展成为一种强有力的实验工具,用来控制植物目的基因的表达以获取预期的生物表型,具有广阔的应用前景。在此对RNAi在植物遗传特性改良的研究现状进行概述,以期为RNAi技术在植物上的深入研究提供参考。     

RNA干涉的研究进展

RNA干涉(RNA interfering)是目前分子生物学领域的研究热点之一,RNAi是一种极为保守的生物机制,而且已在很多种生物中发现了该现象,或是获得了成功的干涉实验。由于RNAi具有良好的技术优越性,使其在很多领域,如基因功能验证、疾病治疗方面有着广阔的应用前景。     

RNA干扰的机制与应用

RNAi是双链RNA介导的一种基因沉默 .通过对果蝇、线虫、真菌及植物的研究 ,RNAi的机制逐渐被证实 .Dicer切割产生的小干扰片断在RNAi过程中发挥主要的作用 .现在 ,越来越多的证据证实RNAi技术在现代生物技术中的重要性 ,并可应用于人类基因治疗 .     

RNAi在哺乳动物抗病防御中的应用及研究进展

RNAi具有特异性的抑制甚至关闭相关序列基因表达的特点，现已应用于哺乳动物重大传染病治疗、肿瘤治疗、基因功能研究和新基因的发现等领域．本文主要对RNAi在哺乳动物抗病防御中的作用机制、重大疾病的探索、研究新进展及其应用前景等方面作一较为全面的综述．     

黄鳝生殖发育不同时期性腺差异蛋白的初步研究

提取黄鳝从雌性性逆转发育为雄性过程中7个不同生殖发育时期生殖腺的总蛋白,通过考马斯亮蓝染色扫描分析,选出在相对分子质量17附近的一条蛋白带进行基质辅助激光解吸一电离飞行时问质谱分析(MAL-DI-TOF),搜库显示与其匹配的蛋白为二磷酸核苷激酶(Nuclcoside diphoshate kinase,NDPK).该蛋白带的表达山雌性发育一雄性发育呈现逐渐减弱的趋势,在黄鳝的性腺发育中,NDPK可能参与了黄鳝生殖腺的性逆转过程.     

人类新基因RHBDL8的研究初报

运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因，经国际基因命名委员会批准命名为Rhomboid，veinlet-like8(RHBDL8)．该基因位于7号染色体q11．23区域，mRNA全长约1．8kb，3’末端含有ATAAA的加尾信号，编码一段长434个氨基酸的蛋白质．该蛋白质含有一个rhomboid保守区，且高度相似于一个未有研究的小鼠蛋白．其表达在胚胎期(23周)主要集中在大脑、心脏、骨骼肌，而在成体，除脑部依然有大量表达外，上述的其他部位表达量均大大降低．这种在发育过程中的表达变化提示我们该基因可能在这些器官的发育中起到了一定的调控作用．     

拟南芥同源转换盒基因A21反义RNA基因重组体的构建及转化

A21是拟南芥的一同源转换盒基因，以发育旺盛的组织中高度表达。采用反义RNA技术，将该基因cDNA 5′端自然410bp反向克隆到pTA7002后，构建了可在植物中调控表达A21反义RNA基因片段的重组体。以根癌农杆菌浸渍法将重组体转入拟南芥Landsberg erecta生态型植株中，筛选到转A21反义RNA基因的拟南芥植株。反义基因可在甾类激素诱导下表达出A21的反义RNA。经初步诱导表达，变异性状表现为顶端生长抑制型。     

黑麦草漆酶编码基因片段的克隆与序列分析

黑麦草中木质素的结构、含量是决定其饲用品质的主要因素。漆酶是木质素生物合成中的关键酶之一,属于多铜氧化酶基因家族。根据报道的植物漆酶编码基因的氨基酸序列中铜离子结合域及N-端糖基化位点两个保守区设计4对引物,以黑麦草总DNA为模板,经PCR扩增、克隆、测序后得到3个有效序列,分别命名为Lac10-1、Lac8-1和Lac11-1。序列分析表明,3个基因片段的编码蛋白不仅含有保守的蓝铜氧化酶结合区域HAH和N-末端糖基化位点,而且分别与黄杨、黑麦草中分离的漆酶编码蛋白的氨基酸序列具有较高的同源性。因而,推断克隆到的3个基因片段是黑麦草漆酶基因家族的成员。     

麦类作物基因组原位杂交技术要点分析

基因组原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法，其探针是总基因组DNA．该技术广泛应用于植物进化和亲缘关系的鉴定上．本文主要对麦类作物中基因组原位杂交技术的要点进行了分析。     

郁金香ACC氧化酶基因RNAi表达载体的构建

为了构建郁金香ACC氧化酶基因的RNAi表达载体.采用Trizol法提取了郁金香花瓣总RNA,根据郁金香ACC氧化酶基因编码区序列,设计了带有限制性内切酶位点的特异性引物,成功地扩增得到了郁金香ACO基因保守片段.将此片段以正向和反向插入到中间载体pBSin内含子的两端,构建成发卡结构的RNA片段,利用pCAMBIA35S-1301作为桥梁载体,构建了带发卡结构的RNAi表达载体pCAMBIA-ACO.