组胺H1受体缺乏改变小鼠脑内组胺含量及昼夜节律

在乙谜麻醉下,分别于明时(8:00 a.m.)及暗时(8:00 p.m.)断头处死野生型及组胺H1R基因敲除型小鼠,迅速取出脑组织并分离出皮层、纹状体、海马、下丘脑、丘脑、中脑及脑干等脑区.这些脑组织被制成匀浆并用HPLC荧光检测法测量其组胺含量.结果显示暗时处死时,H1R基因敲除型小鼠海马、丘脑、中脑及脑干中的组胺含量明显低于野生型小鼠.明时处死时,野生型小鼠各脑区组胺含量均较暗时处死显著降低,但这一变化在H1R基因敲除型小鼠中并未观察到.这些表明作为组胺的功能靶,H1R不仅介导组胺的功能,而且调节大脑中组胺含量与释放的昼夜节律.     

血红素加氧酶-1 基因敲除小鼠的饲养和鉴定

摘要: 目的 繁殖并鉴定 HO-1 基因敲除( HO-1 － / － ) 小鼠。方法 将引进的 HO-1 基因敲除杂合子小鼠,进行 SPF 级饲养,与 C57BL/6 野生型小鼠配种繁殖,提取子代小鼠的基因组 DNA,PCＲ 法特异性扩增 HO-1 基因片段,使用 双脱氧测序法测得基因序列。子代小鼠出现 3 种基因型: 野生型、杂合子型及纯合子型。杂合子小鼠进一步配种 繁殖,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠,纯合子小鼠用以课题研究。结果 HO-1 基因敲除杂合子小鼠的饲养和 繁殖均获得成功,获得了 HO-1 基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养繁殖及鉴定方法是从 HO-1 基因 敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

颗粒蛋白前体缺失型腹膜巨噬细胞的体外炎症应答

探讨颗粒蛋白前体缺失型巨噬细胞的体外炎症反应。选取野生型C57BL/6雄性小鼠6-8周(WT)和PGRN基因敲除雄性小鼠6-8周(KO)为实验动物。向小鼠腹腔内注射1m L6%的淀粉,脱颈法处死小鼠后提取腹膜细胞。用瑞士染色后油镜下观察细胞,用流式细胞仪进行细胞检测,显微镜下观察腹膜巨噬细胞吞噬功能,ELISA法检测腹膜巨噬细胞培养上清中TNF-a和IL-12因子。WT小鼠和PGRN基因敲除KO小鼠腹膜细胞的数目、形态和种类及巨细胞表面标志物和巨噬细胞吞噬功能均无显著性差异(p0.05)。PGRN基因敲除KO小鼠来源腹膜巨噬细胞培养上清中前炎性因子TNF-a和IL-12的含量较WT小鼠明显增高。PGRN对腹膜细胞的数目、形态、种类和巨噬细胞表面标志物没有显著影响,但会使巨噬细胞炎症反应增强。     

西替利嗪的抗组胺H1受体作用

目的观察西替利嗪的抗组胺H1受体作用.方法采用离体气管环试验分析pA2,以小鼠皮肤通透性试验和组胺致休克试验观察药效.结果西替利嗪10-7～10-6mol·L一1可剂量依赖性地对抗组胺引起的气管环收缩,使组胺的量效曲线平行右移,pA2为7.378 1,西替利嗪0.06～O.mg·kg-1口服给药可显著对抗组胺引起的小鼠皮肤血管通透性的增高,使蓝染面积显著缩小,蓝染皮肤伊文思蓝含量显著降低,当组胺用量为3.2μg时,其Ec50分别为0.177 mg·kg-1和0.379ng·kg-1.西替利嗪0.056～O.50 mg·     

Caveolin-1 在肝纤维化中作用的研究

摘要:目的 通过 10%四氯化碳( CCl₄ )橄榄油溶液,分别诱导野生型小鼠和小窝蛋白-1( Caveolin-1) 敲除小鼠建立肝纤维化模型,比较分析敲除 Caveolin-1 对肝损伤和胶原沉积的影响,揭示其在肝纤维化中的作用。 方法 按剂量 1 μL / g,腹腔注射野生型小鼠和 Caveolin-1 敲除小鼠 10% CCl₄ 橄榄油溶液,2 次 / 周。 注射后,1、3、7、14 和 28 d,分 别处死 5 只小鼠,取血清和肝脏,通过苏木素-伊红( HE) 染色、血清谷丙转氨酶( ALT) 和谷草转氨酶( AST) 水平检测,分析肝脏损伤程度;利用天狼猩红染色、Real-time PCR 及 Western blot 方法,观察肝脏胶原沉积及肝纤维化标志物 α 平滑肌肌动蛋白( α-SMA) 、Ⅰ 型胶原蛋白( collagen-Ⅰ )和Ⅲ 型胶原蛋白( collagen-Ⅲ ) mRNA 及蛋白表达水平, 分析肝纤维化程度。 结果 与野生型小鼠相比,造模后 3 d,敲除小鼠的血清 ALT 和 AST 含量显著升高( P<0. 01) ;3、7 和 14 d,敲除小鼠肝脏坏死面积显著增大( P<0. 01 或 P<0. 05) ;7、14 及 28 d 时,敲除小鼠胶原染色面积明显增多( P<0. 01 或 P<0. 05) ;肝星状细胞活化标志物 α-SMA mRNA 水平在 3 d 和 14 d 时显著升高(P<0. 05),collagen-Ⅰ和collagen-Ⅲ mRNA 在 14 d 时显著上调(P<0. 01);14 d 时,敲除小鼠肝脏 α-SMA、collagen-Ⅰ及 collagen-Ⅲ 蛋白表达水平均显著升高( P<0. 01 或 P<0. 05) 。 结论 Caveolin-1 抑制 CCl₄ 诱导的小鼠肝脏炎性损伤及纤维化。     

PLCε基因敲除小鼠血液生理生化指标分析

目的分析PLCε基因敲除小鼠纯合型(-/-)和野生型小鼠(+/+)血液生理生化指标的差异。方法选取成年PLCε基因敲除纯合型(-/-)小鼠与野生型(+/+)小鼠各20只,雌雄各半,检测8项生理指标和11项血清生化指标。结果野生型(+/+)小鼠的WBC、RBC、HCT和MCH等4项生理指标,纯合型小鼠(-/-)的PLT指标,雌雄之间差异显著(P0.05);野生型(+/+)的MCV和MCH指标高于纯合型(-/-)小鼠,差异显著(P0.05);野生型(+/+)小鼠的ALB、GLU和TC等3项生化指标,纯合型(-/-)小鼠ALP和TG等2项生化指标,雌雄之间差异显著(P0.05);野生型(+/+)小鼠的TBIL指标低于纯合型(-/-)小鼠,差异显著(P0.05)。结论野生型雌雄之间有7项生理生化指标存在差异比纯合型3项差异指标多,野生型与纯合型之间有2项血液生理指标和1项血清生化指标存在显著差异。     

速激肽1型受体（NK1 R）在斑胸草雀脑干鸣唱控制相关核团及部分听觉核团内的分布

采用免疫组织化学的方法研究了速激肽1型受体(NK1R)在斑胸草雀脑干发声控制核团和部分听觉中枢内的分布及阳性标记特征.结果显示,NK1R广泛分布于斑胸草雀发声控制核团和部分听觉中枢内;1)发声控制相关核团:中脑丘间复合体背内侧核(DM)有大量的NK1R免疫阳性胞体标记,极少出现纤维;中脑腹侧被盖区(VTA)、黑质致密部(SNc)及周围脑区有大量的NK1R阳性胞体和NK1R免疫阳性纤维分布;2)听觉中枢:中脑背外侧核(MLd)和耳蜗核前庭外侧核(NM)有密集的胞体标记;而耳蜗核层状核(NL)及角核(NA)有少量NK1R阳性胞体分散分布,且角核可见大量密集深染纤维.本实验结果提示NK1R可能在鸣禽的发声控制及听觉中枢内具有重要的生理功能.     

孤独谱系障碍相关基因dia1r斑马鱼突变体的构建及行为学表型探析

dia1r基因是人类孤独症谱系障碍相关基因.临床研究发现,缺失dia1r可能会导致患者面部畸形、智力障碍和语言发育迟缓等症状.目前,对dia1r基因的功能及分子机制知之甚少,仅有少数在鸡胚、斑马鱼、小鼠中的表达定位研究.本文通过CRISPR/Cas9系统构建了dia1r敲除的斑马鱼突变体模型,成功获得了稳定遗传的纯合突变体.对突变体进行行为分析发现,与野生型斑马鱼相比,纯合突变体幼鱼的自发运动能力降低,趋触性减弱,对光暗交替刺激更加敏感.在成鱼社交偏好实验中发现,雄性纯合突变体比野生型表现出较弱的社交偏好.     

大豆黄酮对衰老小鼠脑组织神经递质含量的调节

研究大豆黄酮对D–半乳糖致衰老小鼠脑神经递质水平的调节.连续背部注射D–半乳糖6周,建立衰老模型,然后灌胃大豆黄酮5周(实验组Ⅰ、Ⅱ的剂量分别为5、10 mg/(kg.d)),监测不同脑区乙酰胆碱、乙酰胆碱酯酶、多巴胺和5–羟色胺含量变化,探讨大豆黄酮对衰老小鼠脑组织神经递质水平的影响.结果表明,灌胃衰老小鼠大豆黄酮后,大脑皮质和海马中乙酰胆碱、乙酰胆碱酯酶、多巴胺和5–羟色胺含量明显上升,并且具有一定的剂量效应.说明大豆黄酮可以改善衰老小鼠脑组织中神经递质含量,具有明显的抗衰老作用.     

大豆异黄酮对小鼠脑组织中胆碱酯酶和氨基酸类神经递质及记忆的影响

采用不同剂量的大豆异黄酮饲喂小鼠,观测大豆异黄酮对小鼠记忆功能、脑组织中氨基酸类神经递质含量、脑组织与血液中胆碱酯酶活性的影响.结果表明,实验所用的三个剂量(30、60、120 m g/kg.bw)的大豆异黄酮对小鼠的记忆能力均有不同程度的提高;大豆异黄酮使小鼠血液和海马中胆碱酯酶(AChE)活性以及大脑皮质与海马组织中甘氨酸(G ly)含量降低,而大脑皮质与海马组织中天冬氨酸(A sp)和谷氨酸(G lu)含量升高.此结果提示,大豆异黄酮具有调节脑组织中氨基酸类神经递质和胆碱酯酶代谢的作用,这可能与大豆异黄酮调节记忆功能有关.     

DRD1 基因敲除影响雄鼠生育的分子机理研究

摘要:目的 研究 DRD1 基因敲除引起雄鼠生殖功能下降的机制。 方法 本研究以 DRD1 基因敲除鼠( KO)和野生鼠( WT)为研究对象,对 8 周龄 KO 与 WT 雄鼠进行基因型鉴定,测体质量并计算睾丸系数,一侧睾丸 HE 染色观察形态,另一侧睾丸 TRIzol 法提取 RNA,通过 qRT-PCR 反应,采用相对定量法,分析与生殖密切相关基因的表达差异倍数。 结果 KO 与 WT 鼠体质量相比较具有显著差异( P<0. 05) 。 睾丸组织病理学切片观察发现,相对于 WT 鼠,KO 鼠生精小管排列疏松紊乱,生殖细胞层数少,提示精子形态及功能存在异常。 通过 qRT-PCR 进行基因表达差异分析,KO 小鼠相对 WT 小鼠 CFTR 表达上调 2. 32倍, Spata19 上调 4. 58 倍,SMCY 下调 5. 25 倍,DAZ 下调 3. 14倍。 结论 以上研究发现,敲除 DRD1 基因可通过影响睾丸组织结构及相关基因表达,进而影响生殖。     

30日龄Fmr1基因敲除小鼠的跳台实验观察＊

目的对30日龄的Fmr1基因敲除小鼠的跳台实验进行观察。方法采用30日龄的KO鼠和WT鼠分别连续进行2 d的跳台实验,根据所获得的数据进行多因素方差分析处理。结果同周龄KO鼠的潜伏期比WT鼠明显少（P〈0.05）;而KO鼠的错误次数比WT鼠明显多（P〈0.05）;不同周龄KO鼠或WT鼠的潜伏期、错误次数无差异（P〉0.05）;第1天KO鼠的潜伏期和错误次数与第2天相比无差异（P〉0.05）;第1天WT鼠的潜伏期和错误次数与第2天相比有显著差异（P〈0.05）。结论 30日龄Fmr1基因敲除小鼠存在认知功能障碍。     

家鸽呼吸中枢调控机制的初步研究

在69只家鸽用电刺激、电损毁、横切和记录细胞放电的方法研究了脑各部(小脑除外)与呼吸调控的关系。实验发现延髓具有基本呼吸中枢,此中枢位于延髓中后部两侧网状结构中。中脑内侧区域和丘脑下部视前区与喘息控制有关。家鸽中脑鸣叫中枢集中在内丘核(ICo)区。刺激丘脑广大区域和端脑隔区可引起程度不同的呼吸抑制。实验还发现,刺激整个三叉端脑束(QF束)可引起显著的呼吸抑制和心率变慢。     

Excitatory effect of histamine on neuronal activity of rat cerebellar fastigial nucleus in vitro

The cerebellar fastigial nucleus (FN) holds an important role in motor control and body balance. Previous studies have revealed that the nucleus is innervated by direct hypothalamocerebellar histaminergic fibers. However, the functional role of histaminergic projection in cerebellar FN has never been established. In this study, we investigated the effect of histamine on neuronal firing of cerebellar FN by using slice preparations. Sixty-five FN cells were recorded from 47 cerebellar slices, and a vast majority of the cells responded to histamine stimulation with an excitatory response (58/65, 89.2%). Perfusing slices with low-Ca2 /high-Mg2 medium did not block the histamine-induced excitation (n=10), supporting a direct postsynaptic action of histamine on the cells. Furthermore, the excitatory effect of histamine on FN neurons was not blocked by selective histamine H1 receptor antagonist triprolidine (n=15) or chlorpheniramine (n=10), but was effectively suppressed by ranitidine (n=15), a highly selective histamine H2 receptor antagonist. On the other hand, highly selective histamine H2 receptor agonist dimaprit (n=20) instead of histamine H1 receptor agonist 2-pyridylethylamine (n=16) mimicked the ex- citatory effect of histamine on FN neurons. The dimaprit-induced FN neuronal excitation was effectively antagonized by selective histamine H2 receptor antagonist ranitidine (n=13) but not influenced by se- lective histamine H1 receptor antagonist triprolidine (n=15). These results demonstrate that histamine excites cerebellar FN cells via the histamine H2 receptor mechanism and suggest that the hypotha- lamocerebellar histaminergic fibers may modulate cerebellar FN-mediated sensorimotor integration through their excitatory innervations on FN neurons.     

Histamine regulates T-cell and antibody responses by differential expression of H1 and H2 receptors

Many pathological processes, including those causing allergies and autoimmune diseases, are associated with the presence of specialized subsets of T helper cells (TH1 and TH2) at the site of inflammation. The diversity of TH1 and TH2 function is not predetermined but depends on signals that drive the cells towards either subset. Histamine, released from effector cells (mast cells and basophils) during inflammatory reactions can influence immune response. Here we report that histamine enhances TH1-type responses by triggering the histamine receptor type 1 (H1R), whereas both TH1- and TH2-type responses are negatively regulated by H2R through the activation of different biochemical intracellular signals. In mice, deletion of H1R results in suppression of interferon (IFN)-gamma and dominant secretion of TH2 cytokines (interleukin (IL)-4 and IL-13). Mutant mice lacking H2R showed upregulation of both TH1 and TH2 cytokines. Relevant to T-cell cytokine profiles, mice lacking H1R displayed increased specific antibody response with increased immunoglobulin-epsilon (IgE) and IgG1, IgG2b and IgG3 compared with mice lacking H2R. These findings account for an important regulatory mechanism in the control of inflammatory functions through effector-cell-derived histamine.     

牛乳清蛋白BALB/c小鼠过敏模型的建立及其优化

目的:建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型,并探讨不同佐剂、免疫途径及饲料纯度等因素对建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型的影响。方法:用不含牛乳及乳制品的特制饲料饲养BALB/c小鼠以乳清蛋白致敏,间接ELISA法测定特异性IgE,用荧光法检测体外激发小鼠致敏肥大细胞释放的组胺。结果:成功建立BALB/c小鼠乳清蛋白过敏模型,条件优化结果显示,氢氧化铝佐剂结合皮下注射最好地促进特异性IgE产生;用不含牛奶及其他食物过敏原的特制饲料饲养的小鼠特异性IgE的本底水平低,适于建立小鼠过敏模型,荧光法检测肥大细胞释放组胺的结果与特异性IgE检测结果一致。结论:用特制饲料饲养小鼠,氢氧化铝佐剂结合皮下注射乳清蛋白适于建立BALB/c小鼠过敏症模型,该模型可用于过敏症机理研究。     

褪黑素对持续光照小鼠学习记忆能力的影响

运用Ｙ－迷宫检测小鼠的分辨学习和记忆能力,观察了年龄,每天２４小时连续１个月的持续光照和每日定时注射褪黑素对小鼠分辨学习和记忆能力的影响。结果表明,成年小鼠与青年小鼠相经学习和记忆能力下降;持续光照可引起小鼠学习记忆能力出现不同程度的下降;实验结果提示,褪黑素在维持学习记忆能力中具有重要作用。     

根田鼠肝糖元水平昼夜节律及低氧影响

在自然光照下,根田鼠肝糖元水平有一个昼夜节律,一天中含量存在两个高峰,一个是在1:00的30.8±7.6mg/g湿重,另一个为15:00的29.7±9.4mg/g湿重,最低是在20:00的14.8±1.7mg/g湿重.在低氧7Km2h和24h下,肝糖元呈下降趋势,但不呈显著水平(P>0.05).     

缺氧预适应小鼠海马脑区VEGF蛋白表达增加

目的 观察重复低氧对小鼠海马组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 蛋白质表达的影响.方法 小鼠随机分为3组，分别暴露低氧0次(H0),1次(H1),4 次(H4)后取海马组织,应用 Western Blot 技术,检测小鼠海马组织内VEGF的蛋白表达变化.结果 实验发现，H0,H1和H4组海马组织内VEGF均表达，H1组与H0组之间没有差异，H4组显著升高（P<0.05，vs. H0 and H1）.结论 VEGF在急性低氧预适应小鼠海马组织表达增加可能参与预适应的形成及脑保护.