液相芯片快速检测结核耐药基因方法建立

基于Luminex100^TM技术平台,结合多重PCR技术,以5’生物素标记引物为信号指示,在H₉37)RV结核标准株做对照下,对104株结核分枝杆菌分离株的LFP耐药rpoB基因和INH耐药的katG,inhA基因进行检测,并与药敏试验绝对浓度法和测序结果比较.结果表明:液相芯片检出结果与药敏法比较,104株分离株中LFP、INH、多重耐药的检出结果分别为:液态芯片检测73株、50株、48株;药敏检测结果为74株、58株、53株;对比检出率98.6%,86.2%,90.6%.液相基因芯片技术对耐药,耐多药结核的检测,具有特异性高,敏感性强的特点,是检测结核分枝杆菌耐药基因的有效方法,可用于临床检测.     

尘肺结核患者Mycobacterium tuberculosis耐药基因突变研究

研究尘肺结核患者结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)耐药基因突变与耐药性的关系。在97例尘肺结核患者痰中检出MTB菌株28株,采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因突变,并与采用常规药敏试验(AST)法检测的耐药结果进行对比分析。采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因,突变率分别为42.86%(12/28)、42.86%(12/28)和32.14%(9/28),采用AST法检测INH、RFP和SM,耐药率分别为64.23%(18/28)、60.71%(17/28)和53.57%(15/28),两者之间差异均无显著性(P>0.05)。其中多耐药株20例(71.43%),包括耐三种药物12例(42.86%),耐两种药8例(28.57%),单耐药株6例(21.43%),敏感株2例,耐药率92.86%。PCR-SSCP法检出3个基因联合突变8株,与AST法符合率为66.67%(8/12);2个基因突变5株,符合率为62.50%(5/8);单基因突变2株,符合率为33.33%(2/6)。结果表明:PCR-SSCP技术适用于MTB katG、rpoB和rpsL耐药基因突变的筛选,对指导尘肺结核患者临床用药上具有重要意义。     

PCR-SSCP法用于结核分枝杆菌耐药基因检测的价值探究

探究聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)法用于结核分枝杆菌(MTB)耐药基因检测的价值。收集2017年7月～2018年6月从肺结核患者痰标本提取而来的89株MTB菌株,采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL耐药基因突变情况,并与药敏试验结果相比较分析。药敏试验结果显示耐药株72株(80.90%),其中耐链霉素(SM)39株(43.82%),耐利福平(RFP)61株(68.54%),耐异烟肼(INH)50株(56.18%),单耐药株11株(15.28%),耐2种药物株25株(34.72%),耐3种药物株36株(50.00%)。PCR-SSCP法检测显示72株耐药株中共检出64株,katG、rpoB和rpsL基因突变率分别为48.31%(43/89)、57.30%(51/89)、34.83%(31/89),单基因突变25株(39.06%),与药敏试验结果比较,符合率为63.64%(7/11),2种基因联合突变17株(26.56%),符合率为56.00%(14/25),3种基因联合突变22株(34.38%),符合率为61.11%(22/36)。PCR-SSCP法用于MTB耐药基因检测价值较高,可与药敏试验结果联合以指导临床用药。     

北京市63例耐多药肺结核患者特征及治疗情况分析

为了发现现行诊疗方案中可能影响MDR-TB患者治疗依从性及成功率的因素,对2016年3月-2019年11月北京市结核病控制研究所收治的90例DR-TB患者耐药结果、病人特征、治疗选择及临床转归进行统计分析。结果显示：90例DR-TB患者中,63例为MDR-TB,3例为XDR-TB;复治患者多于初治患者（5.3:1）;除INH,RFP外,以对SM耐药率最高（85.71%）,组合耐药以耐INH+RFP+SM病人占比最多（36.51%）;65.08%的MDR-TB患者接受了进一步的抗结核治疗;接受抗结核治疗的患者,50%痊愈;不同性别,年龄,登记类型及抗结核用药史的患者接受进一步抗结核治疗率及治疗完成率之间未发现显著差异;MDR-TB患者抗结核治疗治愈平均时间为739.76天;MDR-TB患者中复治患者比例较高;除耐INH、RFP外,多合并其他药物耐药;患者进一步治疗的比例不高,治疗完成率不高,治疗周期较长。针对MDR-TB患者的治疗,有必要强调治疗前进行药物敏感性检测,根据药敏结果及患者类型制定个性化治疗方案;按照新药分组选药,提高患着治疗依从性及成功率。     

徐州地区结核分枝杆菌耐多药、广泛耐药情况调查

目的:分析徐州地区结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对一、二线抗结核药物耐药情况,了解本地耐多药结核(MDR-TB)、广泛耐药结核病(XDR-TB)所占比例。方法:对627例涂阳肺结核患者的痰标本采用改良罗氏培养法进行结核分枝杆菌培养,同时对培养出的MTB分别进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)、丁胺卡那霉素(Amk)、左氧氟沙星(Lfx)药物敏感性试验。结果:比例法检测627株MTB分离株中,单耐63例,多耐28例,耐多药125例,广泛耐药18例。结论:徐州地区耐药情况严重,尤其耐多药、广泛耐药结核病比例较高,为本地区结核病控制增加难度。     

乙胺丁醇耐药结核分枝杆菌embB基因分析

了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇(EMB)分离株embB基因突变情况,研究其应用价值。通过聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)技术分析98株新疆部分地区结核分枝杆菌临床分离株embB基因。以H37Rv标准株为对照,52株药物敏感株的embB基因SSCP均泳动正常,RFLP和测序分析与对照株相同。46株耐EMB分离株中,28株(60.9%)embB基因SSCP泳动异常;5株RFLP分析异常;测序分析5株均为306位密码子突变,为ATG→ATA。部分结核分枝杆菌耐EMB是由于其embB基因突变所致,PCR-SSCP和PCR-RFLP技术可能成为测定部分结核分枝杆菌EMB耐药简便、快速的方法。     

甘肃省临夏州、甘南州、定西市结核病耐药现状比较分析

目的了解甘肃省临夏州、甘南州、定西市结核菌对一线药物耐药差异,为我省少数民族及贫困地区结核病防治提供科学依据。方法根据(WHO/IUATLD)结核病耐药监测指南,对成功分离的909例结核分枝杆菌菌株,用绝对浓度间接法进行了药物敏感性实验。对临夏州、甘南州、定西市总耐药、初始耐药、获得性耐药、耐多药及耐药顺位进行分析比较。结果临夏州、甘南州、定西市:初始耐药率17.3%、21.8%、23.5%;初始耐多药率8.2%、5.5%、6.3%;获得性耐药率55.0%、31.0%、48.0%;获得性耐多药率31.9%、9.1%、16.0%。临夏州、甘南州、定西市初始耐药及初始耐多药没有差异;临夏州获得性耐药率高于甘南州;临夏州获得性耐多药率高于定西市和甘南州。结论临夏州、甘南州、定西市耐药的发生高于WHO其他监测地区。获得性耐药、耐多药及耐药顺位各区域间存在明显差异,临夏州、甘南州、定西市耐药现状及各区域间的差异应引起卫生主管部门及各级结核病防治机构的重视。     

结核分枝杆菌临床分离株链霉素耐药性的检测及耐药基因突变位点分析

为检测结核分枝杆菌链霉素(streptomycin,SM)耐药性,分析耐药基因突变,探讨DNA测序分析技术在结核分枝杆菌链霉素耐药性检测中的应用价值。采用方法:1、用传统的比例法药敏试验对49株结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药性检测。2、用DNA测序分析技术对49株结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药相关基因Rpsl和rrs的突变位点分析,筛查耐药相关突变位点。3、探讨DNA测序分析技术对结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药性检测的效率。结果:1、传统比例法药敏试验结果显示,49株实验菌株中16株为链霉素耐药株,33株为链霉素敏感株。2、Rpsl基因DNA测序。结果显示:Rpsl基因只存在一个突变位点,为第43位密码子AAG的突变,突变形式为AAG→AGG,氨基酸由赖氨酸(Lys)变为精氨酸(Arg)。rrs基因DNA测序结果发现:rrs基因共存在5个突变位点,分别为第513位碱基A突变为G、第523位碱基A缺失、第598位碱基A突变为G、第599位碱基A缺失、第612位碱基A缺失,其中第513位碱基突变只存在于链霉素耐药株中,其余4个突变位点在耐药株和敏感株中均存在。即初步认为Rpsl基因第43位密码子的突变及rrs基因第513位碱基的突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性有关。3、分析Rpsl基因和rrs基因突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性之间的关系,结果显示:16株链霉素耐药株中13株存在Rpsl基因第43位密码子的突变,1株存在rrs基因第513位碱基的突变。以传统的比例法药敏结果为参照,以DNA测序分析Rpsl基因或rrs基因发现Ppsl基因发生第43位密码子或rrs基因第513位碱基突变为判断菌株耐药的标准,DNA测序分析技术对结核分枝杆菌链霉素耐药性检测的敏感性为87.5%,特异性为96.97%。由此可知,初步认为Rpsl基因第43位密码子的突变及rrs基因第513位碱基的突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性有关。用DNA测序分析结核分枝杆菌Rpsl基因和rrs基因链霉素耐药相关突变,判断结核杆菌链霉素耐药性具有较好的灵敏度和特异性,耗时短,在链霉素耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。     

肠球菌临床耐药性分析及耐药基因vanM在屎肠球菌中的检测

目的了解肠球菌临床分离株耐药性及vanM基因在屎肠球菌的分布情况,为临床合理用药及探讨耐药机制提供依据.方法采用VITEK60全自动微生物分析仪对肠球菌进行鉴定及药敏试验,按NCCLS/CLSI标准判断并统计分析结果;PCR法检测耐万古霉素、替考拉宁菌株中的耐药基因vanM,并对阳性基因进行测序,分析耐药基因与耐药性的关系.结果临床分离肠球菌共506株,其中屎肠球菌277株,粪肠球菌229株.尿液标本来源比例最高,为167株（33%）;粪便标本114株（22.5%）;痰液标本78株（15.4%）;胆汁标本57株（11.3%）;脓液标本54株（10.7%）;其他来源36株（7.1%）.药敏结果显示：肠球菌对大部分临床抗菌药高度耐药,屎肠球菌对β-内酰胺类抗菌药物（氨苄西林）、喹诺酮类（左氧氟沙星）、糖肽类（万古霉素、替考拉宁）的耐药率明显高于粪肠球菌（P〈0.05）.vanM基因在耐万古霉素菌株中的检出率为100%,耐替考拉宁菌株检出率为90%.结论屎肠球菌可引起临床各类感染,屎肠球菌对大多数抗生素的耐药率明显高于粪肠球菌,且呈多重耐药趋势.vanM基因可能在糖肽类药物万古霉素、替考拉宁耐药机制中发挥重要作用.     

通辽地区志贺菌属菌群分布及耐药性研究

目的：了解通辽地区志贺菌菌群分布及耐药情况,为临床合理用药提供科学依据.方法：从腹泻病人的粪便标本中分离到98株志贺菌,用生化反应和血清学方法鉴定分群,用Kirby—Bauer纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验.结果：98株志贺菌中,B群（福氏志贺菌）60株,D群（宋内氏志贺菌）38株,未分离出其他群的志贺菌;98株志贺菌对哌拉西林/他唑巴坦和头孢噻肟/舒巴坦合剂的耐药率明显低于其他β-内酰胺类抗生素,对碳青霉烯类的厄他培南敏感率为100%,对喹诺酮类的环丙沙星和左氧氟沙星耐药率分别为33.76%、25.18%,对氨基糖苷类的庆大霉素和大环内酯类的红霉素耐药率分别为26.27%、33.57%.结论：作者自通辽地区检出的志贺菌,对喹诺酮类、头孢类、氨基糖苷类和大环内酯类有较高的耐药率,治疗感染性疾病应该以药敏试验结果指导临床用药.     

The challenge of new drug discovery for tuberculosis

Tuberculosis (TB) is more prevalent in the world today than at any other time in human history. Mycobacterium tuberculosis, the pathogen responsible for TB, uses diverse strategies to survive in a variety of host lesions and to evade immune surveillance. A key question is how robust are our approaches to discovering new TB drugs, and what measures could be taken to reduce the long and protracted clinical development of new drugs. The emergence of multi-drug-resistant strains of M. tuberculosis makes the discovery of new molecular scaffolds a priority, and the current situation even necessitates the re-engineering and repositioning of some old drug families to achieve effective control. Whatever the strategy used, success will depend largely on our proper understanding of the complex interactions between the pathogen and its human host. In this review, we discuss innovations in TB drug discovery and evolving strategies to bring newer agents more quickly to patients.     

牛源非结核分枝杆菌的分离培养与结果分析

为了了解近几年来长春地区非结核分枝杆菌的流行情况,对长春地区的牛群非典型分枝杆菌的感染情况进行了调查。采集牛颌下淋巴结及肠系膜淋巴结各150份,按2006年中国防痨协会新编写的《结核病诊断实验室检验规程》的标准鉴定方法共分离出14株分枝杆菌,分离率达4.7%。颌下淋巴结阳性5例,分离率3.3%,其中龟脓肿分枝杆菌2株(分离率占14.3%);偶发分枝杆菌3株(分离率占21.4%);肠系膜淋巴结阳性9例,分离率为6.0%,其中牛分枝杆菌2株(分离率占14.3%);新金色分枝杆菌3株(分离率占21.4%);瘰疬分枝杆菌4株(分离率占28.6%)。     

衡阳地区绿脓假单胞菌临床分布特征及耐药性分析

目的了解衡阳地区绿脓假单胞菌的临床分布特征及耐药现状，为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法收集衡阳市南华大学附一医院临床分离的199株绿脓假单胞菌，采用K—B法检测药物敏感性。结果199株绿脓假单胞菌中，以痰液为主，占64．32％（128／199）；其次为伤口分泌物，占9．05％（18／199）。病区来源以ICU检出率最高，占14．07％（28／199）；其次为神经外科和呼吸内科，占9．05％（18／199）。在检测的19种药物中，耐药率超过50％的达13种（68．42％），耐药率最高为氨苄西林／舒巴坦（98．00％），其次为复方新诺明（95．00％）和替卡西林（79．00％），耐药率最低为多粘菌素E（8．00％）。结论临床分离绿脓假单胞菌多来源于呼吸道标本，且耐药现象十分严重。临床应加强对绿脓假单胞菌耐药性监测、合理选用抗菌药物。     

鸡源大肠杆菌分离鉴定与药敏试验

自成都市某养鸡场发生的疑似大肠杆菌病的病死鸡肝脏中无菌采取10份病料,分离鉴定出5株大肠杆菌,经O血清型鉴定,除一株未定型外,共鉴定出4株大肠杆菌的O血清型,分别是O37两株、O84和O100各一株．用18种抗菌药物进行药敏试验,分离菌株耐药性非常严重,以多重耐药为主,最少的耐药10种,最多的耐药17种,其中,对罗美沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氨苄西林、阿莫西林、氧氟沙星、恩诺沙星和复方新诺明100％耐药（5／5）：对甲氧苄啶、四环素和链霉素80％耐药（4／5）;对新霉素、庆大霉素、头孢氨苄、头孢拉定和头孢唑啉60％耐药（3／5）;对阿米卡星20％．耐药（1／5）．结果提示,同一鸡场的发病鸡群存在着多种血清型,耐药谱复杂,且没有一种抗生素对所分离的菌株全部敏感．     

恒河猴和食蟹猴在结核病研究中的应用进展

摘要: 结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性消耗性传染病,位居单一病原体引起死亡的严重传染病之首。结核病 历史悠久,对其记录可以追溯到远古社会。人类同结核病进行了数个世纪艰苦卓绝的斗争,然而,时至今日,结核 病仍是严重危害公众健康的全球性公共卫生问题。因此,研发有效的抗结核疫苗和药物迫在眉睫,而开展这些工 作需要合适的实验动物模型。由于非人灵长类动物在解剖结构、生理生化、免疫和代谢等生物学特性方面与人类 高度相似,应用非人灵长类实验动物对结核病的发病机制、机体免疫反应及相关疫苗和药物的深入研究至关重要, 甚至是不可替代的。本文着重就恒河猴和食蟹猴在人类结核病防治方面的研究进展进行综述。     

成都地区健康犬及其畜主鼻腔金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的分离及耐药性研究

为了解成都地区健康犬及其主人金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的携带率及耐药情况,对收集的鼻腔棉拭子样本308份(犬源和人源各154份)进行相关细菌分离、纯化及鉴定.对获得菌株进行药物敏感性和mec A基因检测.结果表明:犬源和人源金黄色葡萄球菌分离率分别为5.19%(8/154)和13.64%(21/154),犬源和人源中间型葡萄球菌分离率分别为9.74%(15/154)和2.60%(4/154);金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌中mec A检出率分别达20.71%和68.42%;29株金黄色葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶耐药最严重(耐药率R达93.10%),对青霉素G和复方新诺明耐药较严重(R分别为72.41%和58.62%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率范围6.90%~27.59%);19株中间型葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶、青霉素G耐药非常严重(R分别达100.00%和94.74%),对红霉素及复方新诺明耐药较严重(R分别为78.95%和73.68%),对其余药物呈不同水平耐药性(R范围5.26%~63.16%),26.32%中间型葡萄球菌对苯唑西林耐药.不同来源菌株表现出较严重多重耐药性,尤其是耐苯唑西林中间型葡萄球菌呈100.00%多重耐药性.以上结果说明,健康犬和人类鼻腔内可携带金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌,这些菌株已呈较严重耐药性,在这些菌株中mec A基因普遍存在,应加强对这两种细菌流行情况及其耐药性检测.     

540株铜绿假单胞菌12年耐药情况分析

目的：分析导致临床感染的540株铜绿假单胞菌的临床特点及耐药情况,为临床预防感染及合理用药提供依据。方法：回顾性分析12年来540株铜绿假单胞菌的耐药情况。结果：住院患者铜绿假单胞菌检出率明显高于门诊患者,且以重症病房（ICU）尤为显著;下呼吸道感染是主要的临床感染来源;中老年人及慢性病患者,重症患者为易被侵袭人群;铜绿假单胞菌对多数抗生素有较高的耐药性及多重耐药性,且耐药性有逐年上升的趋势。结论：铜绿假单胞菌是临床常见条件致病菌,耐药性严重。治疗中应根据分离株耐药特点选择合理用药方案,避免多重耐药铜绿假单胞菌的出现。     

The catalase-peroxidase gene and isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis.

Tuberculosis is responsible for one in four of all avoidable adult deaths in developing countries. Increased frequency and accelerated fatality of the disease among individuals infected with human immunodeficiency virus has raised worldwide concern that control programmes may be inadequate, and the emergence of multidrug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis has resulted in several recent fatal outbreaks in the United States. Isonicotinic acid hydrazide (isoniazid, INH) forms the core of antituberculosis regimens; however, clinical isolates that are resistant to INH show reduced catalase activity and a relative lack of virulence in guinea-pigs. Here we use mycobacterial genetics to study the molecular basis of INH resistance. A single M. tuberculosis gene, katG, encoding both catalase and peroxidase, restored sensitivity to INH in a resistant mutant of Mycobacterium smegmatis, and conferred INH susceptibility in some strains of Escherichia coli. Deletion of katG from the chromosome was associated with INH resistance in two patient isolates of M. tuberculosis.     

鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了解鸡源致病性大肠杆菌的生物学特性和耐药性,试验通过采集病料、细菌分离培养、16S rRNA基因鉴定、致病性试验、药敏试验等方法。结果表明:分离出的20株细菌的培养特征、镜检特征均符合大肠杆菌特征;16S rRNA基因序列经BLAST比对与大肠杆菌同源性达99.9%～100%,确定20株分离菌为鸡源大肠杆菌;20株大肠杆菌的致病力为40%～100%;10株鸡源致病性大肠杆菌对15种抗菌药物均呈现多重耐药,耐药率为33.3%～93.3%,耐药情况较严重和复杂。