转乙肝表面抗原基因植物疫苗研究的进展

介绍了转基因疫苗生产的原理及方法,综述了转乙肝表面抗原基因植物疫苗的研究进展,探讨了转基因植物研究中所存在的问题及其转基因植物疫苗的优点及前景。     

人体中一个新的乙肝表面抗原结合蛋白SBP的免疫组化及ELISA分析

对人体中一个新的乙肝表面抗原结合蛋白SBP(HBsAg Binding Protein)进行了组成和结构分析.利用免疫组化的方法检测了人脑、肝、前列腺、肌肉、胃以及睾丸等组织的SBP的表达情况,并利用ELISA方法测定了慢性乙型肝炎病人、乙肝康复者以及健康人血清中SBP的含量并作统计学分析.免疫组化结果显示SBP存在于包括肝组织在内的多种组织中.ELISA结果表明,慢性乙肝病人、乙肝康复者以及健康人血清中SBP含量存在显著差异,推测SBP可能与人体对乙肝病毒的易感及耐受有关.     

由TMV54＊10^3蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的 …

通过土壤农杆菌的介导,将烟草花叶病毒的５４＊１０＾３蛋白ｃＤＮＡ转入番茄植物中,得到了转基因植株,这些植株抗卡那霉素,具有胭脂碱合成酶的活性。     

重组乙肝表面抗原结合蛋白(SBP)的制备及功能研究

先前的研究发现乙肝病毒表面抗原结合蛋白(Hepatitis B virus surface antigen binding protein,SBP)能够与乙肝病毒表面抗原结合并促进HBsAg与肝细胞的亲和性,为进一步探索该分子对免疫应答的调节功能,构建了表达载体pBV-SBP,并在E.coliDH5α中表达重组SBP.以Balb/c小鼠为试验对象,分为SBP试验组和对照组,首次注射乙肝疫苗21 d后,测定两组小鼠血清中抗乙肝疫苗抗体的效价.结果显示SBP试验组小鼠血清中抗乙肝疫苗抗体效价的平均值约为对照组的3.0倍(P<0.01),表明SBP能够显著提高乙肝疫苗的免疫效力,在试验期间Balb/c小鼠总体IgG水平未见显著变化.     

乙型肝炎表面抗原基因DNA介导的体液免疫初步研究

用ＣＰＲ技术从纯化的乙型肝炎病毒核酸中扩增出ｐｅｒＳ２－Ｓ基因,并将其定向克隆于真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中,构建成带有完整的乙肝表面前Ｓ２抗原基因和Ｓ基因的重组质粒。重组质粒经酶切及部分序列分析鉴定后,瞬时转梁小鼠Ｌ细胞,ＥＬＩＳＡ法检测到培养上清液有ＨＢｓＡｇ表达。用纯化的重组质粒静脉、肌肉和皮下注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,首次接种质粒ＤＮＡ３周后,血清抗体开始出现,再次加强２周后,阳性     

重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原过程的限制性步骤

考察了重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原（HBsAg）的限制性步骤，发现在对数生长期的中后期，与发酵初期相比，外源质粒的拷贝数下降了40%，此后质粒烤贝数在低水平保持稳定。在发酵过程中添加乙醇胺，抗原基因启动子的转发效率下降了24%，但抗原效价上升了31%，说明HBsAg表达的主要限制步骤在抗原多肽的翻译和颗粒形成的后加工过程。     

生菜遗传转化受体系统的建立及鲑鱼降钙素基因的导入

以散叶生菜大速生(Lactuca sativa var.capatata L.)为试材，以MS为基本培养基。采用不同激素配比，确定生菜高效诱芽培养基为MS 0．1 mg／L6-BA 0．05mg／LNAA；抗生素敏感性试验表明，筛选培养基中适宜的卡那霉素选择压为75mg／L，抑菌剂羧苄青霉素的适宜质量浓度为300mg／L；通过根癌农杆菌介导的叶盘法将鲑鱼降钙素(sCT)基因转入大速生散叶生菜，PCR检测转化率达25．4％。     

PRV外壳蛋白基因转化番木瓜的研究

利用番木瓜亲本材料76号的成熟再生系统,以胚性愈作国组织作为转化材料,与农杆菌LBA 4404共培养后得到抗卡那霉素的再生植株,经PCR,Southern blot检测,证明PRV CP基因已整合进番木瓜基因组。     

农杆菌介导的双价抗虫基因对番茄遗传转化的研究

采用农杆菌介导法将含有苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因(CryIAc)与半夏凝集素抗虫基因(Pta)的高效植物表达载体pCAMBIA3300转入番茄品系Micro Tom的子叶外植体中。经过共培养、除草剂筛选和分化再生,获得了24个具有除草剂抗性的株系。再将转化后的番茄植株经过PCR检测和Southern Blot检测,确定检测后呈阳性反应的株系为8个。通过小菜蛾幼虫初步抗性试验证明,转基因株系表现出较强的抗虫性。实验结果为进一步研究番茄抗虫性和培育抗虫番茄新品种奠定了重要基础。     

组成型表达线粒体小分子热激蛋白提高番茄抗冷性

线粒体小分子热激蛋白不但是线粒体的主要热诱导产物,而且也被低温诱导,线粒体小分子热激蛋白可以提高植物的耐热性,但目前还不清楚它是否与植物的耐冷性有关．本实验利用基因工程方法,将番茄线粒体小分子热激蛋白基因（LeHsp23．8）导入番茄,Northern—blotting及Western—blotting分析结果表明,在35sCaMV启动子的驱动下,导入的线粒体小分子热激蛋白基因呈现组成型表达．转基因番茄呈现耐低温性更强的表型,说明组成型表达线粒体小分子热激蛋白基因能提高番茄的抗冷性．     

含CpG motifs的乙肝表面抗原载体的构建及表达

构建了编码乙肝表面抗原中蛋白的卡那霉素抗性真核表达质粒pVAX-CpGS2S,其中通过PCR克隆了若干CpG motifs到质粒载体中。经酶切鉴定和测序正确后将重组质粒体外转染COS7细胞,ELISA法检测上清液中的HBsAg呈阳性,说明重组质粒pVAX-CpGS2S在体外能够有效表达HBsAg,为探讨CpG motifs克隆入DNA疫苗载体后对体内免疫反应的影响打下基础。     

Expression of hepatitis B surface antigen gene (HBsAg) in Laminaria japonica (Laminariales, Phaeophyta)

A transformation model for Laminaria japonica was established from 1993 to 1998, on the basis of which the transgenic kelp with heterologous gene encoding hepatitis B surface antigen (HBsAg) was obtained by using the micro- particle bombardment transformation method. Results of quantitative ELISA showed that HBsAg in transgenic kelp was 0.529 μg/mg soluble proteins on average and the highest value was 2.497 μg/mg, implying that recombinant HBsAg had natural epitope. Further support for the integration of HBsAg gene into kelp genome was obtained by PCR- Southern and total DNA hybridization. Prospect of kelp bioreactor producing high value materials such as edible HBV vaccine was discussed as well.     

用Ti质粒的双元载体法将抗性基因转入西红柿体细胞

采用Ｔｉ质粒的双元载体法对西红柿（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）的叶片外植体进行遗传转化，经选择培养基的筛选，从抗性愈伤组织细胞中诱导出具有卡那霉素抗性的幼苗．分子杂交证实，卡那霉素抗性基因通过根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）的介导，整合到细胞核基因组中，转化子具有较高的新霉素磷酸转移酶活性，说明抗性基因在受体细胞得到表达．     

RNA interference-mediated inhibition of Hepatitis B Virus replication

Persistent and recurrent infection of hepatitis B virus (HBV) represents one of the most common and severe viral infections of humans, and has caused a formidable health problem in the affected countries. Currently used antiviral drugs have a very limited success on controlling HBV replication and infection. RNA interference (RNAi), a process by which double-stranded RNA (dsRNA) directs sequence-specific degradation of target mRNA in mammalian and plant cells, has recently been used to knockdown gene expression in various species. In this study, we sought to determine whether RNAi-mediated silencing of HBV viral gene expression could lead to the effective inhibition of HBV replication. We first developed RNAi vectors that expressed small interfering RNA (siRNA) and targeted the HBV core or surface gene sequence. Our results demonstrated that these specific siRNAs efficiently reduced the levels of corresponding viral RNAs and proteins, and thus suppressed viral replication. Treatment with siRNA gave the greatest reduction in the levels of HBsAg (92%) and in HBeAg (85%) respectively in the cultured cell medium. Our findings further demonstrated that the RNAi-mediated antiviral effect was sequence-specific and dose-dependent. Therefore, our findings strongly suggest that RNAi-mediated silencing of HBV viral genes could effectively inhibit the replication of HBV, hence RNAi-based strategy should be further explored as a more efficacious antiviral therapy of HBV infection.     

两段发酵法培养重组酿酒酵母生产乙肝表面抗原

通过具有选择性压力合成培养基的使用和大豆蛋白胨的补加,建立了两段法重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原的发酵生产工艺,使总的抗原表达量比原始批培养提高了25%,单位菌体抗原表达量提高了68%。对合成培养基和过程进行了优化,降低了生产成本,使两段发酵法更适合于实际生产。通过测定发酵过程中质粒的稳定性,证明抗原产量的提高是由于质粒稳定性提高所致。     

基于角色权限管理的B/S与C/S模式相结合的教务管理系统安全体系的研究与设计

阐述了目前高校教务管理系统存在的各种安全问题,综合分析各种安全问题出现的原因,论证了建立教务管理系统安全体系的必要性.分析目前比较常用的B/S模式与C/S模式的优缺点,并针对高校教务管理系统的特殊性,提出基于B/S与C/S模式相结合的高校教务管理系统模型,弥补二者单独应用所存在的缺点与不足.同时,为了避免由于服务器配置不当,或者Web设计代码存在缺陷而使系统处于风险中,又在该模型基础上引入角色权限管理的机制,把教务管理的工作结构通过角色映射到系统中,实现系统权限与角色对应,而不是用户本身,最终设计了基于RBAC的B/S与C/S模式相结合的教务管理系统安全体系模型,从而使教务管理系统中信息的安全性得到了保障,同时也保证了系统安全、稳定、快捷的运行.     

基于C/S和B/S混合体系结构的研究生教育管理信息系统

随着研究生教育规模的扩大,研究生教育管理实行信息化势在必行。介绍了＂研究生教育管理信息系统＂的总体结构,采用客户/服务器模式（C/S）和浏览器/服务器模式（B/S）的混合体系结构。     

基于B/S架构的实验室综合管理系统的应用设计

目前,国内高校实验室管理仍采用人工管理手段、或仅采用单机管理系统、或基于局域网.开发计算机实验室综合管理系统,用更科学先进的管理方法管理综合实验室,已成为当前计算机实验室管理中迫切需要解决的问题之一.介绍了基于天津大学综合实验室的需求调研,开发B/S架构的高校实验室综合管理原型系统的设计方案.该系统包括建立实验室开放信息模块、实验教学模块、实验室队伍管理模块、以及仪器设备管理模块;并支持多级别多角色用户,包括系统管理员、实验室管理员、实验员、教师、学生.面向多角色用户,充分包含了综合实验室管理和应用的主流功能.