低能N+注入与γ辐射拟南芥生物学效应的生化遗传分析

通过对N 注入与γ辐射处理后拟南芥(Arabidopsis thaliana)的M1和M2代拟南芥酯酶(EST)和过氧化物酶(POD)活性的分析,以及POD和过氧化氢酶(CAT)同工酶电泳图谱的分析发现,离子注入与电离辐射的诱变效应具有可遗传性,并且2种处理的剂量-效应关系明显不同,N 注入的注量-效应关系呈特有的类"马鞍型",γ射线辐射的剂量-效应关系呈"直线型",并且2种处理的植株变异率也明显不同.随机扩增多态性DNA(RAPD)的初步分析表明,2种处理M1和M2代基因组DNA变异的电泳条带是一致的.     

低能N+注入诱导拟南芥变异及突变体特异表达cDNA克隆

低能N+离子注入拟南芥引起处理当代(M0)种子的萌发率降低,并且降低的幅度随剂量的升高而增大.较高剂量离子处理的M2代植株中出现了较明显的表型变异,包括黄化、半致死、形态变异以及开花结实性状的改变等.对M2代植株进行随机引物扩增多态性DNA(RAPD)分析的结果表明,离子注入处理的拟南芥中有RAPD条带的缺失或增加,且变化频率与离子注入的剂量相关,而对照未发现有明显变化.80次剂量处理的M1代植株中有一株特别矮小,为典型的矮化变异体.以它的一个稳定的M6代矮化突变体T80II为材料,用PCR增效的减法杂交技术,构建减法文库,克隆特异表达的cDNA片段,其中1个712 bp的片段与GRF基因有部分同源性.     

近交系小鼠微卫星DNA引物的筛选和Tm值优化研究

目的通过对近交系小鼠微卫星引物的筛选和Tm值优化研究,以探索小鼠DNA多态性检测方法。方法随机选用32对位于小鼠不同染色体的微卫星引物,用PCR扩增方法对常用C57BL/6、C3H、BALB/c、DBA/2、129、FVB及SCID近交系小鼠DNA多态性进行扩增和电泳分析,并对其中25对引物的Tm值进行优化。结果 25对引物可稳定扩增,2对引物在不同品系小鼠间表现为单态性,23对引物在不同品系间呈多态性,10对引物呈显著多态性(3～4个态性)。结论所筛选和优化的25对微卫星引物,对不同品系小鼠DNA可稳定扩增,其电泳结果具有较高的DNA多态性,可反映不同品系小鼠的遗传概貌。     

分子标记及AFLP技术

分子标记类型可以基因表达的结果为基础,对基因的间接反映;分子标记则是DNA分子碱基序列变异的直接反映.早期利用限制性内切酶,酶切生物体DNA后来检测不同遗传位点等位变异(RFLP)和以一个碱基顺序随机排列的寡核苷酸序列为引物,利用对基因组DNA随机扩增来鉴别DNA多态性(RAPDs).真核生物基因组中普遍存在的重复序列产生了微卫星(microsatellites)标记技术.而RFLP与RAPDs有机结合形成了有着更为广阔的应用前景的AFLP技术.SNP标记利用大多数基因位点上都会有若干个等位型(alleles)为DNA芯片技术应用于遗传作图提供了基础.     

四个近交系斑马鱼微卫星多态性研究

目的研究微卫星DNA多态性在四个近交系实验用斑马鱼遗传监测中的应用。方法选取斑马鱼不同染色体上的3个微卫星位点,应用PCR技术对常用的4种近交系(AB,TU,WIK,LF)斑马鱼进行了微卫星DNA多态性分析。结果3个微卫星DNA具有稳定扩增效果在不同品系之间表现显著多态性。结论运用所筛选的3个位点进行微卫星多态性分析,能够快速、经济地对AB,TU,WIK,LF四种品系斑马鱼进行遗传监测。     

南北五味子随机扩增DNA多态性(RAPD)指纹图谱研究

目的建立南北五味子随机扩增DNA多态性标记((random amplified polymorphic DNA,RAPD)指纹图谱,为南北五味子的鉴别提供可靠依据.方法采用CTAB法从不同产地的南北五味子样品中提取基因组DNA并纯化,将南北五味子基因组DNA进行随机DNA多态性扩增.结果北五味子和南五味子基因组DNA随机引物PCR扩增产物的差异以不同条带数目和条带亮度得已验证;同时体现出北五味子种内变异较小,南五味子种内变异较大.结论 RAPD技术为南、北五味子的鉴别提供一种简单、有效、可信度高的方法.     

滩羊体大品系遗传标记的研究

采用RAPD(Rondom Amplified Polymorphic DNA)技术,利用混合基因池(DNA pool)法,对滩羊体大品系、普通品系进行了DNA多态性分析,从100种具有10个碱基的随机引物中,筛选出84种引物在滩羊群体基因组中共扩增出358条带,其中22种引物的扩增产物表现为多态(占22％),且扩增出32条有差异的条带,占总带数的8.94％;62种引物的扩增产物表现为单态(占62％)。滩羊体大品系的特异性条带有5条,而普通品系的特异性条带有7条,这些特异标记可以用来鉴定滩羊的两个品系;滩羊体大品系与普通品系间的遗传距离为0.136±0.087,表明两品系之间的亲缘关系很近。     

离子束介导的小麦变异株系染色体行为分析

经低能离子束将大豆DNA导入新麦九号后获得了4个性状和蛋白质含量基本稳定遗传的第六代变异株系05-5-1,05-49-1,05-61,05-8-1,对其染色体畸变及有丝分裂指数进行了分析和研究.结果表明:1.低能离子束介导的4个变异株系小麦的有丝分裂指数均明显高于对照组.2.离子束介导的变异株系小麦染色体畸变率与对照组...     

HFJ和MIJ近交系大鼠RAPD特征与比较研究

目的 利用人工合成的PCR随机引物,对本单位培育的HFJ和MIJ近交系大鼠基因组DNA进行扩增,建立 HFJ和MIJ大鼠RAPD扩增特征图谱;选择常用近交系大鼠Lewis和F344作为对照品系,观察HFJ和MIJ大鼠与 对照品系大鼠的RAPD多态性。方法 用酚-氯仿法分别提取4个不同品系大鼠的基因组DNA,从60条随机引 物中筛选能够得到清晰扩增条带的30条引物,对HFJ和MIJ大鼠DNA进行扩增。再从30条引物中随机选择12 条,对4个品系大鼠基因组DNA扩增,并对扩增条带多态性比较分析。结果 30条引物对HFJ和MIJ大鼠DNA 进行扩增,均能获得1～7个较清晰条带,除引物0～08外,条带的分子大小均在200～1 100 bp之间,两品系的引 物0-08扩增结果,均在2 000 bp以上的近原点处扩增出1条清晰的条带。HFJ和MU大鼠品系内个体间和两个品 系之间,扩增的结果均完全一致;用12条随机引物对4个品系大鼠同时扩增,HFJ和MIJ大鼠扩增结果一致,与 Lewis和F344比较,有5个引物出现差异条带。结论 用30条随机引物建立了HFJ和MIJ大鼠RAPD扩增特征性 图谱。由于两品系来源于同一对Wistar封闭群大鼠,虽然遗传特性有显著差异,但是在所选30条引物扩增时,未 发现多态性。两品系与Lewis和F344之间存在多态性条带     

荞麦RAPD指纹图谱的建立及在品种鉴定中的应用

从9个荞麦品种的幼苗叶片提取DNA,使用CTAB和PVP并结合纯化过程中在高盐(N aC l)下沉淀DNA,可除去样品中影响DNA纯度的多酚类化合物和多糖.共使用13个随机引物,扩增的DNA片段大小为3.0K b~0.8 K b.从9个材料的13组RAPD指纹图谱上可以看出甜荞和苦荞的图谱差异很大(相同条带数占总条带数的比例为21%).在13个引物中有10个引物(占全部引物的77%)在甜荞的RAPD图谱上显示了品种间的DNA多态性,而苦荞只有6个引物(占全部引物的46%)产生了这种多态性.从荞麦RAPD指纹图谱上得到的特异带可以作为品种鉴定的分子标记.     

Genetic relationships among Chinese and American isolates of Phytophthora sojae assessed by RAPD markers

The genetic diversity of three geographic populations of Phytophthora sojae from China and the United States was determined using random amplified polymorphic DNA （RAPD）. The purpose was to explore genetic relationships among Chinese and American isolates of the organism. 21 random primers were selected among 200 random primers screened. A total of 223 reproducible RAPD fragments were scored among 111 individuals, of which 199 （89.23%） were polymorphic. Analysis of genetic variation showed that there existed higher genetic variation in the United States population in comparison to the Chinese populations. Nei＇s genetic identity and principal component analysis indicated that the populations of Fujian and United States are closer to each other than to Heilongjiang populations. Shannon-Wiener diversity index revealed that the United States populations have a higher genetic di- versity than that of Chinese populations. These data are in support of the hypothesis that P. sojae in the United States might not have been introduced from China.     

冠突伪尾柱虫休眠与营养细胞线粒体DNA的比较

为研究纤毛虫休眠状态下线粒体的行为特征及功能与纤毛虫形成包裹的关系，采用RAPD 技术对冠突伪尾柱虫休眠与营养细胞线粒体DNA进行了比较。结果表明，在选用的15条随机引物中，有5条引物的扩增产物完全相同，其余10条引物的扩增产物各有差异。15条引物共扩增出84条片段，其中共享片段为28条，共享度为66.7％。这说明休眠细胞线粒体DNA 与营养细胞线粒体在很大程度上是一致的，但仍存在一定差异，据此推测细胞在形成包囊的过程中，某些线粒体DNA结构可能发生了改变，这些改变可能与线粒体在包囊内的行为特征及功能有关。     

RAPD技术对东北地区大豆的初步研究

采用ＲＡＰＤ技术对东北地区不同类型大豆共３２份材料进行了分析，以野生种０１６５０，半野生种０１７７１和栽培种吉林２１号大豆的基因组ＤＮＡ为模板，对Ｏｐｅｒｏｎ公司的Ａ，Ｆ，ＧＨ和Ｋ组共１００个随机引物进行了筛选，依据扩增结果选用了１９个引物对３２份大豆材料进行了扩增，所获得的８２个多态片段可将供试材料全部区分开。     

草鱼基因组随机扩增多态性引物及多态性位点的筛选

为了建立草鱼基因组DNA多态性分析的指标体系，应用RAPD技术，从180条10碱基随机引物中筛选出了31条能扩增出多态性DNA片段的引物。用这31条多态性引物共扩增出了327条重复性好、带型清晰、分辨率高的谱带。扩增产物的片段大小范围在400—2000bp之间。单一引物扩增条带为5—14条。用这些多态性引物在草鱼基因组DNA中检测到了93个多态性位点，并对这些多态性位点上的等位基因频率进行了统计分析。这31条多态性引物和所检测到的93个多态性位点初步为草鱼基因组的多态性分析提供了可靠的分析指标体系。     

茄子雄性不育株和可育株的胞质DNA和核DNA差异分析

以茄子(Solanum melongenaL)雄性不育株“正兴1号”(S)和可育株(F)的总DNA为模板,对60个随机引物进行了筛选,找到5个其RAPD(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)扩增产物在茄子雄性不育系和对照材料间存在稳定差异的引物．将该5个引物同时扩增总DNA、核DNA和线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)．以总DNA为模板时得到多态性片段9个,以核DNA为模板时得到5个,以mtDNA为模板时得到9个．以总DNA为模板时得到的9个扩增片段中,有5个在总DNA和mtDNA中同时出现,而在核中没有出现,即认为来自mtDNA,这5个片段中,有4个来自可育株,1个来自不育株,说明不育株和可育株在mtDNA上存在差异;有4个片段同时出现在以总DNA和核DNA为模板的扩增中,但在以mtDNA为模板的扩增中却没有出现,认为是来自核DNA,这4个片段中,有3个来自不育株,一个来自可育株,说明可育株和不育株在核DNA上也存在差异．结果初步表明：新发现的茄子雄性不育可能是核质相互作用所引起．     

杜氏藻种间关系RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对7株杜氏藻,即：D.salina、D.bardawil、D.minuta、D.bioculata、D.parva、D.peircei和D.primolecta进行了遗传多态性分析。用30个10聚随机引物进行多态性扩增和筛选,其中23个引物（76.67%)可获得清晰的多态性条带。选择其中能够得到清晰、重复性良好的18个引物共扩增产生150条可区分的DNA条带。根据种间Nei遗传相似系数计算分析,构建杜氏藻属部分种的聚类分析图。分析结果表明：D.salina、D.bardawil和D.minuta聚为一类,D.bioculata、D.parva、D.peircei和D.primolecta聚为另一类。由于两类之间存在较远的亲缘关系,把这两类杜氏藻称为两个种可能更合适。     

青龙本地山羊随机扩增多态DNA与体重体尺相关性研究

利用９ 种随机引物研究了青龙本地山羊的随机扩增多态ＤＮＡ,并利用ＳＰＳＳ程序对多态标记进行了方差分析。结果表明,青龙本地山羊基因组ＤＮＡ 多态频率为４８．６５％ 。多态标记Ｋ０９Ｂ、Ｐ１４Ｄ和Ｑ１４Ｄ及其互作效应与体重和体尺有显著相关     

皖西白鹅遗传多样性的RAPD分析

用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术对皖西白鹅产区内１１个不同地点的２４只个体一进行遗传多样性分析。从３４个随机引物中筛选出的１２个引物对所有个体的总基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增。共扩增出８７个ＤＮＡ片段,其中的２２个多态性片段,计算了各多态性片段在群体中分布的频率及各个体间的遗传距离指数。同时根据遗传距离指数对它们进行了聚类分析。作为家养动物的个品种,皖西白鹅的遗传多样性程度较高。     

唐山奶山羊随机扩增多态DNA与体重体尺相关性研究

利用１２种随机引物研究了唐山奶山羊的随机扩增多态ＤＮＡ,并利用ＳＰＳＳ程序对多态标记进行了方差分析。结果表明,唐山奶山羊基因组ＤＮＡ多态频率为５１．９２％。多态标记Ｋ０２Ａ、Ｋ０３Ａ、Ｑ０５Ｃ、Ｑ１４Ｄ及其互作效应对体重和体尺有显著影响。     

基于RAPD的藏马鸡亲缘关系的研究

为了测定7只笼养藏马鸡的亲缘关系,利用随机扩增多态DNA技术对7个个体进行了分析.选用53个10bp的随机引物对每只藏马鸡的基因组DNA进行扩增,获得14个有效引物,并得到226个扩增片段.根据聚类分析所得到的树状图,确定了7只藏马鸡的亲缘关系,证明RAPD可以用来鉴定亲缘关系.